【正文】 影印接種法 夾層培養(yǎng)法 影印平板法 絨布 適溫培養(yǎng) 菌落轉(zhuǎn)移 粘取菌落 ③ 鑒定缺陷型 例：生長譜法 原理： 在混有供試菌的平板表面點(diǎn)加微量營養(yǎng)物，視某營養(yǎng)物周圍是否長菌來確定該供試菌的營養(yǎng)要求 方法 第四節(jié) 原核生物的基因重組 一、轉(zhuǎn)化 (一 )、幾個(gè)概念 轉(zhuǎn)化 ：受體菌 直接吸收 供體菌的 DNA片段 而獲得后者部分遺傳性狀的現(xiàn)象。 b處理后的菌懸液增殖培養(yǎng)期間，可用黑紙包住盛有處理菌液的玻璃器皿 。 效果較好的有：亞硝酸、硫酸二乙酯（ DES）、亞硝基胍（ NTG）、氮芥、乙烯亞胺、 5溴尿嘧啶、吖啶黃等。如亞硝酸、硫酸二乙酯等； ② 與 DNA中堿基十分接近的類似物，摻入到 DNA分子中。 物理誘變劑： 非電離輻射： 紫外線、 激光和離子束 電離輻射： x射線、 γ 射線、快中子、 α 射線、 β 射線 和超聲波等。 誘變處理 (1)、誘變劑的選擇 誘變劑： 能引起生物 產(chǎn)生高于自發(fā)突變頻率 突變的外界因素，稱為 誘變劑。 b、菌齡： 細(xì)菌：對數(shù)期的細(xì)胞；真菌和放線菌：剛成熟的孢子。 卡介苗法： 牛型結(jié)核分枝桿菌 牛膽汁、甘油、馬鈴薯培養(yǎng)基 移種 230代 得終選菌株 從生產(chǎn)中選種 特點(diǎn) 三、誘變育種 誘變育種： 誘變育種是利用物理、化學(xué)等誘變因素處理微生物群體，誘發(fā)基因發(fā)生突變，然后根據(jù)育種目標(biāo)，從無定向的突變株中，篩選出我們所需要的菌種。 精測 (復(fù)篩 ) ：定量測定產(chǎn)物，并確認(rèn)產(chǎn)物。此菌株在某些性能上比原種有所提高。 切除修復(fù) 第三節(jié) 育種 選種 ：根據(jù)微生物的特性，采用各種分離篩選方法，從自然界中或從生產(chǎn)實(shí)踐中選出適合人們要求的菌種。造成局部 DNA分子無法配對，引起死亡或突變。 染色體畸變： 某些強(qiáng)烈理化因子引起 染色體結(jié)構(gòu)上的缺失、重復(fù)、插入、移位和倒位，以及染色體數(shù)目的變化。 (1)、移碼突變的種類 a 第三個(gè)密碼子中增添一個(gè)堿基 ABC ABC AB+ CAB CAB CAB CAB ….. b 第二個(gè)密碼子缺失一個(gè)堿基 ABC BCA BCA BCA BCA …… c 增添一個(gè)缺失一個(gè)，又恢復(fù)正常 ABC ABC AB+ CAB CAB CAC ABC ABC ABC …… d 增添三個(gè)堿基引起一段不正常 ABC AB+ CAB +CA B+C ABC ABC ABC…… e 缺失三個(gè)堿基引起一段不正常 ABC ACA BCA BAB CAC ABC ABC ABC …… 缺失 B C B (2)、引起移碼突變的誘變劑 誘變劑 ：吖啶類染料（吖啶橙等）、 ICR類化合物。 其作用是 ：通過活細(xì)胞的代謝活動(dòng)摻入到 DNA分子中。 其作用是 ：引起一個(gè)或幾個(gè)堿基發(fā)生生化反應(yīng)。 (1)、種類 ①轉(zhuǎn)換： 從一種嘌呤變到另一嘌呤 或從一種嘧啶到另一嘧啶，可稱為轉(zhuǎn)換 ； ②顛換： 從嘌呤到嘧啶或從嘧啶到嘌呤，則稱它為顛換。 1個(gè) 小菌落生長 時(shí)產(chǎn)生抗噬 菌體突變 影印平板培養(yǎng)法 (1)、試驗(yàn)方法 (2)、試驗(yàn)結(jié)論：自發(fā)突變與環(huán)境條件無關(guān) 含鏈霉素 不含鏈霉素 六、基因突變及其機(jī)制 轉(zhuǎn)換： A T變?yōu)?G T 堿基置換 顛換 :A T變?yōu)?C T 點(diǎn)突變 缺失 :ABC AB ABCA.. 移碼突變 誘變 添加： ABC A BCAB… 缺失： abc ghijkl …… 重復(fù)： abc abc def…… 基因突變 畸變 添加 插入： abc pqr def…… 易位： abc pqr ghi…… 倒位： abc fed ghi…… 自發(fā)突變 (一 )、誘發(fā)突變 誘發(fā)突變： 通過人為的方法，用物理、化學(xué)或生物因素顯著提高自發(fā)突變頻率的手段。 Newbe的涂布試驗(yàn) (1)、試驗(yàn)方法 自發(fā)突變假說 獲得免疫性假說 (2)、試驗(yàn)結(jié)果： 重新涂布平板 上微菌落后， 長出抗性菌落 遠(yuǎn)高于未重新 涂布的。 五、基因突變自發(fā)性和不對應(yīng)性的實(shí)驗(yàn)證明 Luria 的變量試驗(yàn) (1)、試驗(yàn)方法 (2)、試驗(yàn)結(jié)果 分裝的平皿抗 噬菌落數(shù)相差大 而不分裝的基本 相同。 突變率可用某一單位群體在每一世代產(chǎn)生突變株的數(shù)目表示。 從回復(fù)性分 正向突變： 野生型基因可以通過突變?yōu)橥蛔冃突颉? 二、基因突變的類型 按 突變株表型 分 營養(yǎng)缺陷型： 喪失合成某些生長因子的能力 選擇性突變株 抗性突變型： 對藥物或致死物理因子產(chǎn)生抗性 條件致死突變型 ： 某條件能生長，另?xiàng)l件不能 分 形態(tài)突變型： 個(gè)體或菌落形態(tài)發(fā)生變異 非選擇性突變株 抗原突變型： 細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)發(fā)生變異 產(chǎn)量突變型： 代謝產(chǎn)物產(chǎn)量變異 從突變產(chǎn)生的原因來分 自發(fā)