專題四核酸鑒定技術(shù)-文庫吧資料
2025-05-13 18:17本頁面
【正文】 硝酸纖維素濾膜 同探針同源雜交的基因 DNA片段 X光底片 Southern 凝膠轉(zhuǎn)移雜交技術(shù) Southern DNA 印跡雜交之 X光顯像圖片 水稻（ Oryza sativa L.)的葉綠體 DNA分別用核酸內(nèi)切限制酶 BglⅡ (AC)、 BamHⅠ （ DF）、 EcoRⅠ （ GI）、和 HindⅢ （ JL）消化，加樣在含有 EtBr染料的 1%的瓊脂糖凝膠電泳中作電泳分離，然后同 32P標(biāo)記的玉米 psbA探針作 Southern雜交。 Southern Blot DNA印跡雜交 根據(jù)毛細(xì)管作用的原理，使在電泳凝膠中分離的 DNA片段轉(zhuǎn)移并結(jié)合在適當(dāng)?shù)臑V膜上，然后通過同標(biāo)記的單鏈 DNA或 RNA探針的雜交作用檢測這些被轉(zhuǎn)移的 DNA片段，這種實(shí)驗(yàn)方法叫做 DNA印跡雜交技術(shù)。 尼龍膜或硝酸纖維素膜雜交的步驟： 1. 核酸印跡轉(zhuǎn)移：通常利用毛細(xì)作用將核酸樣品轉(zhuǎn)移到固體支持膜上。 應(yīng)用 1mol/L醋酸銨和 可改善對小片段 DNA的滯留能力。 DNA/DNA或 RNA/DNA的能力，揭示核酸片段中某種特定基因的位置。 雜種核酸分子： 彼此退火的核酸來自不同的生物有機(jī)體，而形成的雙鏈分子。 ?核酸分子雜交鑒定技術(shù) 核酸分子雜交技術(shù)，是在 1968年由華盛頓卡內(nèi)基學(xué)院（ Cavnegie Institute of Washington）的 Roy Britten及其同事發(fā)明的。 在脈沖電泳中，電場方向是周期變化的，頭一個(gè)脈沖電場方向與核酸的移動方向成 45 ℃ 角，下一個(gè)脈沖的電場方向與核酸移動方向在另一側(cè)成 45 ℃ 角，由于加在瓊脂糖凝膠電泳上的電場方向、電流大小、以及作用時(shí)間都在交替地變換著，這就使得 DNA分子必須隨時(shí)調(diào)整其泳動的方向，來適應(yīng)凝膠孔隙的無規(guī)則變化。 ? 可視化： EB、硝酸銀 ? 分離范圍： 11000bp PolyAcrylamide Gels 40kb? =40kb 40kb? ? 脈沖電場凝膠電泳（ PFGE） 1984年， 。 能看到 μg 的微量 DNA； 熒光強(qiáng)度與 DNA的片段大小成正比。 分為常熔點(diǎn)的瓊脂糖和低熔點(diǎn)（ LMP）瓊脂糖。分子量較小的 DNA分子，比分子量較大的 DNA分子遷移率要快；同等分子量的不同構(gòu)型的核酸分子，構(gòu)型緊密的比松散型的開環(huán) DNA分子或線性 DNA分子遷移率要快 DNA分子大小的估計(jì) 核酸構(gòu)型 ? 凝膠電泳的 分辨率 ： 與凝膠的 類型 和 密度 相關(guān) 瓊脂糖凝膠的分辨率在 ～ 50Kb之間 。根據(jù)核酸分子大小不同、構(gòu)型或形狀的差異，可以通過電泳將其混合物中的不同成分彼此分開。推測 B. aphidicola 可能在走向滅絕。與其它共生物種相比， B. aphidicola失去了許多能讓它為宿主生存作出貢獻(xiàn)的重要功能，這是好的共生體所需要做到的。 ? Buchnera aphidicola的基因組要大一點(diǎn)兒， 約為 420kb。雖然 Carsonella基因組排得很滿，有許多重疊的基因，而且?guī)缀鯖]有“廢物” DNA，但是它沒有許多被認(rèn)為是生命不可缺少的基因。 ? Carsonella ruddii是生活在吸食植物液昆蟲身上的一種寄生細(xì)菌，它的基因組 只有 160個(gè) kb之長。 通常， 含量： 1OD260nm=50mg/ml 雙鏈 DNA 純度： OD260nm/OD280nm= If OD260nm/OD280nm， Contaminated by ? If OD260nm/OD280nm， Contamin
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