臨床基因擴增檢驗的質(zhì)量保證ppt97-質(zhì)量檢驗-資料下載頁
2025-08-08 17:58本頁面
【導(dǎo)讀】質(zhì)量保證為一產(chǎn)品。有計劃的和系統(tǒng)的措施?？煞癜l(fā)出報告的一項工作。EQA）為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，間的結(jié)果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法。當(dāng)EQA用來為執(zhí)業(yè)許可或?qū)嶒炇艺J(rèn)證的目的。在以前的文獻(xiàn)中，EQA常描述室間質(zhì)量控制。準(zhǔn)確度待測物的測定值。準(zhǔn)確度不能直接以數(shù)。值表示，通常以不準(zhǔn)確度來間接衡量。的獨立的測定結(jié)果之間的一致性程度。測定不精密度的主要來源是。SD或CV越大，表示重。重復(fù)多次測定，當(dāng)測定數(shù)據(jù)足夠多時，線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。正態(tài)分布的基本統(tǒng)計學(xué)含義可用均數(shù)（）、基因擴增檢驗實驗室設(shè)置的一般要求。應(yīng)在四個測定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接。標(biāo)本采集時間對擴增檢測結(jié)果的影響。準(zhǔn)備應(yīng)由訓(xùn)練有素的人員進(jìn)行。所需類型細(xì)胞的數(shù)量和核酸總量。如使用玻璃器皿，必須經(jīng)高壓滅。菌，以使可能存在的RNAase失活。用于RNA擴增分析的樣本，則應(yīng)于上。樣本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至。臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)有充分合
【正文】 開始上述累積和計算。 來自 累積和 (CUSUM) 質(zhì) 控圖 來自 “即刻法 ” 質(zhì)控方法 ? “即刻法 ” 質(zhì)控方法的實質(zhì)是一種統(tǒng)計學(xué)方法 ,即 Crubs異常值取舍法 ； ?只要有 3個以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。 來自 “即刻法 ” 質(zhì)控方法具體步驟 ? 將連續(xù)的質(zhì)控測定值按從小到大排列，即 x xx x x x …… xn（ x1為最小值， xn為最大值）； ? 計算均值 ()和標(biāo)準(zhǔn)差 (s)。 ? 按下述公式計算 SI上限 和 SI下限 值； SI上限 =（ x最大值 － 均值 ） /s SI下限 =（ 均值－ x最大值 ） /s ? 將 SI上限 和 SI下限 值與 SI值表中的數(shù)值比較 。 來自 質(zhì)控結(jié)果的判斷 ? SI上限 和 SI下限 值均 表 7中 n2s對應(yīng)的值時 ， 說明測定質(zhì)控測定值的變化在 2s之內(nèi) ， 是可以接受的 。 ? 如 SI上限 和 SI下限 值中之一處于 n2s 和 n3s對應(yīng)的值之間時 ， 說明該質(zhì)控測定值的變化在 2s～ 3s之間 ，處于 “ 告警 ” 狀態(tài) 。 ? 當(dāng) SI上限 和 SI下限 值之一 n3s對應(yīng)的值時 ， 說明該質(zhì)控測定值的變化已超出 3s， 屬 “ 失控 ” 。 來自 室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的評價 ? IQC為一集體活動，除實際測定者外，還應(yīng)有另外一人對測定數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)檢。 ? 不能將 IQC作為一個監(jiān)察方法，當(dāng)發(fā)現(xiàn)一次測定未達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)以建設(shè)性的而非批評的方式去探查失控的原因。 ? 除了將 IQC數(shù)據(jù)作為日常質(zhì)控外，還應(yīng)定期評價累積數(shù)據(jù)以監(jiān)測在測定操作中的長期變化趨勢。 ? 評價應(yīng)定期進(jìn)行。 來自 弱陽性質(zhì)控樣本常見的失控原因 ? 核酸提取中的隨機誤差。如核酸提取中的丟失、有機溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴增抑制物的殘留等。 ? 儀器的問題。如擴增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。 ? 試劑的問題。如 Taq酶和 /或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。 來自 陰性質(zhì)控樣本的失控原因 ?