【正文】 同的沉降系數(shù)，在超離心機(jī)的強(qiáng)大引力場(chǎng)中，它們的沉降速率差異很大，故可以用超離心法使核酸與其他雜質(zhì)分開，也可以將不同中核酸進(jìn)行分離。斷裂基因：基因中的 bp序列能夠斷續(xù)的在成熟的蛋白質(zhì)中找到其相應(yīng)的 AA， 電鏡顯示這種基因和它的成熟 mRNA只能形成帶泡的雜交分子。 蛋白西印免疫檢測(cè)法蛋白西印免疫檢測(cè)法lEastern Blotting（ 東印跡） ：利用免疫染色法在薄膜上探測(cè)低分子量化合物 l 核酸分子雜交的意義 ：1. 發(fā)現(xiàn)原核生物的基因是連續(xù)基因，而真核生物的基因是斷裂基因。印跡法印跡法 )：用已知的 DNA釣 mRNA， 方法如下： 1973年，由美國(guó)斯坦福大學(xué)教授 Cohn和美國(guó)加州大學(xué)教授Boyer帶領(lǐng)各自的研究組幾乎同時(shí)分別完成了 DNA體外重組，一舉打開了基因工程學(xué)大門。Northern blot (RNA 印跡法印跡法 ) Western blot( Western 免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn) )：：蛋白免疫檢測(cè)法蛋白免疫檢測(cè)法216。(4).加入已標(biāo)記的探針 (順序已知 )進(jìn)行雜交。(2).凝膠電泳分離酶切片段， 經(jīng)堿（如氫氧化鈉）處理，使成為單鏈。l 4).用于檢出特殊 RNA。l 2).用已知順序的 DNA片段為探針 (用放射性同位素標(biāo)記）在眾多的 DNA順序存在時(shí)檢出一個(gè)特殊 DNA順序或基因。l 核酸的雜交在分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的研究中具有重要意義。如 Southern DNA單鏈與互補(bǔ)的 RNA鏈之間也可以發(fā)生雜交。濃度越大，復(fù)性越容易l (3). DNA片段的大小 小片段比大片段的 DNA易復(fù)性(3) 核酸的雜交l 熱變性的 DNA單鏈，在復(fù)性時(shí)并不一定與同源DNA互補(bǔ)鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，它也可以與在某些區(qū)域有互補(bǔ)序列的異 源 DNA單鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。l DNA復(fù)性的程度、速率與復(fù)性過程的條件有關(guān)。l 將熱變性的 DNA驟然冷卻至低溫時(shí)， DNA不可能復(fù)性。 DNA制品應(yīng)保存在較高濃度的緩沖液中，在 1mol/L NaCl保存 ) (3).溶液的 pH , pH在 59 ,Tm變化不明顯 (4).變性劑 (凡能與核苷酸形成氫鍵或干擾堿基堆積作用的小分子物質(zhì) )，變性劑的存在降低其 Tm值（干擾堿基堆積，增加了吸收） (5).堿基組成， G和 C的含量高， Tm值高 (2) 核酸的復(fù)性l 變性 DNA在適當(dāng)?shù)臈l件下，兩條彼此分開的單鏈可以重新締合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一過程稱為復(fù)性。30輪循環(huán)可獲得 —— 230（ 109)個(gè)基因片段l G和 C的含量高， Tm值高。退火： 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合216。DNA變性的特征n 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ PCR）l變性、退火、延伸三步曲216。 DNA的 Tm值與分子中的 G和 C的含量有關(guān)。l Tm值測(cè)定：在 ,鈉溶液中進(jìn)行。因此，通常將引起 DNA變性的溫度稱為熔點(diǎn)，用 Tm表示。l DNA變性后，它的一系列性質(zhì)也隨之發(fā)生變化，如紫外吸收 (260 nm)值升高 , 粘度降低等。這種現(xiàn)象稱為增色效應(yīng)。l 例如，天然狀態(tài)的 DNA在完全變性后，紫外吸收 (260 nm)值增加 25－ 40%。l RNA本身只有局部的雙螺旋區(qū)，所以變性行為所引起的性質(zhì)變化沒有 DNA那樣明顯。l 能夠引起核酸變性的因素很多。變性核酸將失去其部分或全部的生物活性。這種酶可以特異性的水解核酸中某些特定堿基順序部位。l 核酸外切酶的作用方式是從多聚核苷酸鏈的一端（3′ 端或 5′ 端）開始，逐個(gè)水解切除核苷酸；核酸內(nèi)切酶的作用方式剛好和外切酶相反，它從多聚核苷酸鏈中間開始，在某個(gè)位點(diǎn)切斷磷酸二酯鍵。l 以 DNA為底物的 DNA水解酶（ DNases） 和以 RNA為底物的 RNA水解酶（ RNases）。