臨床基因擴增檢驗的質量保證ppt97(1)-文庫吧資料
2025-01-17 17:28本頁面
【正文】 gs質控圖方法 n LeveyJennings質控圖結合 Westgard多規(guī)則質控方法 n 累積和 (CUSUM) 質控方法 n “ 即刻法 ” 質控方法 基線測定n 最佳條件下的變異（ Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； n 當 RCV與 OCV接近，或小于 2 OCV時，則RCV是可以接受的。統(tǒng)計學質控的功能n 統(tǒng)計學質控的功能就是發(fā)現誤差的產生及分析誤差產生的原因，采取措施予以避免。n 系統(tǒng)誤差通常表現為質控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設備、試劑、標準品或校準物出現問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。n 如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴增反應混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴增產物的存在。 在標本核酸提取過程中帶入的一個空管 的功能n基本功能與陰性原血清質控樣本相同，但不同的是，其基質為水，不含陰性原血清質控樣本中可能有的擴增抑制物，因而對污染的反映更為靈敏 ；n不能取代原血清陰性樣本 。 n應該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標本核酸提取過程中帶入的 一個空管 和 僅含擴增反應混合液的管 。至于在測定中的排列順序，可排于標準品或校準品之后，臨床樣本之前。 n內標設置的必要性 ？統(tǒng)計學質量控制 n理想的室內質控樣本的條件n測定中質控樣本的設置、數量及排列順序 n統(tǒng)計學質控的特點 n統(tǒng)計質控方法理想的室內質控樣本的條件n 基質與待測樣本一致；n 所含待測物濃度接近試驗的決定性水平；n 穩(wěn)定；n 靶值或預期結果已定；n 無已知的生物傳染危險性；n 單批可大量獲得；n 價廉測定中質控樣本的設置、數量及排列順序n 每次檢測究竟使用幾個質控樣本并排在臨床標本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應每隔幾份臨床標本插入 1份質控樣本，但考慮國內目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴增檢驗的標本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質控樣本應可以滿足要求。n 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 n經典方法n硅吸附法n對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在使用前，必須對其核酸提取純度和效率進行評價。 n 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結合于核酸的蛋白質，從而將靶核酸從細胞內釋放出來。 實驗室的日常工作管理 工 作 項 目 核 查 點水浴箱、微量恒溫器（加熱模塊） □校準及記錄 溫度10%次氯酸鈉溶液 □新鮮配制生物安全柜 □先起動運行 30分鐘后再開始工作 室內質控 弱陽性質控（定性） □有 低、中、高濃度質控（定量） □有 陰性質控：原樣本 □有 經歷提取過程的空管 □有 僅含擴增反應混合液管 □有n 實驗臺面 □使用后用 10%次氯酸鈉溶液消毒，n 再用 70%乙醇清潔 □紫外照射n 加樣器、離心機 □使用后用 10%次氯酸鈉溶液消毒，n 再用 70%乙醇清潔n 實驗室各區(qū) □遵循單一工作流向n □紫外照射理想的試劑和操作方法 n 試劑盒的質檢n 定量測定的精密度是測定組成步驟的變異和的平方根 (SD)= 上式中 SDa、 SDb、 SDc是步驟 a、 b、 c等（例如試劑準備、標本采集、核酸提取、擴增和產物檢測等）的標準差； 理想的試劑和操作方法n改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應對試劑準備、標本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出 “標準操作程序 ”(SOP) 實驗室質量管理體系的建立n質量手冊n質量體系程序文件n標準操作程序質量管理的內涵n寫你所做的n做你所寫的n記錄你已做的怎樣編寫 SOP？人員培訓 n 臨床基因擴增檢驗的操作主要是標本處理中的核酸提取步驟，
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