主要為擴增產(chǎn)物的 “ 污染 ” 和 /或臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉 “ 污染 ” . 來自 室內(nèi)質(zhì)控的局限性 ? IQC可確保每次測定與確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一致，但不能保證在單個的測定樣本中不出現(xiàn)誤差。比如樣本鑒別錯誤、樣本吸取錯誤、結(jié)果記錄錯誤等。此類誤差的發(fā)生率在不同的實驗室有所不同，一般要求小于 %，且應(yīng)均勻地分布于測定前、測定中和測定后的不同階段。 來自 影響臨床基因擴增檢驗結(jié)果的 最關(guān)鍵因素 ?產(chǎn)物 “ 污染 ” （ Carryover) ?測定人員的操作： 標(biāo)本混淆；貼錯標(biāo)簽、核酸提取等 ?試劑 來自 避免基因擴增檢驗假陽性結(jié)果的措施 ? 嚴(yán)格的實驗室分區(qū)； ? 使用帶 “ 濾心 ” 的吸頭； ? 設(shè)立 “ 陰性 ” 質(zhì)控（與標(biāo)本同時處理）； ? 使用防 “ 污染 ” （含 UNG）的 PCR試劑； ? 臨床 “ 假陽性 ” 問題：病原微生物如結(jié)核桿菌經(jīng)藥物治療后已死亡，但 PCR仍可為陽性，故治療結(jié)束后至少兩周內(nèi)不宜做 PCR檢測。 來自 避免基因擴增檢驗假陰性結(jié)果的措施 ? 避免由于來自于標(biāo)本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來自標(biāo)本處理中的去垢劑、有機溶劑的抑制作用的措施：純化核酸；標(biāo)本重復(fù)雙份測定；稀釋標(biāo)本。 ? 使用 “ 內(nèi)質(zhì)控 ” （ Internal Control,IC)以避免由于試劑、擴增儀或標(biāo)本處理不當(dāng)所致的假陰性；須注意的是，如果靶濃度很高，可致在靶核酸和 IC之間產(chǎn)生競爭，而使 IC受抑制，此時 IC可為陰性。 來自 室間質(zhì)量評價（ EQA） ?IQC確保實驗室室內(nèi)測定質(zhì)量的一致性，而 EQA則提供將實驗室測定情況與一室間和客觀標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行回顧性比較的數(shù)據(jù)。 ?EQA在質(zhì)量保證中對 IQC有一補充作用。 來自 EQA 的程序設(shè)計 ? 確定質(zhì)評方案 ,定期發(fā)放質(zhì)評樣 本； ? 要求參加質(zhì)評實驗室報告結(jié)果的單位要一致，以便于統(tǒng)計； ? 報告要清楚、簡潔； ? 要求參評實驗室在測定 EQA樣本時，要以與常規(guī)樣本完全相同的方式測定； ? 對測定方法、試劑及儀器等歸納總結(jié)； ? 對參評實驗室的測定要有評價； ? EQA報告要迅速及時。 來自 EQA質(zhì)評樣本 ?樣本特征與患者樣本應(yīng)盡量一致 ?樣本濃度與試驗的臨床應(yīng)用相適應(yīng) ?在樣本發(fā)放的條件下穩(wěn)定 ?不存在不可避免的傳染危險性 來自 EQA靶值 ?定性測定，應(yīng)為明確的陰性或陽性 ?定量測定，則提供參考方法值或參加實驗室的修正均值或參考實驗室均值或方法或歸組的方法均值 來自 評價方法 ? 特定參評實驗室的評分根據(jù)其與其它實驗室得分之間的關(guān)系，可分為絕對評分和相對評分兩種模式。 ? 絕對評分 就是根據(jù)已定的靶值對參評實驗室測定的每份質(zhì)評樣本計分，然后再計算該次質(zhì)評的總分，以得分的高低評價參評實驗室的水平。 ? 相對評分 則是將參評實驗室質(zhì)評得分與所有參評實驗室的平均分進(jìn)行比較，觀察其得分在全部參評實驗室中所處的位置。 來自 相對評分和絕對評分的例子 ?相對評分：英國 NEQAs ?絕對評分：美國 CAP 來自 采用何種評分方法較好？ ? 建立一個質(zhì)評體系，上述絕對評分和相對評分的方法均可以采用，其實質(zhì)內(nèi)容并無太大的差別，只不過是表現(xiàn)形式的不同，尤其是在定量測定。從室間質(zhì)量評價對改善實驗室測定質(zhì)量的作用來看，究竟是采用上述哪一種或另外制定的評價方法其實并不重要，關(guān)鍵是要有一個評價方法，從而以其為標(biāo)準(zhǔn)去評價實驗室的測定。 來自 EQA對測定技術(shù)的評價 ? 使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法 ? 全面地對方法、試劑和單個參評實驗室測定技術(shù)進(jìn)行評價 ? 指明嚴(yán)重誤差 ? 適當(dāng)時評價測定的其它方面（如測定干擾）。 來自 EQA的局限性 ?參評實驗室沒有同等的對待 EQA樣本和患者樣本 ?可能會妨礙給出不同結(jié)果的改良方法的發(fā)展 ?在不同的 EQA程序中，對實驗室的評價可能不同 來自 謝 謝！
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