【正文】 善了化合物的藥 藥相互作用問(wèn)題。而 大體積的 1,4三氮唑取代使活性降低。 然而，鹵素取代25 也使在淋巴細(xì)胞上的毒性提高。引入雜環(huán)，改變聯(lián)苯的角度，也對(duì)活性不理利。 有文獻(xiàn)報(bào)道了 BMS790052 聯(lián)苯結(jié)構(gòu) Linker/Core 的構(gòu)效關(guān)系 5。并且發(fā)現(xiàn)用雜芳環(huán)取代乙烯基活性也是中等程度降低，然而這賦予了化合物優(yōu)化藥代特性的能力。 首先，通過(guò)對(duì)烯烴電子生物等排體的考察，發(fā)現(xiàn)其 所連苯環(huán)傾向于反式共平面結(jié)構(gòu)，而 換成飽和烷基鏈 后活性降低 67 倍， 醚鏈活性 比烷基鏈進(jìn)一步 降低 16倍 ，對(duì)此 ， 進(jìn)行構(gòu) 象 分析，認(rèn)為兩邊的苯環(huán)傾向于共平面或平行排列，而不是處于正交平面 ： 然后，考察鏈的長(zhǎng)短對(duì)活性的影響，發(fā)現(xiàn)將乙烯基置換成亞甲基，羰基，氧，都 會(huì)使 活性極大降低。 構(gòu)效關(guān)系研究： 我們將化合物分成四個(gè)部分討論起構(gòu)效關(guān)系： 聯(lián)苯的 Linker/Core 結(jié)構(gòu)，這部分 已經(jīng) 被密集的考察過(guò)； 咪唑部分，研究很少； 脯氨酸部分，僅有氟化和三元環(huán)化有報(bào)道； 氨基酸及其 “ 蓋子 ” 部分 ，這部分 被密集考察過(guò)。 BMS411 的結(jié)構(gòu)如下圖所示： 23 結(jié)合方式通過(guò) QUANTA軟件模擬，可見(jiàn) BMS411活性狀態(tài)為 γ扭曲形結(jié)構(gòu)，橫穿 NS5A 二聚體的接觸面，其“蓋子”區(qū)靠近 Y93 氨基酸，其核心區(qū)域平躺于氨基酸 L31 殘基之下，氨基酸殘基 Q54 靠近 BMS411 的末端，并與 α螺旋的氨基酸殘基 L28 相接觸。 CYP3A4 (μM) IC90 100 CYP2D6 (μM) IC50 100 CYP2D6 (μM) IC90 100 CYP2C9 (μM) IC50 177。 HCV replicon (pM) EC90 20177。 20 表一、代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) Phase 1b 1a BMS790052(daclatasvir) Bristol–Myers Squibb 9 50 3 GS5885 Gilead 4 34 2 ABT267（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US2020172368A1 Abbott 5 14 2 GSK2336805， WO2020091446A1 GlaxoSmithKline 8 44 2 ACH2928（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） Achillion 2–3 46 1 ACH3102（結(jié)構(gòu)未知，以專利中 代表性化合物代替） US2020302538A1 Achillion 4 10 1 PPI461（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替）WO2020096777A1 Presidio 10 210 1 21 續(xù)表一、代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) Phase 1b 1a PPI668（結(jié)構(gòu)未知，以專 利中代表性化合物代替） US2020115855A1 Presidio 10 100 1 IDX719（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US2020200827A1 Idenix 3 8 1 EDP239（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US2020217261A1 Enanta/Novartis 4 34 PC MK8742（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US2020083483A1 Merck 3 4 PC 還有另外一些結(jié)構(gòu)類型，僅挑選其中高活性代表化合物，見(jiàn)下表： 22 表二、其它代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) 注 1b 1a Example 1002 BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONA 15 230 Example 44 JANSSEN Ramp。 