臨床基因擴增檢驗的質(zhì)量保證ppt97-質(zhì)量檢驗-文庫吧資料
2024-08-25 17:58本頁面
【正文】 eyJennings質(zhì)控圖結(jié)合 Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法 ? 累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法 ? “ 即刻法 ” 質(zhì)控方法 來自 基線測定 ? 最佳條件下的變異（ Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（ Routine conditions variance, RCV）； ? 當(dāng) RCV與 OCV接近，或小于 2 OCV時，則RCV是可以接受的。 來自 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的功能 ? 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。 ? 系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)物出現(xiàn)問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。 ? 如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標(biāo)本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴增反應(yīng)混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應(yīng)混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴增產(chǎn)物的存在。 來自 在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的一個空管 的功能 ?基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴增抑制物，因而對污染的反映更為靈敏 ； ?不能取代原血清陰性樣本 。 ?應(yīng)該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的 一個空管 和 僅含擴增反應(yīng)混合液的管 。至于在測定中的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。 ?內(nèi)標(biāo)設(shè)置的必要性 ？ 來自 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制 ?理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ?測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ?統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的特點 ?統(tǒng)計質(zhì)控方法 來自 理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ? 基質(zhì)與待測樣本一致； ? 所含待測物濃度接近試驗的決定性水平； ? 穩(wěn)定； ? 靶值或預(yù)期結(jié)果已定； ? 無已知的生物傳染危險性； ? 單批可大量獲得； ? 價廉 來自 測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ? 每次檢測究竟使用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標(biāo)本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應(yīng)每隔幾份臨床標(biāo)本插入 1份質(zhì)控樣本，但考慮國內(nèi)目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴增檢驗的標(biāo)本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿足要求。 ? 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 ?經(jīng)典方法 ?硅吸附法 ?對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在使用前，必須對其核酸提取純度和效率進行評價。 ? 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細胞內(nèi)釋放出來。 來自 實驗室的日常工作管理 工 作 項 目 核 查 點 水浴箱 、 微量恒溫器 （ 加熱模塊 ） □ 校準(zhǔn)及記錄 溫度 10%次氯酸鈉溶液 □ 新鮮配制 生物安全柜 □ 先起動運行 30分鐘后再開始工作 室內(nèi)質(zhì)控 弱陽性質(zhì)控 （ 定性 ） □ 有 低 、 中 、 高濃度質(zhì)控 （ 定量 ） □ 有 陰性質(zhì)控：原樣本 □ 有 經(jīng)歷提取過程的空管 □ 有 僅含擴增反應(yīng)混合液管 □ 有 ? 實驗臺面 □ 使用后用 10%次氯酸鈉溶液消毒 ， ? 再用 70%乙醇清潔 □ 紫外照射 ? 加樣器 、 離心機 □ 使用后用 10%次氯酸鈉溶液消毒 ， ? 再用 70%乙醇清潔 ? 實驗室各區(qū) □ 遵循單一工作流向 ? □ 紫外照射 來自 理想的試劑和操作方法 ? 試劑盒的質(zhì)檢 ? 定量測定的精密度是測定組成步驟的變異和的平方根 (SD)= 上式中 SDa、 SDb、 SDc是步驟 a、 b、 c等（例如試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、擴增和產(chǎn)物檢測等）的標(biāo)準(zhǔn)差 ； SD SD SDa b c2 2 2? ? ? . . . . . .來自 理想的試劑和操作方法 ?改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應(yīng)對試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出 “ 標(biāo)準(zhǔn)操作程序 ” (SOP) 來自 實驗室質(zhì)量管理體系的建立 ?質(zhì)量手冊 ?質(zhì)量體系程序文件 ?標(biāo)準(zhǔn)操作程序 來自 質(zhì)量管理的內(nèi)涵 ?寫你所做的 ?做你所寫的 ?記錄你已做的 來自 怎樣編寫 SOP？ 來自 人員培訓(xùn) ? 臨床基因擴增檢驗的操作主要是標(biāo)本處理中的核酸提取步驟， 這其中所涉及 的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡單， 但由于均為微量
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