第八章微生物遺傳-文庫吧資料
2025-08-07 15:28本頁面
【正文】 106個(gè) /ml . 100個(gè) /ml 試驗(yàn)： 8 106個(gè) /ml . 360~490nm 2 106個(gè) /ml 可見光， 30分 嘧啶 嘧啶二聚體 UV 光復(fù)活作用 嘧啶二聚體 嘧啶 光解酶 紫外線對(duì) DNA的損傷 ? 經(jīng)紫外線照射后形成的帶有 TT二聚體的 DNA分子，在黑暗下會(huì)被一種光激活酶（ photoreactivating enzyme）即光裂合酶（ photolyase）結(jié)合，當(dāng)形成的復(fù)合物暴露在可見光（ 300~500nm，最有效 400nm ）下時(shí)，此酶會(huì)因獲得光能而發(fā)生解離，從而使二聚體重新分解成單體。 ? 這一現(xiàn)象最早是 （ 1949）在灰色鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)的。 目前已知有多種酶修復(fù)系統(tǒng)：光復(fù)活 、 錯(cuò)配修復(fù) 、 切除修復(fù) 、 重組修復(fù) 、 SOS反應(yīng)誘導(dǎo)的修復(fù) 。CT、 CC間也可形成少量二聚體 ， 使復(fù)制 、 轉(zhuǎn)錄受阻 。 然而在一定條件下 ， 生物機(jī)體能使這種損傷得到修復(fù) 。對(duì)不同的 DNA損傷，細(xì)胞可以有不同的修復(fù)反應(yīng)。 未能完全修復(fù)而存留下來的損傷會(huì)在適合的條件下顯示出來(如細(xì)胞的癌變等 )，細(xì)胞不具備修復(fù)功能，則無法對(duì)付經(jīng)常發(fā)生的 DNA損傷，就不能生存。 R a t I s o l at e a n d C e n t ri f u g e Rat l i v e r e n z y me s G ri n d l i v e r E x p e ri men t 1 E x p e ri me n t 2 E x p e ri men t 3 his b as e p ai r h i s fra m e s h i ft s u b s t i t u t i o n mu t an t mu t an tRat l i v e r Po t e n t i a l Rat l i v e r P o t e n t i a l Rat l i v e r h i s mu t an tE n z y me mu t ag e n E n z y me m u t ag en E n z y me s t rai n Mi x s o l u t i o n s M i x s o l u t i o n s Mi x s o l u t i o n s an d p l at e a n d p l at e a n d p l at e h i s+ re v e rt an t his+ re v e rt an t Sp o n t an eo u sc o l o n i e s co l o n i e s rev e rt an t Fi g . 2 1 A me s t e s t fo r p o t e n t i a l m u t ag en s . 用 Ames法檢測(cè)誘變劑 證明 Ames試驗(yàn)重要性的應(yīng)用實(shí)例： 國(guó)外曾開發(fā)了一種降低婦女妊娠反應(yīng)的藥物“反應(yīng)停”，由于其藥效顯著，在 6070年代十分流行 但隨后人們就發(fā)現(xiàn)畸形兒的出生率明顯增高，而且生產(chǎn)畸形兒的婦女大多曾服用“反應(yīng)?！保髞聿捎肁mes試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這種物質(zhì)的確具有很強(qiáng)的致突變作用，因此這種藥物被禁止使用 但如果能在這種藥物上市之前就進(jìn)行 Ames試驗(yàn)檢測(cè)，那么這種大量出生畸形兒的悲劇完全可以避免。 具體操作： 檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌 (Salmonella typhmurium)組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株 (his)的回復(fù)突變率。 ? 誘變劑的共性原則： ? 化學(xué)藥劑對(duì)細(xì)菌的誘變率與其對(duì)動(dòng)物的致癌性成正比 ? 超過 95%的致癌物質(zhì)對(duì)微生物有誘變作用 ? 90%以上的非致癌物質(zhì)對(duì)微生物沒有誘變作用 Ames test：對(duì)化學(xué)誘變劑做檢測(cè) 原理： his 在基本培養(yǎng)基上不長(zhǎng)；而發(fā)生回復(fù)突變則長(zhǎng)。 三、 Ames試驗(yàn) ? Ames試驗(yàn)：利用細(xì)菌模型了解潛在化學(xué)致癌物的誘變作用。 按是否比較容易、迅速地分離到發(fā)生突變的細(xì)胞來分： ? 選擇性突變株 （ selective mutant）：具有選擇標(biāo)記（如營(yíng)養(yǎng)缺陷性、抗性突變型、條件致死突變型），只要選擇適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件，如培養(yǎng)基、溫度、pH值等，就比較容易檢出和分離到。 ?誘發(fā)突變： 利用物理的或化學(xué)的因素處理微生物群體，促使少數(shù)個(gè)體細(xì)胞的 DNA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，基因內(nèi)部堿基配對(duì)發(fā)生錯(cuò)誤，引起微生物的遺傳性狀發(fā)生突變。 ? 過去，人們認(rèn)為自發(fā)突變是由于 自然界中存在的輻射因素和環(huán)境誘變劑 所引起的。 ?染色體錯(cuò)誤配對(duì)不等交換： 減數(shù)分裂期間，同源染色體間的同源部分發(fā)生聯(lián)會(huì)和交換，如果聯(lián)會(huì)時(shí)配對(duì)不精確，會(huì)發(fā)生不等交換，造成一部分基因缺失和部分基因重復(fù) —— DNA片段插入和缺失。 ? 移碼突變誘發(fā)的原因是一些像吖啶類染料分子能插入 DNA分子，使 DNA復(fù)制時(shí)發(fā)生差錯(cuò)，導(dǎo)致移碼突變。 ?移碼突變： 指 DNA鏈上插入或丟失 1個(gè)、 2個(gè)甚至多個(gè)堿基（但不是三聯(lián)體密碼子及其倍數(shù)），在讀碼時(shí)，由于原來的密碼子移位，導(dǎo)致在插入或丟失堿基部位以后的編碼都發(fā)生了相應(yīng)改變。 ? 自然界的突變，轉(zhuǎn)換多于顛換。 ? 一個(gè)嘌呤被另一個(gè)嘌呤所取代，或者一個(gè)嘧啶被另一個(gè)嘧啶所取代的置換 —— 轉(zhuǎn)換 （ transition）； ? 一個(gè)嘌呤被另一個(gè)嘧啶所取代或一個(gè)嘧啶被另一個(gè)嘌呤所替代的置換 —— 顛換 （ transversion）。 ? 琥珀突變是指堿基突變后形成的終止密碼子為 UAG； ? 赭石突變是指堿基突變后形成的終止密碼子為 UAA； ? 乳白突變是指堿基突變后形成的終止密碼子為 UGA。 ? 無義突變 ：當(dāng)堿基突變后形成終止密碼子，使蛋白質(zhì)合成提前終止。 依突變所引起的遺傳信息的改變分為： ? 錯(cuò)義突變 ：突變?cè)斐梢粋€(gè)不同氨基酸的置換。 抗原突變型：因突變而引起的抗原結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。
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