分子雜交ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-18 06:23本頁(yè)面
【正文】 1 SSC/%SDS 雜交溫度 SSC/%SDS ⑷ 放射性自顯影或生化檢測(cè)。 印跡轉(zhuǎn)移方式 (1) —— 毛細(xì)管滲吸法 白瓷盤 玻璃板 濾紙 凝膠 尼龍膜 濾紙 吸水紙 玻璃板 重物 毛細(xì)管滲吸法 真空轉(zhuǎn)膜槽 濾紙 尼龍膜 凝膠 蓋子 印跡轉(zhuǎn)移方式 (2) — 真空轉(zhuǎn)膜 印跡轉(zhuǎn)移方式 (3)—— 電轉(zhuǎn)移 ⑵ 分子雜交 ① 預(yù)雜交 目的： 將濾膜的空白處用魚(yú)精 DNA或牛奶蛋白封閉起來(lái)，防止在雜交過(guò)程中濾膜本身對(duì)探針的吸附 。邁勒 薩瑟恩 （ Edwin Mellor Southern）創(chuàng)建。 探針的標(biāo)記技術(shù) 均勻標(biāo)記 末端標(biāo)記 均勻標(biāo)記 ⑴ 切口平移法標(biāo)記 DNaseI HO P 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ DNaseI與 Pol I 的 切口移位 Pol I ⑵ 隨機(jī)引物標(biāo)記 ⑶ PCR擴(kuò)增標(biāo)記 要求： [a32P]dNTP 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 熱變性 隨機(jī)引物 退火 ?32PdNTP Klenow 酶 ~~ 5’ 5’~~ 5’~~ ~~ 5’ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ 末端標(biāo)記
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