臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證(新-臨床聚合酶鏈反應(yīng)測定的質(zhì)-wenkub
2023-02-28 09:22:42 本頁面
【正文】 離散度越大，精密度越差，反之則越好。 n 偏差 (Bias) 待測物的測定值與一可接受參考值之間的差異。在以前的文獻(xiàn)中， EQA常描述室間質(zhì)量控制。 n 室內(nèi)質(zhì)量控制（ Internal Quality Control,IQC) 由實(shí)驗(yàn)室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。 定 義n 室間質(zhì)量評(píng)價(jià) （ External Quality Assessment, EQA） 為客觀比較一實(shí)驗(yàn)室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)、客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。定 義 n 準(zhǔn)確度 (Accuracy) 待測物的測定值與其真值的一致性程度。定 義n 精密度 (Precision) 在一定條件下所獲得的獨(dú)立的測定結(jié)果之間的一致性程度。 定 義n 批 (Run) 在相同條件下所獲得的一組測定。n 實(shí)驗(yàn)室測定： 標(biāo)本接收、貼標(biāo)簽、樣本處理、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測、測定的有效性和臨床診療價(jià)值。標(biāo)本的類型和采集量n 標(biāo)本的類型 : 血清 (漿 )、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)n 血清 (漿 )標(biāo)本 :溶血、脂血等；n 分泌物、痰：評(píng)價(jià)內(nèi)容包括細(xì)胞組成，所需類型細(xì)胞的數(shù)量和核酸總量。標(biāo)本保存 n靶核酸 (尤其是 RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對(duì)于核酸擴(kuò)增測定的有效性極為重要。 n 用于 RNA擴(kuò)增分析的樣本，則應(yīng)于上述緩沖液中 80℃ 或液氮下保存。n 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)待測靶核酸的特性，對(duì)各種臨床樣本的運(yùn)送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。 帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢n 用實(shí)驗(yàn)來檢驗(yàn)帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強(qiáng)陽性和數(shù)份陰性核酸標(biāo)本，然后將加樣器吸取量設(shè)至擴(kuò)增加樣所需的體積，使用待評(píng)價(jià)帶濾塞吸頭對(duì)一份強(qiáng)陽性樣本來回吸取 10次（模擬 10份陽性樣本的吸?。?，將最后一次的吸取液加至一含擴(kuò)增反應(yīng)液的管中，之后，換一個(gè)新吸頭，連續(xù)吸取 10份陰性樣本分別至 10個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)管中，此過程重復(fù) 3～ 5次，最后對(duì)每一管按所用試劑方法進(jìn)行擴(kuò)增檢測。n 具體做法是將裝有 TE緩沖液并上加石蠟油的擴(kuò)增反應(yīng)管放置于擴(kuò)增儀各孔中，熱電偶探針透過擴(kuò)增反應(yīng)管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)行一個(gè)常規(guī)的PCR擴(kuò)增，加熱模塊如為 96孔，則至少要測定 12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個(gè)擴(kuò)增過程中，可移動(dòng)熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測至少要有一個(gè)擴(kuò)增周期。 n 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細(xì)胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。 n 核酸提取的產(chǎn)率： 可在 A260讀數(shù)測定。 n內(nèi)標(biāo)設(shè)置的必要性 ？核酸提取及擴(kuò)增有效性的質(zhì)控 n 已知弱陽性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）： 至少帶 1份，其最后的檢測結(jié)果，應(yīng)是核酸提取和擴(kuò)增檢測的有效性的綜合反映。至于在測定中的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。 在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的一個(gè)空管 的功能n基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴(kuò)增抑制物，因而對(duì)污染的反映更為靈敏 ；n不能取代原血清陰性樣本 。n 系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)物出現(xiàn)問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。 統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法 n 基線測定n 質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義 n LeveyJennings質(zhì)控圖方法 n LeveyJennings質(zhì)控圖結(jié)合 Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法 n 累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法 n “ 即刻法 ” 質(zhì)控方法 基線測定n 最佳條件下的變異（ Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； n 當(dāng) RCV與 OCV接近，或小于 2 OCV時(shí)，則RCV是可以接受的。n由于基因擴(kuò)增結(jié)果的原始數(shù)據(jù)通常很大，故使用其 對(duì)數(shù)值 來進(jìn)行質(zhì)控統(tǒng)計(jì)分析可能要更為方便一些。 n 常用的 13S質(zhì)控規(guī)則，其中 1為原式中的 A， 3s為原式中的 L，表示均值 177。n 當(dāng)整個(gè)質(zhì)控過程中使用同一個(gè)質(zhì)控物時(shí)，可用來判斷單個(gè)或多個(gè)測定批內(nèi)該質(zhì)控物的測定值是否失控； n 當(dāng)整個(gè)質(zhì)控過程中使用兩個(gè)或兩個(gè)以上的不同的質(zhì)控物時(shí)，可用來判斷同一或多個(gè)測定批內(nèi)的兩個(gè)或兩個(gè)以上的質(zhì)控物的測定值是否失控。3s控制限。n 41S 四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超出 +1s或－ 1s控制限。n 9X 九個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)處于均值（）的同一側(cè)。 經(jīng)Henry和 Segalove的改良，即為目前常用的 LeveyJennings質(zhì)控圖 。 質(zhì)控圖的記錄的其它方面nIQC數(shù)據(jù)是用
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