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分子雜交ppt課件(留存版)

2025-06-26 06:23上一頁面

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【正文】 合適對照的情況下,通過雜交信號的強(qiáng)弱可比較基因表達(dá)的強(qiáng)弱。 作業(yè): 探針的標(biāo)記技術(shù)有哪些? southern雜交技術(shù)基本操作步驟是什么? 。 將待檢測蛋白質(zhì)(或酶)經(jīng) PAGE電泳并染色后,轉(zhuǎn)移到濾膜上固定,再用“抗體 抗原”免疫反應(yīng)鑒別濾膜上的蛋白質(zhì)。 當(dāng)用一個(gè)標(biāo)記核酸分子與核酸樣品雜交,便可以查明該樣品中是否存在與該標(biāo)記核酸分子具有同源性的分子。 預(yù)雜交液實(shí)際上就是不含探針的雜交液 ,其中主要含有魚精 DNA、牛血清等,這些大分子可以封閉膜上所有非特異性吸附位點(diǎn)。 斑點(diǎn)雜交 直接將 DNA或 RNA以斑點(diǎn)的形式固定在濾膜上,然后進(jìn)行分子雜交。 探針 :針對某一蛋白質(zhì)制備的特異性抗體。 2 探針的概念及其標(biāo)記技術(shù) 探針 (probe): 用于檢測特定基因或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物存在或表達(dá)的 DNA、 RNA或寡核苷酸。 印跡轉(zhuǎn)移方式 (1) —— 毛細(xì)管滲吸法 白瓷盤 玻璃板 濾紙 凝膠 尼龍膜 濾紙 吸水紙 玻璃板 重物 毛細(xì)管滲吸法 真空轉(zhuǎn)膜槽 濾紙 尼龍膜 凝膠 蓋子 印跡轉(zhuǎn)移方式 (2) — 真空轉(zhuǎn)膜 印跡轉(zhuǎn)移方式 (3)—— 電轉(zhuǎn)移 ⑵ 分子雜交 ① 預(yù)雜交 目的: 將濾膜的空白處用魚精 DNA或牛奶蛋白封閉起來,防止在雜交過程中濾膜本身對探針的吸附 。 ⑵ 分子雜交 用途: 從噬菌體載體構(gòu)建的基因文庫中尋找陽性克隆子,通過 Southern雜交進(jìn)一步驗(yàn)證。 用途 :從質(zhì)?;蝠ち]d體構(gòu)建的基因文庫中
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