【正文】 ， 僅抑制腦外的左旋多巴的脫羧作用 [1]。目前常用的復(fù)方制劑有美多巴 (Madopar) 和帕金寧 (Sinemet) [2]。后兩者主要在長(zhǎng)期用藥后出現(xiàn) ， 是影響左旋多巴應(yīng)用的最主要原因 [1]。該藥比左旋多巴起效快 ， 到達(dá) “開 ”的時(shí)間更短 ， 作用時(shí)間更長(zhǎng) ， 治療的耐受性好 ， 且不良反應(yīng)較少。 多巴胺受體激動(dòng)劑 (DARA) 對(duì)于晚期 PD 患者 ， 由于大部分黑質(zhì)神經(jīng)元變性后缺少多巴脫羧酶 ， 不能把外源性左旋多巴轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟桶?， 故用多巴胺無(wú)效。多巴胺受體激動(dòng)劑直接作用于紋狀體多巴胺受體 ，而不需要多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行轉(zhuǎn)化、儲(chǔ)存和釋放 ， 因而其療效不易受到黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行性丟失的影響 ， 其次 ， 這類藥物直接刺激多巴胺受體而可減少不良反應(yīng)。 第一代多巴胺受體激動(dòng)劑始于 20 世紀(jì) 70 年代 ， 主要為左旋多巴的輔助藥物用于晚期患者。 雖然第一代多巴胺受體激動(dòng)劑在改善左旋多巴療效、減輕其運(yùn)動(dòng)不良反應(yīng)方面確實(shí)起到了一定作 用 ,但遠(yuǎn)未達(dá)到理想的標(biāo)準(zhǔn) ， 且有明顯的不良反應(yīng) ， 限制了其臨床使用。如新型麥角類長(zhǎng)效 D2受體激動(dòng)劑卡麥角林 (cabergoline)[5]， 選擇性非麥角類多巴胺 D2受體激動(dòng)劑羅匹尼羅 (ropinirole)， 非麥角類多巴胺 D2， D3， D4受體激動(dòng)劑普拉克索 (pramipexole)，具有 α22腎上腺素能和選擇性多巴胺 D2受體激動(dòng)活性的他利克索 (talipexole)[6]。更為重要的是 ， 新的激動(dòng)劑的出現(xiàn) ， 給早期帕金森病用藥方面帶來(lái)了顯著變化 ， 一旦患者的功能障礙達(dá)到需要癥狀性治療的程度 ， 目前大多數(shù)神經(jīng)病學(xué)專家則可能推薦首先使用受體激動(dòng)劑 ， 在必要時(shí)再添加左旋多巴。目前關(guān)于受體激動(dòng)劑的早期治療 ， 已有多項(xiàng)前瞻性開放性試驗(yàn)完成 [9]。另外 ， 推測(cè)該類藥物可能有神經(jīng)保護(hù)作用 ， 從而推遲疾病的進(jìn)展。如果該類藥物的神經(jīng)保護(hù)作用被證實(shí) ， 多巴胺激動(dòng)劑的治療作用和傳統(tǒng)用法將被重新評(píng)價(jià) ， 即不單單用于癥狀治療 ， 而是早期階段就開始使用。正在研究中的部分多巴胺 受體激動(dòng)劑如 SLV308[12]， 可以顯著延長(zhǎng)療效 ， 避免或大大降低惡心、嘔吐、幻覺(jué)等不良反應(yīng)。 單胺氧化酶 2B(MAO2B)抑制劑 多巴胺降解需要兩種酶 ， 即單胺氧化酶 (MAO)和兒茶酚 2 氧位 2 甲基轉(zhuǎn)移酶 (COMT)。另外 ,MPTP 是通過(guò) MAO2B 氧化為有毒的 12 甲基 24 苯基吡啶離子 (MPP + )， 因此 ， 抑制MAO2B 的活性既能延長(zhǎng)多巴胺在腦內(nèi)的停留時(shí)間 ， 增強(qiáng)療效 ， 減少左旋多巴的用量及其不良反應(yīng) ， 又能間接起到保護(hù)神經(jīng)元的作用 [1] 。它的出現(xiàn)被人們稱作 PD 藥物治療的第二次革命。單獨(dú)服用本品有輕微作用 ， 可延緩致殘 的發(fā)生 ， 并推遲神經(jīng)功能障礙的出現(xiàn)。本品必須嚴(yán)格控制用量 ， 否則有可能出現(xiàn)高血壓危象。與司來(lái)吉蘭相比 ， 新的 MAO2B 抑制劑選擇性更強(qiáng) ， 因此具有更高的活性 ， 且不良反應(yīng)較輕。 COMT 抑制劑可使到達(dá)腦內(nèi)的左旋多巴水平升高 ,從而增強(qiáng)左旋多巴的作用效果。 