【正文】 實驗過程所需要的各種儀器用具和藥品，劉老師都不厭其煩地為我安排、購買?；?費大量資金從國外引進的先進的技術(shù)和器材，沒有會用，再先進、貴重的器材頃刻成為一堆廢物。而我國的杏鮑菇生產(chǎn)目前仍然以分散的家庭小規(guī)模方式發(fā)展，是影響杏鮑菇產(chǎn)量、質(zhì)量及規(guī)?；a(chǎn)發(fā)展的主要原因之 一。 有專家認為 ，食用菌規(guī)范化生產(chǎn)要解決好三個問題：一是菌種標準化。 討論 杏鮑菇是近幾年國內(nèi)廣為栽培的品種，但絕大多數(shù)是采用固體菌種，這種方法的操 作環(huán)節(jié)多、接種過程中容易污染、菌絲生長速度較杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 16 慢、出菇時間不整齊、不便于統(tǒng)一管理，不利于杏鮑菇的規(guī)?；蜋C械化栽培。 4 結(jié)論與討論 結(jié)論 本文采取單因素試驗，以培養(yǎng)時間為變量，以菌球直徑、菌球密度、培養(yǎng)基 pH、淀粉酶活性、羧甲基纖維素酶活性、多酚氧化酶活性和漆酶活性為指標，得出了 在溫度 25℃﹑振蕩速率 150 轉(zhuǎn) /分鐘、裝液量 100ml、接種量 10%的條件下 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期為六天的結(jié)論。 杏鮑菇漆酶分泌量在前六天內(nèi)逐漸增加，最大分泌量出現(xiàn)在第六天， 最大為 ， 而后迅速下降，第七天 以后 漆酶的活性一 直 處于較低水平。所測結(jié)果 見圖 6。 03 4 5 6 7 8 9Trianing daysOD values0 0 圖 5 杏鮑菇羧甲基纖維素酶活性變化曲線 Figure 5 Pleurotus eryngii carboxymethyl cellulase activity curve 由圖 5 可知： 杏鮑菇羧甲基纖維素酶活性變化曲線呈鋸齒型。 河南科技大學畢業(yè)設計（論文） 11 01234563 4 5 6 7 8 9Trianing dayspH 圖 3 杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基 pH 變化曲線 Figure 3 Pleurotus eryngii liquid culture medium pH curve 不同培養(yǎng)時間下的四種胞外酶活性變化 淀粉酶活性 變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天起每天上午用分光光度計 在 520nm 處 測定淀粉酶活性， 以 OD 值表示 ，試驗結(jié)果見圖 4。到后期，有些菌球開始老化自溶，所以菌球密度降低。隨著培養(yǎng)時間的延長，由于營養(yǎng)物質(zhì)的消耗和代謝廢物的增多，使得菌種競爭加劇，生長環(huán)境變惡劣，菌種分裂增殖速度降低甚至停止，菌球逐漸長大。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時間（天）為橫坐標 ， 培養(yǎng)基 pH 為縱坐標，繪制曲線。 羧甲基纖維素酶（ CMC 酶）活性的測定 在試管中加入 %的羧甲基纖維素鈉溶液（用 ph=、） ，加稀釋 10 倍的粗酶液 ，50℃ 水浴保濕 10min，取出后立即加入 DNS 試劑 ，煮沸 5min，取出，冷卻后加入蒸餾水 ，混勻，測 520nm 處的 OD 值，以煮沸滅活 15min 的酶液作對照（設置三個重復）。否則會產(chǎn)生難溶的沉淀，導致配制溶液失敗。 試驗培養(yǎng)基：采用 黃豆粉培養(yǎng)基 [16]， 黃豆粉 30g，葡萄糖 15g，蛋白胨 1g, 磷酸二氫鉀 ， 硫酸鎂 ， 維生素 b 5mg， 水 500ml。 2 試驗材料與方法 試驗材料 供試菌種 杏鮑菇菌株，由河南科技大學提供。 因此，目前我國液體菌種只在個別大規(guī)模、工廠化的食用菌生產(chǎn)單位使用 ， 而我國目前食用菌生產(chǎn)的現(xiàn)狀是分散的、小規(guī)模的副業(yè)式生產(chǎn)占據(jù)主體，因此科研和生產(chǎn)仍存在著差距，以致成果無法推廣。目前已見的 液體菌種生產(chǎn)與應用的食用菌品種，包括平菇、香菇、黑木耳、雙孢菇等常規(guī)品種和白靈 菇、杏 鮑菇、 真姬菇等 珍稀品 種約五 十多個品 種 [11]。 采用液體菌種的產(chǎn)品可以早上市 2 個月以上，早上市與晚上市在效益上差的可就大了。 采用液體菌種從制種到菌絲長滿栽培袋只需 30天左右的時間，從制種到出菇大部分品種只需 1 個月，整個生產(chǎn)周期一般也就是兩個月。 國內(nèi)外杏鮑菇液體菌種的研究現(xiàn)狀 液體菌種優(yōu)勢 “ 液體菌種 ” 是用液體培養(yǎng)基，在生物發(fā)酵罐中，通過深層培養(yǎng)（液體發(fā)酵）技術(shù)生產(chǎn)的液體形 態(tài)的食用菌菌種 。其中人體必需氨基酸為 ％，賴氨 酸、精氨酸的含量特別高。