【正文】 人體必需氨基酸為 ％，賴氨 酸、精氨酸的含量特別高。 杏鮑菇的藥用價值 杏鮑菇中含有豐富的多糖物質(zhì)，多糖又稱多聚糖，是由 單糖縮合成的多聚物，廣泛存在于高等植物、動物和微生物中 [5]。食用菌多糖具有多種生物活性，包括：抗腫瘤 [6]、調(diào)節(jié)免疫、降血壓、降血脂、降血糖、健胃保肝、抗病毒，除此之外它還具有抗氧化 [7]、延緩衰老、抗感染、抗輻射、抗水腫 、抗疲勞和修復(fù)損傷組織細胞等方面的功效。 杏鮑菇的經(jīng)濟價值 杏鮑菇在國內(nèi)開發(fā)生產(chǎn)時間較 晚 ，但 發(fā)展速度很快 ，由于栽培技術(shù)難度較小、產(chǎn)量較高等原因，常規(guī)生產(chǎn)的杏鮑菇市場價格一直偏低，一般均在每千克 46 元，超市售價一般為每千克 810 元；夏季反季節(jié)栽培的產(chǎn)品，一般在每千克 10 元左右，最高曾達 18 元，而且貨源很少。 國內(nèi)外杏鮑菇液體菌種的研究現(xiàn)狀 液體菌種優(yōu)勢 “ 液體菌種 ” 是用液體培養(yǎng)基，在生物發(fā)酵罐中，通過深層培養(yǎng)（液體發(fā)酵）技術(shù)生產(chǎn)的液體形 態(tài)的食用菌菌種 。 “ 液體制種 ” 實質(zhì)是利用生物發(fā)酵工程生產(chǎn)液體菌種，取代傳統(tǒng)、樸素的固體制 種；利用生物發(fā)酵原理，給菌絲生長提供一個最佳的營養(yǎng)、酸堿度、溫度、供氧量，使菌絲快速生長，迅速擴繁，在短時間達到一定菌球數(shù)量，完成一個發(fā) 酵周期 ，即培 養(yǎng)完畢 [13]。 液體菌種沒有 級別之 分，也 就是說 液體菌種既可以做為母種接原種，也可以做為栽培種直接接栽培袋，簡化了生產(chǎn)工藝。 液體菌種生產(chǎn)需經(jīng)過篩 選、提純，屬純菌種；在生產(chǎn)過程中設(shè)備封閉運行，是一個選優(yōu)復(fù)壯的過程，屬純培養(yǎng)。 采用液體菌種從制種到菌絲長滿栽培袋只需 30天左右的時間，從制種到出菇大部分品種只需 1 個月，整個生產(chǎn)周期一般也就是兩個月。 用液體菌種無論是生產(chǎn)栽培種還是栽培袋，其菌種成本就 2－ 3 分錢。 采用液體菌種接種后 24 小時萌發(fā)，菌種萌發(fā)速度超過雜菌生長速度，雜菌污染少。 液體菌種整個生產(chǎn)過程都是在一個罐體內(nèi)完成，按鍵操作，既成倍降低了生產(chǎn)、管理費用，又節(jié)省人工，輕松制種。 采用液體菌種的產(chǎn)品可以早上市 2 個月以上，早上市與晚上市在效益上差的可就大了。 國外 杏鮑菇液體菌種 研究現(xiàn)狀 20 世紀(jì)中期，微生物液體深層培養(yǎng)（發(fā)酵）技術(shù)迅猛發(fā)展，從而形成了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、食品發(fā)酵工業(yè)。近年來，日本 韓國等亞洲國家對香菇、金針菇、平菇液體菌種的研究應(yīng)用已經(jīng)很深入，已有許多菇廠開始用中小型發(fā)酵罐生產(chǎn)液體菌種進行栽培。 1979 年上海師院的楊慶堯教授開始對香菇、金針菇等培養(yǎng)液體菌種，并進行栽培試驗。目前已見的 液體菌種生產(chǎn)與應(yīng)用的食用菌品種，包括平菇、香菇、黑木耳、雙孢菇等常規(guī)品種和白靈 菇、杏 鮑菇、 真姬菇等 珍稀品 種約五 十多個品 種 [11]。雖然有資料表示液體菌種在 04℃ 保存2— 3 個月仍可作菌種，但也有試驗顯示液體菌種 04℃ 保存超過 3天，菌種的生活力就有所下降，萌發(fā)慢，菌袋易污染。液體菌種生產(chǎn)設(shè)備投資大，一家一戶小規(guī)模生產(chǎn)，購買設(shè)備不劃算；培養(yǎng)設(shè)備需要有電源，而偏遠農(nóng)村常常停電；液體菌種需要良好的培養(yǎng)環(huán)境，刨造良好的環(huán)境也需要較高的投入。