《分子雜交》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 /%SDS ⑷ 放射性自顯影或生化檢測。 應(yīng)用：在轉(zhuǎn)錄水平上某基因是否表達，在有合適對照的情況下，通過雜交信號的強弱可比較基因表達的強弱。 以上分子雜交可以獲得精確的結(jié)果，但操作繁雜。 用途 ：從質(zhì)?；蝠ち］d體構(gòu)建的基因文庫中尋找陽性克隆子，然后 Southern雜交進一步篩選。 當(dāng)核酸分子的斑點面積變得更小時，在單位面積濾膜上處理的樣品的數(shù)量更多。 作業(yè)： 探針的標(biāo)記技術(shù)有哪些？ southern雜交技術(shù)基本操作步驟是什么？ 。 小結(jié)： 本節(jié)主要講述探針的標(biāo)記技術(shù)、常見分子雜交基本操作技術(shù)。 ⑵ 分子雜交 用途： 從噬菌體載體構(gòu)建的基因文庫中尋找陽性克隆子，通過 Southern雜交進一步驗證。 當(dāng)樣品量比較大時，可以采用簡化的方式做初步的檢測，然后再對陽性樣品作精確的檢測。 將待檢測蛋白質(zhì)（或酶）經(jīng) PAGE電泳并染色后，轉(zhuǎn)移到濾膜上固定，再用“抗體 抗原”免疫反應(yīng)鑒別濾膜上的蛋白質(zhì)。 吸附有 ssDNA的膜 Southern 印跡雜交的技術(shù)流程 Southern雜交 Edward Southern （ 1） 提取總 DNA （ 2） 酶解 （ 3） 電泳 （ 4） 轉(zhuǎn)移到濾膜 （ 5） 變性解鏈 （ 6） DNA探針及雜交 （ 7） 洗脫 （ 8） 放射自顯影 （ 9） 比較分析 Southern雜交的主要應(yīng)用： 判斷某一生物樣品中是否存在某一基因，以及該基因所在的限制性酶切片段的大小。 印跡轉(zhuǎn)移方式 (1) —— 毛細(xì)管滲吸法
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