托卡朋是由瑞典的 Roche 公司開發(fā) ， 于 1998 年獲得 FDA 批準(zhǔn)。臨床試驗(yàn)表明 ，托卡朋在劑量 5～ 800 mg本品作為輔助治療藥物 ， 能大大提高左旋多巴的生物利用度并改善臨床癥狀 ， 使癥狀波 動(dòng)患者的 “開 ”期延長(zhǎng) ， “關(guān) ”期縮短 。但在 1999 年 1 月 ， 其生產(chǎn)商 Roche 開展了一項(xiàng)肝功能檢測(cè)計(jì)劃 ， 發(fā)現(xiàn)存在罕見(jiàn)但嚴(yán)重的致死性急性爆發(fā)性肝功能衰竭的危險(xiǎn)。本品是特異性外周 COMT 抑制劑 ，可有效延長(zhǎng)左旋多巴血漿半衰期 ， 但并不升高左旋多巴峰濃度。d 1， 最大安全劑量為 2020 mg本品臨床上常與左旋多巴 P 卡比多巴合用 ， 可顯 著 5 提高左旋多巴的生物利用度。 谷氨酸受體拮抗劑 越來(lái)越多的證據(jù)表明 ， 多巴胺減少引起的帕金森癥狀和治療引起的運(yùn)動(dòng)并發(fā)癥與在紋狀體棘狀神經(jīng)元中表達(dá)的谷氨酸受體功能的改變有關(guān) [19]。常用有金剛烷胺 (amantadine)、美金剛(memantine)和 MK801。研究開發(fā)具有特異性拮抗 AMDA 受體的藥物是以后的方向。適用于早期輕癥的患者 ， 對(duì)震顫有效 ， 但對(duì)運(yùn)動(dòng)遲緩和肌強(qiáng)直沒(méi)有明顯的療效 ， 一般用于輔助左旋多巴的治療。 腺苷 A2A 拮抗劑 腺苷 A2A 受體在大鼠、小鼠、猴和人的紋狀體中有豐富的表達(dá)。因此 ， 腺苷 A2A拮抗 劑可產(chǎn)生與多巴胺 D2受體相似的作用 ， 認(rèn)為可以用于帕金森病的治療。最近一項(xiàng)流行病研究顯示 ， 非選擇性的咖啡因可以降低帕金森病的危險(xiǎn) Shiozaki 等 [20]在幾種帕金森病小鼠模型中發(fā)現(xiàn) KW26002 是目前知道作用最強(qiáng)的選擇性腺苷 A2A 拮抗劑 ， 可以改善由利舍平或 MPTP 引起的強(qiáng)直性僵直和運(yùn)動(dòng)功能減退。同時(shí)其他一些對(duì)另一種選擇性腺苷 A2A 拮抗 劑 SCH58261 的研究 ， 也顯示長(zhǎng)期給藥可以加強(qiáng)左旋多巴作用 ， 而不會(huì)有異動(dòng)癥。 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 (neurotrophic factors ,NTFs) NTFs 是一類含量極少 ， 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)生命可溶性多肽。目前療效比較肯定的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子有腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 (BDNF)、膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 (GDNF)和 NT 4P5。在早先的體外實(shí)驗(yàn)中測(cè)定不同的 NTF 對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的作用 ， 發(fā)現(xiàn) BDNF，NT3， NT4P5， IGF， aFGF， bFGF， EGF， GDNF 和 TGFβ都能不同程度地支持胚胎多巴胺能神經(jīng)元。在 MPTP 損傷的靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型研究中 ， 給予 GDNF 后 ， 發(fā)現(xiàn)能對(duì)黑質(zhì)產(chǎn)生有效的、長(zhǎng)期的作用 ， 保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元 ，明顯改善行為癥狀。 神經(jīng)學(xué)家一直希望有朝一日 NTFs 能為神經(jīng)變性疾病提供有效治療。為此提出多種方案 ， 包括外科手術(shù)移植能分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的細(xì)胞、基因轉(zhuǎn)移、控釋給藥和用小分子化合物來(lái)促進(jìn)多巴胺神經(jīng)中BDNF 的合成等。