【正文】 與病毒多聚蛋白前體的切割。 5 圖二、 HCV的基因結(jié)構(gòu) 二、 HCV生命周期： HCV在體內(nèi)的生命周期可分為 以下過程： 病毒進(jìn)入并脫殼，可能涉及 LDL受體和粘多糖； 轉(zhuǎn)譯以及加工多聚蛋白 NS3/NS4A； HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B， BS5B 和NS5A； 病毒組裝和釋放。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 病毒進(jìn)入 ★★★☆ ITX5061 phase 2 靶點(diǎn)： SRBI 避免 耐藥 問題 ★★★☆ ★★★☆ 7 、 轉(zhuǎn)譯以及加工多聚蛋白 。 ★☆☆☆ ★★★☆ Ledipasvir (GS5885) Phase 3, NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ GSK2336805 Phase 2 Clinical， NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ ABT267 Phase 3 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ ACH3102 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ IDX719 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ MK8742 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ PPI668 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆ ☆ ★★★☆ GS5816 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ A972338 Discovery NS5A ★★★☆ ★★☆☆ ?? No Development Reported NS5A ★★★☆ ★★☆☆ 9 、 HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B 和 NS5A。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 釋放 ★★★☆ celgosivir Phase 2 Glucosidase inhibitors ★★★☆ ★★★☆ 、 其它方式 。 其次，丙肝廣泛的基因類型（ 6 種基因型 100 多亞型）也是一大挑戰(zhàn)，尤其對(duì)非核苷類抑制劑以及第一代核苷類 NS3NS4A 蛋白酶抑制劑以及 NS5A 抑制劑。 16 第二章 基于 NS5A 抑制劑的創(chuàng)新藥物設(shè)計(jì) 一、 前言： 世界范圍內(nèi)約 億人感染 HCV，并且目前針對(duì) HCV最理想的治療手段是每周注射 INFα 并結(jié)合 每天兩次口服利巴韋林（ RBV）。并且此靶點(diǎn)對(duì)小分子調(diào)節(jié)劑及其敏感， BMS790052及其一系列類似物的 IC50值（ genotype 1b/bovine viral diarrhea virus replicon）達(dá)到皮摩爾級(jí)別 。此非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)也參與若干細(xì)胞過程，比如干擾素抵抗以及凋亡調(diào)節(jié)。區(qū) 域二（ 250342 殘基）起著調(diào)節(jié)的功能，比如和蛋白激酶 PKR、 PI3K 以及 NS5B 相作用，并且，此區(qū)域也包含 IFN 敏感性決定區(qū)。而抗NS5A 抑制劑的突變位點(diǎn)也在 NS5A 的氨基端附近，位于蛋白和膜之間，表明抑制劑可能就結(jié)合在二聚體結(jié)合 面。 19 圖三、 NS5A 區(qū)域一的二聚體 結(jié)構(gòu) 。 C） NS5A 結(jié)構(gòu)相對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的位置。 目前 研發(fā)較深入的 NS5A 抑制劑 總結(jié) 見表一，大部分化合物的結(jié)構(gòu)沒有披露，但根據(jù)其專利信息，可以發(fā)現(xiàn)都是 BMS790052 的結(jié)構(gòu)類似物。 t1/2 (min)(HLM) Elimination rate constant (k) Cytotoxicity, CC50 (μM) PBM 19 Cytotoxicity, CC50 (μM) Vero 21 Cytotoxicity, CC50 (μM) CEM CLint(μL/min/mg protein) CYP1A2 (μM) IC50 100 CYP1A2 (μM) IC90 100 CYP3A4 (μM) IC50 177。 BMS411 與 NS5A 蛋白二聚體結(jié)合模式預(yù)測(cè)圖，黃色棒球 部分代表高耐藥突變殘基。而延長飽和烷基鏈的鏈長，活性降低程度中等。 結(jié)果顯示，縮短此結(jié)構(gòu)長度 使活性極大降低，而增加長度至三個(gè)苯環(huán)活性基本保持，而毒性下降。在片段 III 上的取代也表現(xiàn)出類似趨勢(shì)，小體積的疊氮取代活性 基本 保持，并且 （ 4R） 疊氮取代 在 PBM、 CEm和 Vero 細(xì)胞中沒有表現(xiàn)出任何毒性（ 100μM） ，（ 4S） 疊氮取代表現(xiàn)出毒性（略） 。 