Daclatasvir (BMS790052) 圖四、 NS5A 抑制劑結(jié)構(gòu)。 三、 NS5A 抑制劑研究進(jìn)展： 大約有 60 篇專利報(bào)告了 NS5A 抑制劑作為 HCV治療藥物。由 A 和 B 圖分析可見(jiàn)，此二聚體在靠近氮端形成了一個(gè)相對(duì)平面的、堿性表面，并在兩個(gè) IB 區(qū)形成了大的溝。 A） 三個(gè)方向的帶狀圖。 B、 D 兩圖顯示區(qū)域一的保守度，一不同顏色表示，品紅色表示 95%，淡粉紅色表示75%95%，白色表示 75%。 18 圖二、 NS5A 區(qū)域一單體結(jié)構(gòu)。 NS5A 區(qū)域一中的 36198 殘基晶體結(jié)構(gòu)顯示其二聚為一個(gè) U 型結(jié)構(gòu)，并且內(nèi)表面排列一系列堿性氨基酸，此氨基酸被認(rèn)為是與病毒 RNA 結(jié)合部位。最近研究又發(fā)現(xiàn)區(qū)域三（ 356447 殘基）在病毒組裝而不是 RNA 復(fù)制中起到關(guān)鍵作用。 17 圖一 NS5A 在 HCV生命周期中的位置 NS5A 的區(qū)域一（ 1213 殘基）包含一個(gè)鋅離子結(jié)合區(qū)和一個(gè)兩親的氮端螺旋，此螺旋能夠 促進(jìn)膜連接（ membrane association）。 NS5A 是一個(gè)含有 447 個(gè)殘基的磷蛋白，有三 個(gè)蛋白域 2。 二、 NS5A 靶點(diǎn)： NS5A 在 HCV 生命周期 中的復(fù)制 和組裝 階段發(fā)揮作用，如下圖一所示。而 GT1型 HCV感染者屬于難治 性基因型， 中國(guó)的丙肝患者 多數(shù)屬于此類，占 HCV患者的 %，其中 GT1a為 %，而 GT1b為 %。 NS5A在 HCV復(fù)制和組裝中起到重要作用 ， 還與宿主免疫反應(yīng)有關(guān)， 是一個(gè)比較新穎的靶點(diǎn) ，此類藥物大多處在臨床階段，這給我們很多 追趕 機(jī)會(huì) 研發(fā)出中國(guó)自主的丙肝治療藥物 。此治療方案對(duì) GT1 型HCV 感染者效果不明顯，并且存在明 顯副作用。 建議選取下列化合物做起點(diǎn)，進(jìn)行 HCV 創(chuàng)新藥物項(xiàng)目開發(fā)： 核苷類 HCV核苷聚合酶 NS5B 抑制劑，此類抑制劑活性好 、耐藥性好， 并 且比較 廣譜： Sofosbuvir (GS7977) Mericitabine (RG7128) 聯(lián)苯類蛋白酶 NS5A 抑制劑，此類抑制劑活性極高，并且和其它藥物連用效果較好，然而不耐病毒突變： Daclatasvir (BMS790052) TLR7 激動(dòng)劑： 15 此類化合物也是治療 HBV潛在藥物 。 綜合上述總結(jié)， 我們認(rèn)為 HCV 藥物最具潛力治療方式是將核苷聚合酶 抑制劑（ NS5B 抑制劑） 、 NS5A 抑制劑 、 蛋白酶抑制劑結(jié)合的療法。 首先針對(duì)耐藥突變問(wèn)題，考慮雞尾酒式療法，以兩種或三種不同作用靶點(diǎn)或機(jī)制的藥物進(jìn)行治療；并且，針對(duì)耐藥突變問(wèn)題，臨床試驗(yàn)顯示組合中需要含有至少一個(gè)高突變門檻的藥物成分。 途徑 /新穎 性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 利巴韋林和 IFN 連用 最早上市 療程長(zhǎng) 副作用較大 ☆☆☆☆ ★★★☆ 疫苗 ★★★☆ GI5005 Phase 1b Therapeutic vaccine (Based on NS3Core fusion protein) ★★★☆ ★★★☆ 抗體 ★★★☆ Civacir Phase 3 AntiHCV enriched immune globulin product ★★★☆ ★★★☆ Bavituximab Phase 2 aminophospholipids on infected cells ★★★☆ ★★★☆ 多樣調(diào)節(jié) ★★★☆ Zadaxin Phase 3 A 28 amino acid peptide with immunomodulating properties ★★★☆ ★★★☆ EMZ702 Phase 2 Interferon enhancer ★★★☆ ★★★☆ 14 四、 總結(jié)和展望： 目前已有幾十種 DAAs 和 HTAs 藥物進(jìn)入臨床或已經(jīng)上市，為 HCV 的徹底治愈帶來(lái)曙光，并宣告了全口服、 多組 分 、 無(wú)干擾素 、 廣譜 、 低副作用 、 高病毒學(xué)治愈率時(shí)代即將到來(lái)。