（ 2）酶水解l 生物體內(nèi)存在多種核酸水解酶。這種水解性能上的差別，與 RNA核糖基上 2′OH 的鄰基參與作用有很大的關(guān)系。l DNA和 RNA對(duì)酸或堿的耐受程度有很大差別。l RNA的等電點(diǎn)比 DNA低的原因，是 RNA分子中核糖基 2′OH 通過氫鍵促進(jìn)了磷酸基上質(zhì)子的解離， DNA沒有這種作用。l 由于核酸分子中的磷酸是一個(gè)中等強(qiáng)度的酸，而堿性（氨基）是一個(gè)弱堿，所以核酸的等電點(diǎn)比較低。應(yīng)用 CH2N2 （疊氮甲烷）作為烷基化劑，則所有堿基都能發(fā)生上述反應(yīng)。2,堿基環(huán)氮原子的烷基化反應(yīng) l 在一定條件下，堿基環(huán)上的氮原子可以發(fā)生烷基化反應(yīng)。這種情況與苯胺分子中的氨基相似。l 環(huán)內(nèi)氨基的 pKa值約為 。因此，堿基既有芳香環(huán)的特性，也具有氨、酮和烯醇等相應(yīng)的化學(xué)性質(zhì)。l 含氮堿基具有芳香環(huán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。l 嘌呤堿基和嘧啶堿基是核酸中最重要的組分。 RNA的相對(duì)分子質(zhì)量大約從幾萬(wàn)到幾百 萬(wàn)或更大一些； DNA的一般在 1061010l DNA耐堿， RNA易被堿水解 l ：鑒別 DNA和 RNA 濃 HCl 濃 HClRNA → 綠色化合物 DNA → 藍(lán)紫色化合物 苔黑酚 二苯胺啡啶溴紅（熒光染料）和溴嘧啶都可對(duì) DNA染色，原理是卡在分子中， DNA的離心和電泳顯色可用它們。 脫氧核糖核蛋白（ DNP）核糖核蛋白（ RNP） 易溶于水溶液中。ATTGCl 一、一般性質(zhì)l 1. 性狀 DNA 為白色類似石棉樣的纖維狀物 RNA為白色粉末或結(jié)晶 DNA 和 RNA均為不對(duì)稱大分子，長(zhǎng)度與直 徑之比可達(dá) 107l 都是極性化合物，易溶于水 ,都溶于 2甲氧乙醇，但不溶于一般有機(jī)溶劑如乙醇、乙醚、氯仿、戊醇和三氯醋酸。l簡(jiǎn)述三種 RNA的主要作用。ll tRNA中除了常見的堿基外，還存在一些稀有堿基，這類堿基大部分位于突環(huán)部分 .rRNA mRNA tRNA 反密碼子氨基酸 新生肽鏈核糖體 (rRNA+蛋白質(zhì)）mRNAtRNA作業(yè)l概念： Chargaff（ 查加夫） GU 配對(duì)形成的氫鍵較弱。l 在 RNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，堿基的配對(duì)情況不象 DNA中嚴(yán)格。l RNA分子中，部分區(qū)域也能形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，不能形成雙螺旋的部分，則形成突環(huán)。 許多 rRNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)及由一級(jí)結(jié)構(gòu)推導(dǎo)出來的二級(jí)結(jié)構(gòu)都已闡明，但是對(duì)許多 rRNA的功能迄今仍不十分清楚。原核生物的 mRNA一般無polyA， 但某些病毒 mRNA也有 3’polyA,polyA 可能有多方面功能 ,與 mRNA從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移有關(guān)；與 mRNA的半衰期有關(guān)，新合成的 mRNA, polyA鏈較長(zhǎng)，而衰老的 mRNA， polyA鏈縮短。 “ 穿靴戴帽 ”l 大多數(shù)真核細(xì)胞 mRNA在 3 ’ 末端有一段長(zhǎng)約 200核苷酸的 polyA。l 四環(huán)四臂l aa臂 與 反密碼環(huán) 是識(shí)別 aa與密碼的重要結(jié)構(gòu)tRNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)TΨC環(huán)D環(huán)反密碼環(huán)2,tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)l 在三葉草型二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，突環(huán)上未配對(duì)的堿基由于整個(gè)分子的扭曲而配成對(duì)形成三級(jí)結(jié)構(gòu)，目前已知的 tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)均為倒 L型 。除個(gè)別例外，幾乎所有tRNA在此環(huán)中都含有 T?C 。(3)二氫尿嘧啶區(qū) 該區(qū)含有二氫尿嘧啶。