一些小型食用菌生產(chǎn)廠家和一般菇農(nóng)很難生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的液體菌種應(yīng)用于生產(chǎn)。 因此，目前我國液體菌種只在個別大規(guī)模、工廠化的食用菌生產(chǎn)單位使用 ， 而我國目前食用菌生產(chǎn)的現(xiàn)狀是分散的、小規(guī)模的副業(yè)式生產(chǎn)占據(jù)主體，因此科研和生產(chǎn)仍存在著差距，以致成果無法推廣。對杏鮑菇的菌種進行液體培養(yǎng)，單位體積液體培養(yǎng)基中生產(chǎn)菌絲速度快，生產(chǎn)量大，只需 4— 5 天即可生產(chǎn)幾升到幾十升甚至更多。液體菌種在固體培養(yǎng)基上萌發(fā)快、定植早、成品率高。 但是液 體菌種 質(zhì)量 是影 響萌發(fā)出河南科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計（論文） 5 菇的關(guān)鍵因素之一 ，采用質(zhì)量好的菌種無疑能提高出菇產(chǎn)量。 2 試驗材料與方法 試驗材料 供試菌種 杏鮑菇菌株，由河南科技大學(xué)提供。 所需藥品 葡萄糖，蛋白胨，磷酸二氫鉀，硫酸鎂，維生素 b，蒸餾水 , 醋酸，醋酸鈉，羧甲基纖維素鈉，可溶性淀粉，酒石酸鉀鈉， 3， 5二硝基水楊酸，苯酚，氫氧化鈉，磷酸氫鉀，鄰聯(lián)甲苯胺 ，鄰苯二酚等。 試驗試劑及配制 %可溶性淀粉溶液（ 、 ）； %的羧甲基纖維素鈉溶液（用 ph=、 制）； ， ph= 的磷酸鹽緩沖液； ， ph= 的醋酸緩沖液。配制方法：現(xiàn)將馬鈴薯洗凈去皮， 再稱取 200g 馬鈴薯切成小塊， 加水煮爛。 試驗培養(yǎng)基：采用 黃豆粉培養(yǎng)基 [16]， 黃豆粉 30g，葡萄糖 15g，蛋白胨 1g, 磷酸二氫鉀 ， 硫酸鎂 ， 維生素 b 5mg， 水 500ml。 一級菌種的制備 ： 母種活化將保存的菌種轉(zhuǎn)接到無菌的斜面培養(yǎng)基上，放入 25℃ 左右恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 7— 10 天，得到斜面母種。 一級搖瓶培養(yǎng)基：葡萄糖 30g，蛋白胨 2g，瓊脂 4g， 磷酸二氫鉀， 硫酸鎂 ， VBl10mg，水 1000ml， 121℃ 滅菌 20分鐘 [18]。 DNS 試劑配制 ：酒石酸鉀鈉 ，溶于 50ml 蒸餾水中，加熱，于熱溶液中依次加入 3， 5二硝基水楊酸 ， ，苯酚 ，攪拌至溶，冷卻后用蒸餾水定容至 100ml，貯于棕色瓶中，室溫保存。否則會產(chǎn)生難溶的沉淀，導(dǎo)致配制溶液失敗。 測定方法 菌球直徑的 測定 取 lml 培養(yǎng)液放入培養(yǎng)皿中，按 lml培養(yǎng)液含菌球大小的數(shù)量比，取 20 個菌球在培養(yǎng)皿中排成一列，測總長度，然后計算單個菌球直徑，取 3 次求平均值 [19]。 菌球密度的測定 將培養(yǎng)好的液體菌種搖勻后，取 lml培養(yǎng)液于培養(yǎng)皿中， 培養(yǎng)皿下墊方格紙 直觀計數(shù)，取 3次求平均值。 淀粉酶活性的測定 在試管加入 %可溶性淀粉溶液（ 、 沖液） ，再加入稀釋 10 倍粗酶液 ，混勻，于 38℃ 水浴保溫 30min，取出后立即加入 DNS 試劑 ，煮沸 5min 后取出，冷卻后加入蒸餾水 ，混勻，測 520nm 處 OD 值，以煮沸滅活 15min的酶液作對照 [ 20]（設(shè)置三個重復(fù)）。 羧甲基纖維素酶（ CMC 酶）活性的測定 在試管中加入 %的羧甲基纖維素鈉溶液（用 ph=、） ，加稀釋 10 倍的粗酶液 ，50℃ 水浴保濕 10min，取出后立即加入 DNS 試劑 ，煮沸 5min，取出，冷卻后加入蒸餾水 ，混勻，測 520nm 處的 OD 值，以煮沸滅活 15min 的酶液作對照（設(shè)置三個重復(fù)）。 