【正文】 菇營養(yǎng)豐富，每 100g杏鮑菇 干物質(zhì)中含粗蛋白 ，含粗脂肪，符合高蛋白低脂肪的營養(yǎng)食品要求。礦物元素也很豐富，人體必需的微量元素鈣和鎂的含量特別高。 金屬元素 2 鐵元素在生物體中的作用 鐵氧化還原蛋 白屬于穩(wěn)定的鐵 硫蛋白 ,存在于葉綠體中 ,是光合電子傳遞鏈中第一個 穩(wěn)定氧化還原化合物 ,是最初的電子受體。 鐵是卟啉分子的結(jié)構(gòu)組分 ,諸如細(xì)胞色素、鐵血紅素、羥高鐵血紅素和豆血紅蛋白均參與葉綠體中光合作用和線粒體中呼吸作用兩個代謝過程中的氧化還原反應(yīng)。 植物中大部分鐵是以鐵磷蛋白的形式儲存 ,稱為植物鐵蛋白。葉子中植物鐵蛋白儲存作為形成質(zhì)體用 ,是進(jìn)行光合作用所必需的 [6]。固氮酶在固氮微生物中處于 N2固定過程中心，在大豆中 ,鐵也能部分取代鉬作硝酸還原酶的金屬輔助因子 [6]。主要構(gòu)成果膠酸鈣、鈣調(diào)素蛋白、肌醇六磷酸鈣鎂等 , 在液泡中有大量的有機酸鈣 , 如草酸鈣、檸檬酸鈣、蘋果酸鈣等 [7]。鈣離子能降低原生膠體的分散度 , 調(diào)節(jié)原生質(zhì)的膠體狀態(tài) , 使細(xì)胞 充水度、粘滯性、彈性以及滲透性等適合于正常作物生長。鈣是一些重要酶類的活化劑 [7]。如鈣可與產(chǎn)生的草酸形成草酸鈣結(jié)晶 , 避免草酸過多的不良影響 [7]。固氮細(xì)菌大量需要鈣 [8]. 選題的意義 杏鮑菇是一種珍 稀食用菌 , 雖然人工栽培已獲得成功 , 但其菌絲生長緩慢 , 生物轉(zhuǎn)化率偏低 [9]。 通過研究 Fe、 Ca兩種金屬元素對杏鮑菇菌絲生長的影響，得到最適合杏鮑菇菌絲生長的含 Fe、 Ca金屬元素濃度的培養(yǎng)基對提高杏鮑菇的產(chǎn)量具有重要意義，另外將為進(jìn)一步優(yōu)化杏鮑菇菌絲培養(yǎng)基的研究提供可靠的實驗數(shù)據(jù)。 菌種 杏鮑菇母種 湘南學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系微生物實驗室提供 實驗方法 菌種的純化 斜面培養(yǎng)基制作 配制 PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮） 200g 加水 1000ml 煮沸 15～ 20min 后，用 4 層紗布過濾將濾液煮沸加入瓊脂 20g，葡萄糖 20g，補足無菌水至 1000ml，調(diào)節(jié) PH 至 5～ ，趁熱分裝至試管中，每管 10ml，進(jìn)行加塞包扎。放回內(nèi)層鍋 ,并裝入待滅菌物品，旋緊滅菌鍋上的螺栓 ,使螺栓松緊一致 ,勿使漏氣。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到 時 , 約為 121℃ ,控制熱源 ,維持壓力 25min. 切斷電源使溫度自然下降 ,當(dāng)壓力表的壓力降至 0 時 ,打開排氣閥 ,排氣完畢后 ,旋松螺栓 ,打開蓋子 ,取出滅菌物品。（斜面培養(yǎng) 4 基最好提前幾天制作，防止水蒸氣過重影響菌絲生長） 無菌接種及培養(yǎng) 無菌條件下，在超凈工作臺上從斜面母種中取黃豆粒大小的菌種塊（帶原培養(yǎng)基），在酒精燈下接種于用 PDA 培養(yǎng)基制作的斜面培養(yǎng)基中，置 25℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)，培養(yǎng) 2 天后菌絲萌發(fā)，約 15 天后試管內(nèi)長滿菌絲， 檢查有無雜菌 [11]。 