氨基酸可與其成酯，該區(qū)在蛋白質(zhì)合成中起攜帶氨基酸的作用。除了氨基酸接受區(qū)、可變區(qū)外，其余每個(gè)區(qū)均含有一個(gè)突環(huán)和一個(gè)臂。末端都具有 CpCpAOH的結(jié)構(gòu)。l 分子中含有較多的修飾成分。對(duì)形成 雙螺旋，不能配對(duì)的區(qū)域形成 突起 (環(huán) ) RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)l RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)研究最多的是tRNA、 rRNA以及一些小分子的 mRNA。l 局部堿基能配 粒體、葉綠體上。l 離子鍵DNA的存在形式染色體與 DNA的關(guān)系l 能夠有效地解釋遺傳信息的儲(chǔ)存、傳送和自我復(fù)制。l H鍵 l 改變介質(zhì)條件和環(huán)境溫度，將影響雙螺旋的穩(wěn)定性。雙螺旋的幾種形式目前已知幾種不同形式 DNA2． DNA雙螺旋的穩(wěn)定性l DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)在生理?xiàng)l件下是很穩(wěn)定的。 A和 T之間形成兩個(gè)氫鍵， G與 C之間形成三個(gè)氫鍵。 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)l （ 4） 兩條 DNA鏈相互結(jié)合以及形成雙螺旋的力是鏈間的堿基對(duì)所形成的氫鍵。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)l （ 3）螺旋橫截面的直徑約為 2 nm， 每條鏈相鄰兩個(gè)堿基平面之間的距離（堿基堆積距離）為 nm（ 實(shí)測(cè) ）， 相鄰核苷酸彼此相差36度。堿基環(huán)平面與螺旋軸垂直，糖基環(huán)平面與堿基環(huán)平面成 90176。有共同的螺旋軸，螺旋平面有大溝和小溝之分。 兩條鏈沿著同一根軸平行盤繞，形成右手雙螺旋結(jié)構(gòu)。l 雙螺旋結(jié)構(gòu)是 DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的最基本形式。1． DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)l DNA分子由兩條 DNA單鏈組成。Chargaff定律：定律：A=T； G=C；A+C=T+G ；A+G=T+C。 DNA纖維進(jìn)行纖維進(jìn)行 X衍射分析：不同衍射分析：不同來源的來源的 DNA分子有分子有相似的圖譜；沿相似的圖譜；沿纖維長(zhǎng)軸有周期纖維長(zhǎng)軸有周期性變化。二、二、 DNA的二級(jí)的二級(jí)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)理論根據(jù)：理論根據(jù)：堿基組成的定、堿基組成的定量分析。的順序。l 而 mRNA(信息 RNA)的堿基順序，則直接為蛋白質(zhì)的氨基酸編碼，并決定蛋白質(zhì)的氨基酸順序。l DNA的堿基順序本身就是遺傳信息存儲(chǔ)的分子形式。第二節(jié) 核酸的結(jié)構(gòu)l 一、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)l 多聚核苷酸是由四種不同的核苷酸單元按特定的順序組合而成的線性結(jié)構(gòu)聚合物，因此，它具有一定的核苷酸順序，即堿基順序。方向性l 在多聚核苷酸（ DNA或 RNA） 鏈中，由于構(gòu)成核苷酸單元的戊糖和磷酸基是相同的，體現(xiàn)核苷酸差別的實(shí)際上只是它所帶的堿基，所以多聚核苷酸鏈結(jié)構(gòu)也可表示為：l 在討論有關(guān)核酸問題時(shí)，一般只關(guān)心其中堿基的種類和順序，所以上式可以進(jìn)一步簡(jiǎn)化為： l 5′ PAPCPGPCPTPGPTPA 3′l 或 5′ ACGCTGTA 3′作業(yè)l 記憶 6個(gè)重要堿基的結(jié)構(gòu)和縮寫。l 多聚核苷酸鏈一端的 C5′ 帶有一個(gè)自由磷酸基，稱為 5′ 磷酸端（常用 5’P 表示）；另一端 C3’ 帶有自由的羥基，稱為 3′ 羥基端（常用 3’OH 表示）。l 由脫氧核糖核苷酸聚合而成的稱為 DNA鏈；l 由核糖核苷酸聚合而成的則稱為 RNA鏈。在 pH 條件下 , cAMP 和 cGMP 的水解能約為 kJ /mol， 比 ATP 水解能高得多。 （ 3） cAMP 和 cGMPl cAMP(3’,5’ 環(huán)腺嘌呤核苷一磷酸 )和 cGMP( 3’,5’ 環(huán)鳥嘌呤核苷一磷酸 )的主要功能是作為細(xì)胞之間傳遞信息的信使。l GTP主要是作為蛋白質(zhì)合成中磷?；w。 (2)GTP (鳥嘌呤核糖核苷三磷酸 )