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是目前開展最為廣泛和深入的基因治療方法。 BCL22 蛋白家族可抑制帕金森病病理過(guò)程中的細(xì)胞凋亡。帕金森病被認(rèn)為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病基因治療的最佳模型 ， 但目前尚處于實(shí)驗(yàn)性治療階段 ， 還需要在動(dòng)物模型上進(jìn)行臨床前研究 ， 以確定其有效性和安全性。最近的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明 A2A 受體 7 拮抗劑可以作為帕金森病的一種替代療法，也可與現(xiàn)在的治療帕金森病方法聯(lián)合應(yīng)用，但是尚未開發(fā)出適用于臨床的有效制劑，因此我們對(duì)此領(lǐng)域進(jìn)行研究。原位雜交顯示這些腦區(qū)域 A2A 受體 mRNA 水平濃度較高并與那里的 D2受體 mRNA 相似并呈現(xiàn)共同表達(dá)的現(xiàn)象， D2受體主要位于間接通路紋狀體 Gpe 神經(jīng)元上。 A2A 受體對(duì)紋狀體神經(jīng)元的影響 在嚙齒動(dòng)物和脊椎動(dòng)物，紋狀體傳出神經(jīng)元編碼如前腦啡肽和前加速素 mRNA 表達(dá)是由受體 DA 和 Ach所調(diào)節(jié)。在鼠，多巴胺 D2受體選擇性拮抗劑如eticlopride 具有相似的作用，但是前腦啡肽 mRNA 表達(dá)也是增設(shè)的。在先經(jīng) D2受體選擇性拮抗劑治療后，再用 A2A 受體選擇性拮抗劑 KF17837治療（而不是用 A1受體拮抗劑 DPCPX），它能阻止前腦啡肽 mRNA表達(dá)增高。但是應(yīng)該指出的是， DA 消耗與 DA 受體阻滯引起的紋狀體基因表達(dá)的作用并不完全相同 [23]。阻滯 A2A 受體一方面可以阻止前 腦啡肽 mRNA 表達(dá)增高，另一方面又可使紋狀體 Gpe 神經(jīng)元活性下降，而在 PD 中這些神經(jīng)元是過(guò)度活化的。研究顯示，紋狀體 Ach具有維持紋狀體神經(jīng)元的興奮和靜止?fàn)顟B(tài) [1]，因此 Ach受體拮抗劑在 PD 中的療效還可能是他們具有在失穩(wěn)紋狀體傳出神經(jīng)元的異常狀態(tài)的能力。雖然這些受體類型可以出現(xiàn)在兩 種傳出神經(jīng)元上，但是煙堿型激動(dòng)劑對(duì) cfos 表達(dá)的影響作用的研究結(jié)果提示 M1受體主要位于紋狀體 Gpe 神經(jīng)元，而 M4受體主要位于紋狀體 Gpi/黑質(zhì)神經(jīng)元上 [16]。在活體內(nèi) [9]和紋狀體腦切片上 [21]（那里主要是 D2受體介導(dǎo)的抑制 Ach 釋放）也觀察到了相似的作用，這種作用能完全被 CGS21680所阻滯。在 A2A 受體介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)行為下，控制膽堿能遞質(zhì)的完整作用可以通過(guò)膽堿能拮抗 A2A 受體激動(dòng)劑在某些行為學(xué)測(cè)試中的作用得到驗(yàn)證，在單側(cè)黑質(zhì)紋狀體受損害的鼠中， A2A 受體激動(dòng)劑能對(duì)抗 DA激動(dòng)劑阿樸嗎啡誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為，這種作用能被阿托品所消除。這種活化的受體從紋狀體釋放，抑制 GABA 的釋放 [23]，降低 GABA 介導(dǎo)的對(duì)這些神經(jīng)元的抑制，有利于平衡 D2受體的抑制性影響和谷氨酸和 Ach的興奮性影響。這可以部分地代償這些神經(jīng)元 D2受體介導(dǎo)的抑制作用的缺失和 D1受體介導(dǎo)的 GABA 釋放的缺失。其結(jié)果是全面地減少傳出神經(jīng)元的活動(dòng)，這也在前腦啡肽 mRNA 表達(dá)的下降和膽堿能中間神經(jīng)元 GABA 介導(dǎo)的抑制性增高上得到了反映。 