杏鮑菇有許多生態(tài)型，各生態(tài)型垂直分布完全不同，主要分布于南歐、 北非、中亞等地區(qū)，我國四川 (九寨溝和長海草地 )、青海、新疆也有分布。 carboxymethyl cellulase activity is the first four 河南科技大學畢業(yè)設計（論文） days low, increases rapidly to the fifth day, the sixth day maximum, the maximum is , then decreased rapidly。 液體菌種質(zhì)量是影響萌發(fā)出菇的關鍵因素之一， 評判液體菌種質(zhì)量可用以下四種指標：菌球直徑、菌球密度、培養(yǎng)基 pH 以及四種胞外酶活性。 主要技 術(shù)指標(或研究目標 ) 1． 菌球直徑的測定； 2． 菌球密度的測定； 3．培養(yǎng)基 pH 的測定； 4．四種胞外酶活 性的測 定（淀 粉酶、羧 甲基纖 維素酶 、多酚氧化酶、漆酶） 。 bacteria density before the ball bees larger and then smaller, the maximum on the sixth day, a maximum of 128 / ml。 liquid spawn 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 目 錄 摘要 Abstract 1 前言 ....................................................... 1 杏鮑菇的分類地位 ......................................... 1 杏鮑菇的作用和價值 ....................................... 1 杏鮑菇的營養(yǎng)價值 ....................................... 1 杏鮑菇的藥用價值 ....................................... 1 杏鮑菇的經(jīng)濟價值 ....................................... 2 國內(nèi)外杏鮑菇液體菌種的研究現(xiàn)狀 .......................... 2 液體菌種優(yōu)勢 ........................................... 2 國外杏鮑菇液體菌種研究現(xiàn)狀 ............................ 3 國內(nèi)杏鮑菇液體菌種研究現(xiàn)狀 ............................ 3 杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)中存在的問題 .......................... 4 研究目的與意義 ........................................... 4 2 試驗材料與方法 ............................................ 5 試驗材料 ................................................. 5 供試菌種 ............................................... 5 設備儀器 ............................................... 5 所需藥品 ............................................... 5 實驗用具 ............................................... 5 試驗試劑及配制 ........................................... 5 測定方法 ................................................. 6 菌球直徑的測定 ......................................... 6 菌球密度的測定 ......................................... 7 淀粉酶活性的測定 ....................................... 7 羧甲基纖維素酶（ CMC 酶）活性的測定 .................... 7 多酚氧化物酶活性測定 .................................. 7 漆酶活性的測定 ......................................... 8 培養(yǎng)基 pH 的測定 ........................................ 8 河南科技大學畢業(yè)設計（論文） 數(shù)據(jù)處理 ................................................. 8 3 結(jié)果與分析 ................................