片段 IV 的構(gòu)效關(guān)系 3d, e： 在此處的改造主要為提高在 GT1a 上的抑制活性，對(duì)此部分的考察 是通過下面化合物 3 進(jìn)行的： 首先發(fā)現(xiàn)， 去除乙基， 在 GT1a 上的活性降低，但兩個(gè)化合物 苯甲酰胺和苯胺 環(huán)的二面角 大小 基本 相同 ，說明原化合物的 GT1a 上活性的提高不是鄰位取代引起的空間 效應(yīng) 所致 。而比較 30 與化合物 3 苯甲酰胺和苯胺環(huán)的構(gòu)想， 發(fā)現(xiàn)相差很大，推測(cè)，可能化合物 3 的構(gòu)象與 NS5A GT1b的生物構(gòu)象較符合，而 30 則與 NS5A GT1a 的較符合。 據(jù)此， 我們初步設(shè)計(jì)以 了第一階段工作計(jì)劃，先合成以 下幾種 Linker/Core 的化合物，之后再選擇活性較好的結(jié)構(gòu)進(jìn)行進(jìn)一步環(huán)以及氨基酸部分改造 ： 并 三 環(huán)類 : 四元環(huán)類： 28 其它類： 29 參考文獻(xiàn)： 1. 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S.。 Zhou, L.。 Liu, P.。 Whitaker, T.。 Zhou, L.。 Tao, S.。 Coats, S.。 、 咪唑喹啉胺（ imidazoquinoline amine）類 咪喹莫德（ Imiquimod）在 1980 年代由 3M Pharmaceuticals 公司前身 Riker Laboratories 作為抗菌劑開發(fā)， 1997 年被批準(zhǔn)用作治療局部 乳頭狀瘤病毒感染 。以，每周兩次，連續(xù)四周，在此計(jì)量水平下化合物能被很好的耐受，但是沒有表現(xiàn)出有意義的病毒載量和顯著的系統(tǒng)性細(xì)胞因子和生物標(biāo)記物水平的改變。在 Pfizer收購后，重新作為 治療 HCV藥物進(jìn)行研發(fā)，并進(jìn)入Ⅰ期健康人體上的原理驗(yàn)證階段（ proofofmechanism）。一般化合物結(jié)構(gòu)見下圖： 33 、 1取代 吡唑啉酮 （ 1Substituted Pyrazolo(3,4C) Ring） 類 在專利 US2020203533A111中， Coley Pharmaceutical Group, 以下骨架： 骨架進(jìn)一步細(xì)化，又分為以下幾種： 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 1 2 3 4 5 6 34 7 8 9 此類化合物進(jìn)行了如下生物活性測(cè)試，但并無結(jié)果公布。 37 專利 US2020197478A114披露了 119 個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，部分活性結(jié)果見下表（ 活性結(jié)果 EC50為 TLR7 激動(dòng)劑增加干擾素 IFN 釋放從而使 PBL/HCV 復(fù)制 水平降低 50%時(shí)的濃度）。其中， SM276001在 2020 年作為 HBV和 HCV的治療藥物處在臨床前研究。 之后， Dainippon Sumitomo 公司又覆蓋了此類化合物的脂類前藥如 SM324405，用于吸入法治療過敏引起的呼吸道炎癥，并且不會(huì)引起任何系統(tǒng)性 IFNs（見下文分析）。 在專利 US2020087443A120， Aamp。 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 1 pEC50= 2 pEC50= 3 pEC50= 4 pEC50= 48 5 6 7 而在專利 US2020099870A122中， Aamp。現(xiàn)將部分化合物活性列出 （ TLR7 HEK293） ： 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 1 EC50= 3 EC50= 50 15 EC50= 16 EC50= 17 EC50= 18 EC50= 在專利 US2020306610A124中， Aamp。 化合物結(jié)構(gòu)見下表： 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) A C D F J N R W 53 Y AI AJ AQ AS AU AY AW AZ BE BG BH BM 并且，上表中化合物 W的活性在專利 US2020200836A126中被深入報(bào)道。 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 57 1 ED50=30 nM 2 ED50=5 nM 4 ED50=72 nM 5 ED50=42 nM 6 ED50=17 nM 注：化合物 1228 在 10μM 濃度下對(duì) HCV的復(fù)制都表現(xiàn)出大于 50%的抑制。在原理驗(yàn)證階段艾沙托立賓表現(xiàn)出良好的耐受性，以 800mg最大劑量給藥， 8/12 個(gè)病人顯示出統(tǒng)計(jì)性的病毒載量降低，幅度 ，并且在此過程中伴隨著劑 量依賴的 IFN刺激的 2,5OAS和 ISG15產(chǎn)生的系統(tǒng)性增加。但隨后，由于在動(dòng)物毒性研究中發(fā)現(xiàn)其會(huì)劑量依賴導(dǎo)致強(qiáng)烈的免疫刺激， Anadys 終止了針對(duì) HCV 病人的一個(gè) 28 天的Ⅰ b 期臨床項(xiàng)目。 在專利 US2020054590A135中， Anadys 公司披露了以下骨架： 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 1 2 65 3 4 5 6 7 8 活性結(jié)果未見。 68 其活性結(jié)果如下表所示： 項(xiàng)目 活性報(bào)告 人 TLR7 HEK293 EC50= 52377 EC50= 52378 人 TLR8 HEK293 EC50=？ 52