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 RNA 復(fù)制 ★★★☆ JTK109 Discontinued NS5B Discovery NS5B ★★★★ ★★★☆ VX759 No Development Reported NS5B Clemizole Phase 1 Clinical NS4B ★★★★ ★★★☆ DEBIO025 Phase 3 Clinical Cyclophilin 抑制劑 與其它藥物聯(lián)用， GT1 ★★☆☆ ★★★☆ miravirsen 13 、 病毒組裝和釋放 。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備 注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 RNA 復(fù)制 ★★★☆ Sofosbuvir (GS7977) Phase 3 Clinical NDA NS5B ★☆☆☆ ★★★★ Mericitabine (RG7128) Phase 2 Clinical NS5B ★★☆☆ ★★★☆ VX135 Phase 2 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ ABT333 Phase 3 Clinical NS5B PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ BI207127 Phase 3 Clinical ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ BMS791325 Phase 2 Clinical ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ Lomibuvir(VX222) Phase 2 Clinical NS5B ThumbII/B ★★★☆ ★★★☆ ABT072 Phase 2 Clinical PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ Setrobuvir (RG7790) Phase 2 Clinical PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ GS9669 Phase 2 Clinical NS5B ThumbII/B ★★★☆ ★★★☆ TMC647055 Phase 2 Clinical NS5B ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ 10 、 HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B 和 NS5A。不耐突變，與其它藥物連用效果好。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 蛋白加工 ★★★☆ Telaprevir 上市 NS3/NS4A increase SVR rates from~50% to~70% ★★★☆ Boceprevir 上市 NS3/NS4A High toward GT1, lower toward GT2 and GT3 ★★★☆ Simeprevir(TMC435) Phase 3 NDA NS3/NS4A ★★★☆ Faldaprevir (BI202035) Vaniprevir (MK7009) Asunaprevir (BMS650032) ABT450 Danoprevir (RG7227) Sovaprevir (ACH1625) Vedroprevir (GS9451) MK5172 Neceprevir (ACH2684) Phase 23 NS3/NS4A 與上述三個(gè) 化合物結(jié)構(gòu)類似 加黑部分為第二代產(chǎn)品，活性更強(qiáng)，基因型更廣，更耐突變 ★★★☆ GS9132 Discontinued ACH1095 No Development Reported NS2NS3 （理論階段） ★★★★ ★★★☆ 8 、 HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B 和 NS5A。 、病毒進(jìn)入并脫殼 。 圖三、 HCV的生命周期 6 三、 以生命周期劃分 HCV治療藥物整理 對(duì) HCV不同周期時(shí)藥物所針對(duì)的不同 途徑，我們分四個(gè)階段進(jìn)行總結(jié)，大體如下圖所示： 同時(shí)，我們對(duì)各個(gè)途徑的新穎性，各個(gè)靶點(diǎn)、藥物的風(fēng)險(xiǎn)、 潛力進(jìn)行了簡(jiǎn)單的評(píng)級(jí) ，黑色四星（ ★★★ ★ ）為最高， 白色四星（ ☆☆☆☆ ）最低。而 NS5B 則具有 RNA 依賴的 RNA 聚合酶活性，參與 HCV基因組復(fù)制。此外， NS3蛋白還具有螺旋酶活性，參與解旋 HCVRNA 分子，以協(xié)助 RNA 復(fù)制， NS