核酸分子的雜交技術(shù)-文庫吧資料
2025-01-23 05:25本頁面
【正文】 thern blotting ? 1975年，英國 Edwen Southern創(chuàng)建 ? 檢測 DNA雜交方法，即將 DNA電泳、轉(zhuǎn)印到固相支持物上，用探針進(jìn)行檢測的方法。反式作用因子特點： ① 三個功能結(jié)構(gòu)域： DNA識別結(jié)合域； 轉(zhuǎn)錄活性域； 結(jié)合其他蛋白的結(jié)合域 ②能識別并結(jié)合順式作用元件 ③正調(diào)控與負(fù)調(diào)控 結(jié) 構(gòu) 基 因G C G C C A A T T A T A內(nèi) 含 子外 顯 子 外 顯 子轉(zhuǎn) 錄 起 始C A A T 盒G C 盒增 強 子順 式 作 用 元 件T A T A 盒 ( H o g n e s s b o x )第十章 核酸分子雜交技術(shù) ? 核酸分子雜交的基本原理 ? 核酸分子雜交的基本方法 ? 探針的標(biāo)記 第一節(jié) 核酸分子雜交的基本原理 ? 核酸分子雜交的基本原理：具有互補序列的兩條核酸單鏈在一定條件下，按堿基配對原則形成雙鏈的過程。 ? 探針 Hybridization of Nucleic Acids RNA DNA1 DNA2 DNA Southern hybridization Northern hybridization Juang RH (2022) BCbasics 探針 一、 DNA變性與復(fù)性 ①定義：氫鍵斷裂，單鏈 ②方法 :熱變性 : 90~100℃ 熔解溫度 (Tm) 酸堿變性 :常采用堿變性 化學(xué)試劑變性 。 ? 應(yīng)用：基因組 DNA的定性和定量分析 基因診斷、分子克隆、法醫(yī)學(xué)等 Southern bloting的主要步驟 DNA樣品的制備、酶切 DNA 樣品的電泳分離：瓊脂糖凝膠電泳 DNA的變性：堿變性 (印跡 )： 毛細(xì)管虹吸印跡法、電轉(zhuǎn)印法、真空轉(zhuǎn)移法 (預(yù)雜交、雜交、洗膜 ) ? 步驟 DNA樣品的制備、酶切 ? DNA的提取原理：裂解細(xì)胞，使 DNA釋放，用 TE液溶解，交替使用酚、氯仿兩種蛋白質(zhì)變性劑，有效去除蛋白質(zhì) ? 標(biāo)準(zhǔn)程序：酚 —— 酚 氯仿 —— 氯仿。 ： –能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究 –不需從組織或細(xì)胞中提取核酸 –能準(zhǔn)確反映組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài) 核酸原位雜交的基本步驟 ：載玻片 – 用去垢劑或蛋白酶除去核酸表面蛋白質(zhì) (Fluorescence in situ Hybridization； FISH) 基本原理是將 DNA探針用熒光染料標(biāo)記，然后將標(biāo)記的探針直接原位雜交到染色體上，來檢測 DNA序列在染色體上的定位。 mFISH ) (Comparative Genomic Hybrid
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