多酚氧化物酶活性測定 先往試管中加入 ， ph= 的磷酸鹽緩沖液 ，再加入 ，再加稀釋 10 倍的 粗酶液 ，28℃ 保溫 30min，測 400nm 處 OD 值，以煮沸滅活 15min 的酶液作對照（設(shè)置三個重復(fù)）。 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 8 漆酶活性的測定 先往試管中加入 ， ph= 的醋酸緩沖液 ，再加入 ，再加入稀釋 10 倍的粗酶液 ，保溫 30min，測 600nm 處光密度（ OD 值），以煮沸滅活 15min 的酶液作對照（設(shè)置三個重復(fù)）。 培養(yǎng)基 pH 的測定 用玻璃棒蘸取少量培養(yǎng)基浸濕精密 pH 試紙，與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對比讀數(shù)。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時間（天）為橫坐標(biāo) ， 培養(yǎng)基 pH 為縱坐標(biāo)，繪制曲線。 3 結(jié)果與分析 不同培養(yǎng)時間下的菌球直徑變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天起每天上午在超凈工作臺上吸取 1ml 培養(yǎng)液放入培養(yǎng)皿中，取 20 個 菌球排成一列，測總長度，然后計算單個菌球直徑 [21]。 由圖 1 可知： 杏鮑菇液體菌種在接種 后菌球直徑變化曲線為 V型，在前六天緩慢變小，第 六天達到最小，單個菌球最小為 ，第七天以后又逐漸增大。菌球直徑越小說明液體菌種流動性越強，菌種生長越迅速。隨著培養(yǎng)時間的延長，由于營養(yǎng)物質(zhì)的消耗和代謝廢物的增多，使得菌種競爭加劇，生長環(huán)境變惡劣，菌種分裂增殖速度降低甚至停止，菌球逐漸長大。 013 4 5 6 7 8 9Trianing daysFungus ball diameter（mm）0 0 圖 1 杏鮑菇液體菌種菌球直徑變化曲線 Figure 1 Pleurotus eryngii fungus ball diameter liquid strain curve 不同培養(yǎng)時間下的菌球密度變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天起每天上午在超凈工作臺上吸取 1ml 培養(yǎng)液放入培養(yǎng)皿中，觀察菌球個數(shù) ，試驗結(jié)果見圖 2。第七天以后菌球密度開始下降，到第九天 只剩下不到最大密度的一半。培養(yǎng)初期，培養(yǎng)基內(nèi)物理化學(xué)性狀較適合菌種生長菌種開始大量增殖，菌球密度快速增加。到后期，有些菌球開始老化自溶，所以菌球密度降低。所測結(jié)果 見圖 3。培養(yǎng)基初始pH 為 ，而第四天之前 pH 一直穩(wěn)定在 ，這說明在前第四天內(nèi)培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)消耗較少，第五天后隨著培養(yǎng)時間的增加，液體培養(yǎng)基 PH 逐漸降低，但幅度不是很大，第八天以后培養(yǎng)基 pH 下降到 以下 。但當(dāng)培養(yǎng)基 pH 在 以下時菌種開始生長不良。 河南科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計（論文） 11 01234563 4 5 6 7 8 9Trianing dayspH 圖 3 杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基 pH 變化曲線 Figure 3 Pleurotus eryngii liquid culture medium pH curve 不同培