臨床基因擴(kuò)增檢驗的質(zhì)量保證(新-臨床聚合酶鏈反應(yīng)測定的質(zhì)-文庫吧資料
2025-02-13 09:22本頁面
【正文】 3S質(zhì)控規(guī)則，其中 1為原式中的 A， 3s為原式中的 L，表示均值 177。1～ 3SD來表示。n由于基因擴(kuò)增結(jié)果的原始數(shù)據(jù)通常很大，故使用其 對數(shù)值 來進(jìn)行質(zhì)控統(tǒng)計分析可能要更為方便一些。n 批內(nèi)變異 的測定；n 室內(nèi)質(zhì)控物的 測定準(zhǔn)確度 的評價。 統(tǒng)計質(zhì)控方法 n 基線測定n 質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義 n LeveyJennings質(zhì)控圖方法 n LeveyJennings質(zhì)控圖結(jié)合 Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法 n 累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法 n “ 即刻法 ” 質(zhì)控方法 基線測定n 最佳條件下的變異（ Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； n 當(dāng) RCV與 OCV接近，或小于 2 OCV時，則RCV是可以接受的。統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的功能n 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。n 系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)物出現(xiàn)問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。n 如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標(biāo)本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴(kuò)增反應(yīng)混合液同時以水替代核酸樣本擴(kuò)增，如為陽性，而上述僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴(kuò)增產(chǎn)物的存在。 在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的一個空管 的功能n基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴(kuò)增抑制物，因而對污染的反映更為靈敏 ；n不能取代原血清陰性樣本 。 n應(yīng)該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的 一個空管 和 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管 。至于在測定中的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制 n理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件n測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 n統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的特點 n統(tǒng)計質(zhì)控方法理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件n 基質(zhì)與待測樣本一致；n 所含待測物濃度接近試驗的決定性水平；n 穩(wěn)定；n 靶值或預(yù)期結(jié)果已定；n 無已知的生物傳染危險性；n 單批可大量獲得；n 價廉測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序n 每次檢測究竟使用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標(biāo)本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機(jī)和系統(tǒng)誤差，應(yīng)每隔幾份臨床標(biāo)本插入 1份質(zhì)控樣本，但考慮國內(nèi)目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴(kuò)增檢驗的標(biāo)本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿足要求。 n內(nèi)標(biāo)設(shè)置的必要性 ？核酸提取及擴(kuò)增有效性的質(zhì)控 n 已知弱陽性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）： 至少帶 1份，其最后的檢測結(jié)果，應(yīng)是核酸提取和擴(kuò)增檢測的有效性的綜合反映。n 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機(jī)溶劑 。 n 核酸提取的產(chǎn)率： 可在 A260讀數(shù)測定。 n經(jīng)典方法n硅吸附法n對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在使用前，必須對其核酸提取純度和效率進(jìn)行評價。 n 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細(xì)胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。 理想的試劑和操作方法 n 試劑盒的質(zhì)檢n 定量測定的精密度是測定組成步驟的變異和的平方根 (SD)= 上式中 SDa、 SDb、 SDc是步驟 a、 b、 c等（例如試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測等）的標(biāo)準(zhǔn)差； 理想的試劑和操作方法n改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應(yīng)對試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出 “標(biāo)準(zhǔn)操作程序 ”(SOP) 人員培訓(xùn) n 臨床基因擴(kuò)增檢驗的操作主要是標(biāo)本處理中的核酸提取步驟， 這其中所涉及 的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡單， 但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測定結(jié)果，操作人員需要一定的專業(yè)技術(shù)知識和經(jīng)驗，要盡可能做到知其然 又知其所以然。n 具體做法是將裝有 TE緩沖液并上加石蠟油的擴(kuò)增反應(yīng)管放置于擴(kuò)增儀各孔中，熱電偶探針透過擴(kuò)增反應(yīng)管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)行一個常規(guī)的PCR擴(kuò)增，加熱模塊如為 96孔，則至少要測定 12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個擴(kuò)增過程中，可移動熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測至少要有一個擴(kuò)增周期。所有陰性樣本應(yīng)為陰性，出現(xiàn)陽性則表明吸頭不能有效地防止氣溶膠對加樣器的污染。 帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢n 用實驗來檢驗帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強(qiáng)陽性和數(shù)份陰性核酸標(biāo)本，然后將加樣器吸取量設(shè)至擴(kuò)增加樣所需的體積，使用待評價帶濾塞吸頭對一份強(qiáng)陽性樣本來回吸取 10次（模擬 10份陽性樣本的吸?。?，將最后一次的吸取液加至一含擴(kuò)增反應(yīng)液的管中，之后，換一個新吸頭，連續(xù)吸取 10份陰性樣本分別至 10個擴(kuò)增反應(yīng)管中，此過程重復(fù) 3～ 5次，最后對每一管按所用試劑方法進(jìn)行擴(kuò)增檢測。 加樣器的校準(zhǔn)？帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢？離心機(jī)？熱循環(huán)儀
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