【正文】 以利于產(chǎn)物的合成。將孢子接入含液體培養(yǎng)基的搖瓶中，于搖瓶機(jī)上恒溫振蕩培養(yǎng)，獲得菌絲體（短菌絲），作為種子。 ? 培養(yǎng)時(shí)間為 5~14天。 放線菌孢子的制備 ? 放線菌的孢子培養(yǎng)一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。 ? 培養(yǎng)的溫度一般為 25~28?C。 ? 細(xì)菌菌體培養(yǎng)時(shí)間一般為 1~2天，產(chǎn)芽孢的細(xì)菌培養(yǎng)則需要 5~10天。 （一）孢子的制備 細(xì)菌孢子的制備 ? 細(xì)菌的斜面培養(yǎng)基多采用碳源限量而氮源豐富的配方。 種子擴(kuò)培的目的 ? 接種量的需要 ? 菌種的馴化 ? 縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平 種子的制備過程 ? 種子制備的過程大致可分為： ? 實(shí)驗(yàn)室種子制備階段 ? 生產(chǎn)車間種子制備階段 一、實(shí)驗(yàn)室種子的制備 ?實(shí)驗(yàn)室種子的制備一般采用兩種方式 ? 對(duì)于產(chǎn)孢子能力強(qiáng)的及孢子發(fā)芽、生長(zhǎng)繁殖快的菌種可以 采用固體培養(yǎng)基或斜面（靜置培養(yǎng)）培養(yǎng)孢子 ，孢子可直接作為種子罐的種子，這樣操作簡(jiǎn)便，不易污染雜菌。這些純種培養(yǎng)物稱為 種子 。 ? 篩選出來的融合重組子還需要對(duì)它們進(jìn)行生理生化及生產(chǎn)性能的測(cè)定。 ? 融合重組子的檢出方法： ? 直接法 將融合液涂布在不補(bǔ)充親株生長(zhǎng)需要的生長(zhǎng)因子高滲再生培養(yǎng)基平板上，直接篩選出原養(yǎng)型重組子。 原生質(zhì)體再生 原生質(zhì)體再生 就是使原生質(zhì)體重新長(zhǎng)出細(xì)胞壁 ， 恢復(fù)完整的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)； 為獲得較高的再生率 ， 在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)避免剪切力過大使原生質(zhì)體破裂； 涂布時(shí) ， 原生質(zhì)體濃度不宜過高； 菌齡 、 再生時(shí)的溫度 、 溶菌酶用量和溶壁時(shí)間等因素都會(huì)影響原生質(zhì)體的再生 。 原生質(zhì)體融合 ? 兩親本的原生質(zhì)體在 高滲條件下 使之混合，由聚乙二醇（ PEG）作為 助融劑 ，使它們互相凝集，發(fā)生 細(xì)胞融合 ，接著兩親本基因組 由接觸到交換 ，從而 實(shí)現(xiàn)遺傳重組 。 根據(jù)微生物細(xì)胞壁組成和結(jié)構(gòu)的不同 ， 采用不同的酶 ， 有時(shí)還要采取一些措施 ， 如添加甘氨酸 、蔗糖或抗生素等 ， 以提高細(xì)胞壁對(duì)酶解的敏感性； 原生質(zhì)體對(duì)滲透壓極其敏感 ， 低滲易引起細(xì)胞破裂 。 原生質(zhì)體融合技術(shù)一般步驟 選擇親株 選擇遺傳性狀穩(wěn)定且具有優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的兩個(gè)親株； 親株帶上遺傳標(biāo)記； 測(cè)定遺傳標(biāo)記的穩(wěn)定性 。 這樣往往可以提高篩選效率 。 （ 4） 可以和其他育種方法相結(jié)合 ， 把由其它方法得到的優(yōu)良性狀通過原生質(zhì)體融合再組合到一個(gè)單株中 。 參與融合的親株數(shù)并不限于一個(gè) ， 可以多至三個(gè) 、 四個(gè) ，這足一般常規(guī)雜交所達(dá)不到的 。即使是 相同接合型的真菌細(xì)胞 也能發(fā)生原生質(zhì)體的相互融合， 并可對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行 轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染 。 在再生成細(xì)胞的菌落中就有可能獲得具有理想性狀的 重組子 。 遺傳標(biāo)記 所謂 原生質(zhì)體融合 就是把兩個(gè)親本的細(xì)胞壁分別通過酶解作用加以瓦解 ， 使菌體細(xì)胞在高滲環(huán)境中釋放出只有原生質(zhì)膜包裹著的球狀體 （ 稱 原生質(zhì)體 ） 。 所謂 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株 是微生物經(jīng)誘變劑處理后產(chǎn)生的一種 生化突變體 。 