核酸診斷試劑的質(zhì)控和評(píng)價(jià)-展示頁
2025-01-13 20:31本頁面
【正文】 ?意義 ：在臨界值以上的樣品有 95%為真陽性 ? ?臨界值的評(píng)估 ：檢測一系列正常人群、非正常人群和特殊人群對(duì)臨界值進(jìn)行核對(duì) ?表示方法： 以量值表示（如 ng，單位， CFU/ml，PFU/ml，拷貝數(shù)等）；以稀釋度表示 影響靈敏度的因素 ?特殊疾病 有一些特殊的病人，其代謝異常可能影響標(biāo)志物的檢測 ?干擾物質(zhì)或抑制物質(zhì) 可以來自與病人（藥物）；也可來自于樣品的處理過程（反復(fù)凍融，溶血等）；或樣品本身存在抑制物等 ?樣品基因型和血清型的影響 有些被測物存在多種基因型或血清型，若原材料沒有廣譜性，則可影響靈敏度 ?試劑的灰區(qū)： 對(duì)特殊的試劑要制定灰區(qū)，如 FDA要求 HCV抗體試劑臨界值以上均為灰區(qū)，對(duì)灰區(qū)樣品要加倍重試 核酸檢測抑制物的作用原理 ?核酸擴(kuò)增需要酶的參與 ?酶發(fā)揮作用需要輔助因子以及特殊的條件 ?輔助因子與酶的特殊部位物理結(jié)合后發(fā)生反應(yīng) ?任何結(jié)合輔助因子、改變環(huán)境或阻止酶與輔助因子特異結(jié)合的物質(zhì)均抑制反應(yīng) 核酸擴(kuò)增常見的抑制物 ?血紅素及其代謝物影響 DNA聚合酶的反應(yīng)，不同來源的 DNA聚合酶受影響程度不同 ?痰中的酸性多聚糖或糖蛋白均影響 DNA聚合酶的反應(yīng) ?腦脊液和尿中可能含有抑制物，但具體物質(zhì)不明確 ?糞便中的膽汁鹽是 PCR反應(yīng)的強(qiáng)抑制劑 ?肝素可與 DNA聚合酶結(jié)合，對(duì)不同的酶抑制程度不同 ?核酸提取試劑中的某些物質(zhì)具有抑制作用：EDTA， SDS，鹽酸胍等 內(nèi)標(biāo)的種類 ?未修飾性的內(nèi)標(biāo) ?異源性內(nèi)標(biāo) ?修飾性的內(nèi)標(biāo) 特異性 ?定義：主要指假陽性的檢出情況 ?評(píng)價(jià)方法：主要是通過檢測部分樣品，或特殊樣品尤其是性質(zhì)相近的標(biāo)志物（如不同基因型或血清型樣品），分析出現(xiàn)假陽性的情況；而且分析時(shí)要注意在不同量時(shí)的特異性 造成非特異性的因素 ?原料 ：主要純度不夠，原料本身存在非特異反應(yīng) 物質(zhì) ?反應(yīng)模式 ：如孵育時(shí)間縮短非特異反應(yīng)可提高 34倍，非常短時(shí)可高達(dá) 10倍 ?樣品中的干擾物質(zhì) ： ? 病人本身：如自身免疫性疾病（高免疫球蛋白血癥等），黃疸類、溶血類和高脂類病人 ? 病人使用特殊藥物 ? 樣品處理過程：如不同抗凝劑，不同試管，某些 化學(xué)或去污劑以及樣品反復(fù)凍融等因素 核酸檢測中造成非特異性的因素 ?交叉反應(yīng)： 主要是引物序列與被測物中序列存在一定程度的同源性 ?樣品之間的污染： 氣溶膠中含有目的微生物，對(duì)照的污染等 ?擴(kuò)增產(chǎn)物的污染： 擴(kuò)增產(chǎn)物聚集在器皿、臺(tái)面、設(shè)備以及通風(fēng)設(shè)施上等造成污染 污染的處理 ?酶的滅活（ UNG） 主要用于滅活產(chǎn)
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