多巴胺對(duì)直接和間接通路都具有調(diào)節(jié)作用，主要是通過(guò)紋狀體 Gpi/黑質(zhì)神經(jīng)元上的D1受體和紋狀體 Gpe 神經(jīng)元上的 D2受體來(lái)實(shí)現(xiàn)，但是這些神經(jīng)元并不絕對(duì)特異性地表達(dá)這些多巴胺能受體 [23]。這可能是多巴胺神經(jīng)支配后紋狀體 Gpe 通路活動(dòng)增強(qiáng)的原因 [11]。相反，當(dāng)多巴胺神經(jīng)支配和多巴胺受體阻滯時(shí)，在 紋狀體 Gpi/黑質(zhì)神經(jīng)元編碼前加速素的基因表達(dá)下降 [11]，這也反映了紋狀體Gpi/黑質(zhì)通路的活動(dòng)下降和神經(jīng)性多巴胺傳出到這些神經(jīng)元的缺失。這種失平衡被認(rèn)為是與 PD 中運(yùn)動(dòng)功能失調(diào)的基礎(chǔ)?？傊?，缺乏 DA 情況下，阻滯A2A 受體可以糾正紋狀體基因表達(dá)的改變，并通過(guò)增加紋狀體 Gpe 神經(jīng)元的內(nèi)源性抑制作用，從而部分代償由于 D2受體介導(dǎo)對(duì)這些神經(jīng)元控制的缺乏。 9 A2A 受體拮抗劑 人類 A2A受體對(duì)抗已經(jīng)被做為一個(gè)出發(fā)點(diǎn)來(lái)治療干預(yù)減輕帕金森病的相關(guān)措施。在此我們提出一種新穎的一系列功能化的 triazolo[4,5d]嘧啶衍生物，顯示出對(duì)抗 A2A受體的功能。通 過(guò)這些努力我們已經(jīng)一發(fā)現(xiàn) 60(V2020 / BIIB014)， 顯示出較強(qiáng)的帕金森氏癥的常用模型疾病。這種化合物目前在接受進(jìn)一步的臨床評(píng)價(jià)。左旋多巴在大腦中解放出多巴胺與一個(gè)非大腦滲透芳香酶抑制劑 ， 以減少了周圍的副作用發(fā)生率，由于主動(dòng)脈的多巴胺的缺失。另外 ， 如果太高了 ， 可造成可憐的大腦滲透。既發(fā)生在 68%的帕金森癥患者身上，相當(dāng)大的影響生活的質(zhì)量。因此管理治療最終會(huì)成為適得其反 ， 這要求穩(wěn)步增加劑量來(lái)留住的功效。引人注目的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明封鎖 A2A受體的小鼠能對(duì)帕金森病表現(xiàn)病變起保護(hù)作用。這些研究最先進(jìn)的是 KW 60021[24]，導(dǎo)出一個(gè)黃嘌呤 19拮抗劑 ， 最近完成的臨床試驗(yàn)，能緩解帕金森病相關(guān)癥狀，然而 ， 這種化合物無(wú)法滿足更大的要求，有報(bào)道進(jìn)一步凸現(xiàn)出一些問(wèn)題，這樣臨床效用的化合物 ， 包括代謝問(wèn)題及光化學(xué)穩(wěn)定性以及在固體形態(tài)中的表現(xiàn)形式 [20]。在此 ， 我們通過(guò)在這個(gè)領(lǐng)域的努力 ， 最終 ， 我們發(fā)現(xiàn) 一些 小分子與一個(gè)側(cè)面 最 適合臨床的研究 [21]。 11 第 2 章 實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 表 主要實(shí)驗(yàn) 試劑 main experimental reagent 主要原料 純度 生產(chǎn)廠家 12 石油醚 分析純 上海萊盈化工有限公司 乙酸乙酯 分析純 上海萊盈化工有限公司 二氯甲烷 分析純 上海萊盈化工有限公司 四氫呋喃 分析純 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 甲基叔丁基酯 分析純 上海萊盈化工有限公司 二碳酸二叔丁酯 分析純 上海試劑有限公司 對(duì)苯二甲基酰胺 分析純 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 甲醇 分析純 上海萊盈化工有限公司 1,3二溴基丙烷 分析純 北京偶合科技有限公司 三乙胺 分析純 江蘇永華精細(xì)化工有限公司 檸檬酸 分析純 江蘇 市江天化工技術(shù)有限公司 乙腈 分析純 上海試劑有限公司 碳酸鉀 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 硫酸二甲酯 分析純 北京偶合科技有限公司 二氯二氰基苯醌 分析純 北京偶合科技有限公司 硼氫化鈉 分析純 藥明康德新藥開發(fā)有限公