常用的遺傳標(biāo)記有 顏色 、 營(yíng)養(yǎng)要求和抗藥性 等 。 微生物 雜交育種 所使用的 配對(duì)菌株 稱為 直接親本 。 雜交育種 是指將兩個(gè) 基因 型不同的菌株經(jīng) 吻合 （ 或接合 ） 使 遺傳物質(zhì)重新組合 ， 從中 分離和篩選 具有新性狀的菌株 。 但是 ， 一個(gè)菌種 長(zhǎng)期使用誘變劑處理之后 ， 其 生活能力 一般要逐漸下降 ， 例如 生長(zhǎng)周期延長(zhǎng) ，孢子量減少 ， 代謝減慢 ， 產(chǎn)量增加緩慢 ， 誘變因素對(duì)產(chǎn)量基因影響的有效性降低 等 ?？梢栽斐缮x途徑 完全中斷。 脫氨劑： 堿基脫氨或脫氮，引起堿基對(duì)轉(zhuǎn)換， 造成的遺傳損傷較多。 2）化學(xué)誘變劑：堿基類似物（ 5BU）、脫氨劑（羥胺、 亞硝酸）、 嵌入劑（吖啶類）等。誘變效率高，但它可能 影響鄰近基因的性能。 總之 ， 在誘變育種過程中要正確處理 出發(fā)菌株 ， 誘變因素和篩選條件三者的關(guān)系 。 E 高產(chǎn)菌株的獲得需要篩選條件的配合 在誘變育種過程中高產(chǎn)菌株的獲得還必須有合適的 篩選條件的配合 。 因?yàn)椴煌木N表現(xiàn)的 變異形式 是不同的 ，從一個(gè)菌種的變異規(guī)律去發(fā)現(xiàn)那些與 產(chǎn)量有關(guān)的特性 ，并根據(jù)這些特性 ， 分門別類地挑選一定數(shù)最的典型菌株進(jìn)行 發(fā)酵和鑒定 ， 以確定各種 類型與產(chǎn)量 之間的關(guān)系 。 D 變異菌株的篩選 誘變育種工作的一個(gè)主要任務(wù)是獲得 高產(chǎn)變異菌株 。 對(duì)不同微生物使用的劑量是不同的 ， 致死率取決于誘變劑量 ， 而 致死率和變異率 之間有一定關(guān)系 。 C 劑量選擇 ? 各種 誘變因素 有它們各自的誘變劑量單位 ， 如紫外線劑量單位用焦耳 ， x一射線劑量單位是庫(kù) （ 侖 ）每千克 ， 中子劑量單位是戈 。 B 復(fù)合誘變因素的使用 在微生物 誘變育種 中 ， 可利用各種 物理 、 化學(xué)誘變因素 來處理菌種 。 用作誘變的出發(fā)菌株必須對(duì)它的 產(chǎn)量、形態(tài)、生理 等方面有相當(dāng)了解。有些微生物 比較穩(wěn)定，其遺傳物質(zhì)耐誘變劑的作用強(qiáng) 。 ? 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的回復(fù)突變株中也可獲得抗反饋突變株。 （ 2）抗反饋?zhàn)瓒艉涂狗答佉种仆蛔兙甑暮Y選 ? 調(diào)節(jié)基因或操縱基因發(fā)生突變，使產(chǎn)生的阻遏蛋白不能再和終產(chǎn)物結(jié)合或結(jié)合后不能作用于已突變的操縱基因，因此不再起反饋?zhàn)瓒糇饔茫? ? 編碼酶的結(jié)構(gòu)基因發(fā)生突變，使變構(gòu)酶不再具有結(jié)合終產(chǎn)物的能力但仍具有催化活性，從而解除了反饋抑制。 ? 一般突變率隨誘變劑量的增大而增高，但達(dá)到一定劑量后，突變率會(huì)下降。 ? 表型延遲 就是指某一突變?cè)?DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂后，才在細(xì)胞表型上顯示出來，造成不純的菌落。 經(jīng)誘變處理后 ， 微生物的遺傳物質(zhì) 、 DNA和 RNA的化學(xué)結(jié)構(gòu) 發(fā)生改變 ， 從而引起微生物的 遺傳變異 。 誘發(fā)突變 是指用各種物理 、 化學(xué)因素人工誘發(fā)的基因突變 。 （ 2） 基因突變 是指 DNA分子結(jié)構(gòu)中的某一部位發(fā)生變化（又稱 點(diǎn)突變 ）。 ?突變主要包括 染色體畸變 和 基因突變 二大類 。代謝更加旺盛 ,生產(chǎn)性能提高 。 一般認(rèn)為引起自然突變有 兩個(gè)原因 ：即 多因素低劑量的誘變效應(yīng) 和 互變異構(gòu)效應(yīng) 。 自然選育 在生產(chǎn)過程中 ， 不經(jīng)過人工處理 ， 利用菌種的 自然突變 而進(jìn)行 菌種篩選 的過程叫做 自然選育 。 ? 目前菌種選育常采用 自然選育 和 誘變育種 等方法，帶有一定的 盲目性 ，尚屬于 經(jīng)典育種 的范疇。 據(jù)有的國(guó)家規(guī)定 ， 微生物中除啤酒酵母 、 脆壁酵母 、 黑曲霉 、 米曲霉和枯草桿菌作為食用無(wú)須作毒性試驗(yàn)外 ， 其他微生物作為食用 ， 均需