【正文】 有關(guān)，如兩個菌株進化過程中的親緣關(guān)系、供體 DNA的形式及菌株的具體生理狀態(tài)等，其中最重要的是受體菌生理狀態(tài) —— 感受態(tài)。即轉(zhuǎn)化子是通過轉(zhuǎn)化獲得供體細胞部分遺傳物質(zhì)并表現(xiàn)出相應性狀的重組受體菌。 （一）轉(zhuǎn)化 受體菌直接吸收來自供體菌的 DNA片段，通過交換、把它整合到自己的基因組中，從而使受體菌獲得了供體菌的部分遺傳性狀的現(xiàn)象稱為轉(zhuǎn)化。 微生物的基因重組分 原核微生物 和 真核微生物兩大類進行研究。而傳統(tǒng)意義上的雜交通常指的是細胞水平的雜交，如雜交動物、雜交植物等。 返回目錄 第三節(jié) 基因重組 基因重組的定義：把兩個不同性狀個體的遺傳基因轉(zhuǎn)移到一起，經(jīng)過遺傳分子間的重新組合，形成新的遺傳型個體的方式，稱基因重組或遺傳重組。 操作：將營養(yǎng)缺陷型細胞（或孢子）洗下，用 無菌水離心清洗，制成菌懸液并與基本培養(yǎng)基混合 培養(yǎng)，用含有不同營養(yǎng)物的濾紙片覆蓋，如某濾紙 片周圍有微生物生長圈，則為該營養(yǎng)物的營養(yǎng)缺陷 型。 含誘變劑的液體培養(yǎng)基 菌種 涂布 培養(yǎng) 基本培養(yǎng)基上不長菌落 完全培養(yǎng)基上長出菌落 營養(yǎng)缺陷型 ? D．影印平板法 完全培養(yǎng)基 影印接種 基本培養(yǎng)基 將誘變處理的細胞涂不于含有完全培養(yǎng)基的平 板，長出菌落，利用影印接種工具將該菌落轉(zhuǎn)移到 另一個基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)，亦長出菌落，將前后相 應菌落對比，若前者生長，而后者不生長的菌落， 為營養(yǎng)缺陷型（類似 “ 平板影印培養(yǎng)試驗 ” ）。 ? A．夾層培養(yǎng)法（ “ 三明治 ” 狀） ?③ 步 檢出缺陷型 現(xiàn)舉出四種方法： 小菌落是第二次長起來的（營養(yǎng)缺陷型） ? B．限量補充培養(yǎng)法 在基本培養(yǎng)基上，加微量的天然成分（不同于補充培養(yǎng)基），營養(yǎng)缺陷型形成微菌落，而野生型形成正常大小的菌落。其原理是：在基本培養(yǎng)基中，野生型菌株 的孢子能發(fā)芽成菌絲，而營養(yǎng)缺陷型的孢子則不能。 方法：將誘變后的孢子培養(yǎng)到含制霉菌素的基本培 養(yǎng)基上，基本培養(yǎng)基長出菌絲者為營養(yǎng)缺陷型。 方法：將誘變后的菌培養(yǎng)到含青霉素的基本培養(yǎng)基上， 即野生型被淘汰，留下的為休眠狀態(tài)的營養(yǎng)缺陷型。 ? A．抗生素法（最常用）。） 3）營養(yǎng)缺陷型的篩選方法 一般要經(jīng)過誘變、淘汰野生型、檢出和鑒定營 養(yǎng)缺陷型四個步驟 。該型非自身合成。 ② 營養(yǎng)缺陷型：野生型菌株因為突變，失去了合 成某種酶的能力，使得該酶產(chǎn)物不能產(chǎn)生，只能在 加有這種產(chǎn)物的培養(yǎng)基上生長的菌株。 一般地，完全培養(yǎng)基是天然或半人工合成的。 營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選（重點） 1）與篩選營養(yǎng)缺陷型突變株有關(guān)的三類培養(yǎng)基 ① 基本培養(yǎng)基（ MM， []）：僅能滿足某一微生物的野生型菌株生長所需要的最低成分的組合培養(yǎng)基，（該培養(yǎng)基都是人工培養(yǎng)基，營養(yǎng)缺陷型菌株不能在其上生長）。 ⑦ 設(shè)計或創(chuàng)造高效篩選方案。 ⑥ 利用和創(chuàng)造形態(tài)、生理與產(chǎn)量之間相關(guān)指標。 ⑤ 充分利用復合處理的協(xié)同效應。 紫外線的劑量指強度與作用時間之乘積 。 目的：使每個細胞均勻接觸誘變劑并防止長出不純 菌落。 。 。（“三致”致癌，致畸，致突變） 艾姆斯試驗 (Ames test）：是一種利用細菌營養(yǎng)缺陷 型的回復突變來檢測環(huán)境或食品中是否存在化學致癌劑 的簡便有效的方法 . 利用微生物營養(yǎng)缺陷型（ his— ）的回復突變來檢測 環(huán)境或食品中化學致癌劑。（無目的的誘變，有目的的篩選） 誘變育種的基本環(huán)節(jié) 出發(fā)菌株 計算出 誘變 大多死亡 少數(shù)存活 存活率 多數(shù)未變 少數(shù)突變 突變率 多數(shù)負變 少數(shù)正變 正變率 多數(shù)幅度小 少數(shù)幅度大 高產(chǎn)率 投產(chǎn)率 多數(shù)不宜投產(chǎn) 少數(shù)適宜投產(chǎn) 誘變育種應考慮的幾個原則： ? 選擇簡便有效的誘變劑，如紫外線、激光和離子束，烷化劑、堿基類似物等。但總的來說， 方法古老，自發(fā)突變的目的性不強，周期 長。 2)定向培育優(yōu)良菌株。 即：內(nèi)切核酸酶、外切核酸酶、 DNA聚合酶、連接酶。 機理： 誘變形成的嘧啶二聚體在暗處結(jié)合光激活酶， 在有可見光的情況下，此酶吸收光能，解離嘧啶二聚體。造成局部 DNA分子無法配對。 ? DNA復制過程中堿基配對錯誤引起 據(jù)統(tǒng)計， DNA鏈在每次復制中每個堿基對錯配頻率是1071011， 這樣一個基因的自發(fā)突變幾率約為 106。 自發(fā)突變的原因一般有： ? 背景輻射和環(huán)境因素的誘變 例如：宇宙輻射、南北極磁場等。 總之，原核、真核微生物都存在染色體間畸變。 （原核微生物僅一條染色體，不存在“另一條”。 2〉 染色體間畸變：非同源染色體間的易位。 倒位： 斷裂下來的一段染色體逆轉(zhuǎn)，然后，重新插入到 原位置。 （ 3）染色體畸變 包括染色體結(jié)構(gòu)的缺失、重復、插入、易位、倒位 幾種情況，也包括染色體數(shù)目的變化。 移碼突變屬于 DNA的輕微損傷，也是一種點突變，由移碼突變所產(chǎn)生的突變株稱為移碼突變株。 ?堿基的置換 ?移碼突變 ?染色體畸變 （ 1） 堿基置換 它只涉及一對堿基被另一對堿基所置換，屬 于典型的點突變。 誘發(fā)突變：簡稱誘變，指通過人為的方法，利用物理、化學或生物因素顯著提高基因自發(fā)突變幾率的手段。 影印培養(yǎng)試驗 原始敏 感菌種 影印培養(yǎng) 無藥 培養(yǎng)基 含藥 培養(yǎng)基 結(jié)論： 對鏈霉素敏感的 K12細胞在未接觸過任何一點鏈霉素的條件下，由 1—— 2—— 4—— 5—— 6—— 8—— 9——10—— 12…… 的移種可篩選出大量抗鏈霉素的突變株。 T1僅起到淘汰原始未突變菌株和甄別抗噬菌體突變型的作用，并不是誘導因 素。由突變型基因返回到原始的野生型基因，稱回復突變。 ⑥ 穩(wěn)定性：突變后的新性狀可以穩(wěn)定地遺傳給下一代。 ④ 獨立性：某基因的突變率不受它種基因突變率的影響。 ② 不對應性：指突變性狀與引起突變的原因之間無直接的對應關(guān)系。 雙重或多重突變的幾率是各個基因突變幾率的乘積。 如突