臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證ppt97-質(zhì)量檢驗(yàn)(編輯修改稿)
2024-09-22 17:58 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 理想的試劑和操作方法 ? 試劑盒的質(zhì)檢 ? 定量測(cè)定的精密度是測(cè)定組成步驟的變異和的平方根 (SD)= 上式中 SDa、 SDb、 SDc是步驟 a、 b、 c等（例如試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)等）的標(biāo)準(zhǔn)差 ； SD SD SDa b c2 2 2? ? ? . . . . . .來(lái)自 理想的試劑和操作方法 ?改善測(cè)定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應(yīng)對(duì)試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本收集、核酸提取、測(cè)定方法和儀器操作寫出 “ 標(biāo)準(zhǔn)操作程序 ” (SOP) 來(lái)自 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立 ?質(zhì)量手冊(cè) ?質(zhì)量體系程序文件 ?標(biāo)準(zhǔn)操作程序 來(lái)自 質(zhì)量管理的內(nèi)涵 ?寫你所做的 ?做你所寫的 ?記錄你已做的 來(lái)自 怎樣編寫 SOP？ 來(lái)自 人員培訓(xùn) ? 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的操作主要是標(biāo)本處理中的核酸提取步驟， 這其中所涉及 的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡(jiǎn)單， 但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測(cè)定結(jié)果，操作人員需要一定的專業(yè)技術(shù)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，要盡可能做到知其然 又知其所以然。 來(lái)自 核酸樣本的制備、擴(kuò)增檢測(cè) 及其質(zhì)量控制 ? 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理 ? 核酸的分離純化 ? 靶核酸提取的質(zhì)量 ? 臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) ? 核酸樣本制備及擴(kuò)增檢測(cè)的質(zhì)控 ? 產(chǎn)物檢測(cè)的質(zhì)控 來(lái)自 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理 ? 靶核酸可以與宿主細(xì)胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構(gòu)形存在于細(xì)胞內(nèi)，如測(cè)定的是病原微生物 ,則靶核酸存在于細(xì)菌、病毒、原蟲或真菌細(xì)胞內(nèi)，如果上述細(xì)胞破裂 ,則靶核酸亦可存在于細(xì)胞外。 ? 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細(xì)胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。 來(lái)自 核酸的分離純化 ?核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴(kuò)增的物質(zhì)去除。 ?經(jīng)典方法 ?硅吸附法 ?對(duì)于商品核酸提取試劑盒，臨床實(shí)驗(yàn)室在使用前，必須對(duì)其核酸提取純度和效率進(jìn)行評(píng)價(jià)。 來(lái)自 臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) ? 臨床標(biāo)本中： 血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、 降解靶核酸的核酸 酶等 。 ? 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機(jī)溶劑 。 來(lái)自 對(duì)臨床標(biāo)本中可能存在的 抑制 /干擾物的質(zhì)控措施 ?質(zhì)控措施： 采用內(nèi)質(zhì)控（ internal control, IC）（通常稱為內(nèi)標(biāo)）的方法 ?內(nèi)標(biāo)有兩種 ,即競(jìng)爭(zhēng)性的和非競(jìng)爭(zhēng)性的內(nèi)標(biāo)。 ?內(nèi)標(biāo)設(shè)置的必要性 ？ 來(lái)自 統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制 ?理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ?測(cè)定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn) ?統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法 來(lái)自 理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ? 基質(zhì)與待測(cè)樣本一致； ? 所含待測(cè)物濃度接近試驗(yàn)的決定性水平； ? 穩(wěn)定； ? 靶值或預(yù)期結(jié)果已定； ? 無(wú)已知的生物傳染危險(xiǎn)性； ? 單批可大量獲得； ? 價(jià)廉 來(lái)自 測(cè)定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ? 每次檢測(cè)究竟使用幾個(gè)質(zhì)控樣本并排在臨床標(biāo)本中的哪個(gè)位置最為適宜？從理論上說(shuō)，為最大可能地檢出實(shí)驗(yàn)的隨機(jī)和系統(tǒng)誤差，應(yīng)每隔幾份臨床標(biāo)本插入 1份質(zhì)控樣本，但考慮國(guó)內(nèi)目前的實(shí)際情況及成本效益，一般來(lái)說(shuō)，如果臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的標(biāo)本量不是特別大，定性測(cè)定有一份接近 cutoff的弱陽(yáng)性和一份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿足要求。而定量測(cè)定則要根據(jù)試驗(yàn)的測(cè)定范圍，采用高、中、低三種濃度的質(zhì)控樣本。至于在測(cè)定中的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。 來(lái)自 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的獨(dú)特性 ?即監(jiān)測(cè)污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設(shè)置。 ?應(yīng)該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標(biāo)本核酸提取過(guò)程中帶入的 一個(gè)空管 和 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管 。 來(lái)自 陰性原血清質(zhì)控樣本的功能 ?監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的污染； ?由實(shí)驗(yàn)操作所致的標(biāo)本間的交叉污染 ； ?擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染。 來(lái)自 在標(biāo)本核酸提取過(guò)程中帶入的一個(gè)空管 的功能 ?基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴(kuò)增抑制物，因而對(duì)污染的反映更為靈敏 ； ?不能取代原血清陰性樣本 。 來(lái)自 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管 的功能 ? 監(jiān)測(cè)擴(kuò)增試劑是否發(fā)生污染，具有較強(qiáng)的污染鑒別性。 ? 如想鑒別實(shí)驗(yàn)室是否發(fā)生污染，可將一個(gè)或多個(gè)空管打開(kāi)靜置于標(biāo)本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴(kuò)增反應(yīng)混合液同時(shí)以水替代核酸樣本擴(kuò)增，如為陽(yáng)性，而上述僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管為陰性，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室以前擴(kuò)增產(chǎn)物的存在。 來(lái)自 統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn) ? 檢驗(yàn)誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機(jī)誤差。 ? 系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測(cè)定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)物出現(xiàn)問(wèn)題而造成的，這種誤差可以通過(guò)前述的措施方法加以控制，是可以排除的。 ? 隨機(jī)誤差則表現(xiàn)為測(cè)定 SD的增大，主要是由實(shí)驗(yàn)操作人員的操作等隨機(jī)因素所致，其出現(xiàn)難以完全避免和控制。 來(lái)自 統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能 ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。 ? 開(kāi)展統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制前，應(yīng)將可以控制的誤差產(chǎn)生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內(nèi)質(zhì)控的前提，也是保證常規(guī)檢驗(yàn)工作質(zhì)量的先決條件。 來(lái)自 統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法 ? 基線測(cè)定 ? 質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義 ? LeveyJennings質(zhì)控圖方法 ? LeveyJennings質(zhì)控圖結(jié)合 Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法 ? 累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法 ? “ 即刻法 ” 質(zhì)控方法 來(lái)自 基線測(cè)定 ? 最佳條件下的變異（ Optimal conditions
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