菌種的活化 活化菌種 培養(yǎng)皿的制作 配制 PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮） 200g 加水 1000ml 煮沸 15～ 20min 后，用 4 層紗布過濾將濾液煮沸加入瓊脂 20g，葡萄糖 20g，補足無菌水至 1000ml，調(diào)節(jié) PH 至 5～ ，趁熱分裝至試管中，每管 15ml，進(jìn)行加塞包扎 ,高壓蒸汽滅菌。 在無菌操作下，在超凈工作臺內(nèi)將滅好菌的試管冷卻至 50～ 60℃時倒入冷卻后的培養(yǎng)皿內(nèi)（實驗 所用平板采用直徑 9cm 的培養(yǎng)皿，裝量 15ml/皿），冷卻靜置待用。 鐵元素對杏鮑菇菌絲生長的影響 配制 鐵元素母液：精確稱量氯化鐵 1g，用熱水溶解，然后倒入 1000ml 容量瓶中，定容至 1000ml 為 1mg/ml 的鐵元素母液； 不同濃度鐵元素溶液的的配制：用移液管從 1mg/ml 的氯化鐵水溶液中分別取11ml,12ml,13ml 于貼好標(biāo)簽的 100ml 的容量瓶中，分別定容至 100ml，得到 1100ug/ml ， 1150ug/ml， 1200ug/ml， 1250ug/ml， 1300ug/ml[13] 5 個濃度的鐵元素溶液。 不同濃度鐵元素培養(yǎng)基的制作： 分別用移液管取 1ml 各濃度的氯化鐵溶液和蒸餾水于貼好標(biāo)簽的燒杯中，加培養(yǎng)基至 50ml,調(diào) pH 值 5～ 。試管分別貼好標(biāo)簽，高壓蒸汽滅菌。 接種： 在超凈工作臺內(nèi)，無菌操作，將活化好的實驗菌種用直徑為 的打孔器沿同心圓打塊 [14]，用接種鏟定量接種于實驗所用培養(yǎng)基平板中央。 觀察記錄， 定時觀測菌絲體的生長情況，記錄菌落直徑累計長度，并填寫下列表格，同時 觀察菌絲濃密和菌落形態(tài)。 由測得的數(shù)據(jù)可以分別求出每組培養(yǎng)皿在不同培養(yǎng)時期時的平均直徑，并填入表內(nèi)，可以看出：在一定范圍內(nèi)，不同濃度的鐵離子加入 PDA 培養(yǎng)基內(nèi)都可以使杏鮑菇菌絲菌落直徑增大，當(dāng)鐵離子濃度為 1150ug/ml 時，這種作用效果最明顯，當(dāng)超過這個濃度時作用效果變?nèi)酢? 配制 PDA 培養(yǎng)基： 馬鈴薯（去皮） 200g 加水 1000ml 煮沸 15～ 20min 后，用 4 層紗布過濾將濾液煮沸加入瓊脂 20g， 葡萄糖 20g，補足無菌水至 1000ml。然后趁熱分裝入試管，每管大約 15ml，每個濃度裝 3 支試管。 在無菌操作下，在超凈工作臺內(nèi)將滅好菌的試管冷卻至 50～ 60℃時倒入干熱滅菌冷卻后的培養(yǎng)皿內(nèi)，貼好標(biāo)簽，冷卻靜置待用。 將接種后的平板置 25℃ 恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng) 10 天。培養(yǎng) 20天后，結(jié)束培養(yǎng)。 培養(yǎng)皿編號 菌落直徑長度（ cm） 3d 6d 9d 12d 15d 1 2 3 平均 培養(yǎng)皿編號 菌落直徑長度（ cm） 3d 6d 9d 12d 15d 4 5 6 平均 3 ② 300ug/ml ① 對照組 表組 2鈣離子對杏鮑菇菌絲生長的影響 8 培養(yǎng)皿編號 菌落直徑長度（ cm） 3d 6d 9d 12d 15d 7 8 9 平均 培養(yǎng)皿編號 菌落直徑長度（ cm） 3d 6d 9d 12d 15d 13 14 15 平均 培養(yǎng)皿編號 菌落直徑長度（ cm） 3d 6d 9d 12d 15d 16 17 18 平均 培養(yǎng)皿編號 菌落直徑長度（ cm） 3d 6d 9d 12d 15d 10 11 12 平均 ③ 350ug/ml ④ 400ug/ml ⑤ 450ug/ml ⑥ 500ug/ml 9 3. 實驗結(jié)果與分 析 不同濃度鐵離子對杏鮑菇菌絲的生長速度和長勢有不同的影響。 不同濃度鈣離子對杏鮑菇菌絲生長的影