項目2：微生物發(fā)酵技術(shù)任務(wù)1：微生物菌種篩選與保藏-文庫吧資料
2024-10-06 08:16本頁面
【正文】 細胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細胞成分的構(gòu)型 。還具有體積小 、 不易污染 、 便于運輸?shù)葍?yōu)點 ， 是一種用得最為廣泛的菌種保藏方法 。 (六 )真空冷凍干燥法 ? 真空冷凍干燥保藏法是兼具低溫 、 干燥 、除氧三方面菌種保藏的主要因素 ， 除不宜于絲狀真菌的菌絲體外 ， 對病毒 、 細菌 、 放線菌 、 酵母及絲狀菌孢子等各類微生物都適用 ， 不宜用凍干法保存的微生物不到 2%。將培養(yǎng)好的斜面菌種用無菌種用無菌水制成高濃度的菌懸液 (108～ 1010/ml)。 (五 )甘油管保藏法 ? 本法也是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達到保藏目的 。 (小 )米保藏法 ? 是根據(jù)我國制曲原理加以改進的一種方法。是 3濾紙剪成 5mm 50mm的小條 ， 放入干燥的培養(yǎng)皿中滅菌 。 用沙土管保藏的某些抗生素產(chǎn)生菌保藏期可達 18年 (土霉素和鏈霉素產(chǎn)生菌 )到 22年(新霉素產(chǎn)生菌 )， 但對利福霉素 、 卡那霉素 、 四環(huán)素等容易產(chǎn)生變異的菌種 ，就不適合作長期的沙土管保存 。 從斜面取出的孢子放入沙土管中混勻后 ， 可以不抽真空直接放干燥器內(nèi)保存 。 這時管內(nèi)砂土松散 ， 表明已干燥 。 ? 也可將真菌分生孢子用接種環(huán)從斜面直接挑取放入沙土中 。 經(jīng)肉湯檢查確實證明無菌即可使用 。 取河 (海 )沙 ， 過 (24目 )篩 ， 用 10％ 鹽酸浸泡 24h， 倒去鹽酸用清水沖洗至 pH呈中性 ， 去水烘干或曬干 。 此法用于細菌芽孢或產(chǎn)分生孢子的菌種 ， 是現(xiàn)在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中較常用的菌種保藏方法 。 (三 )液體石蠟低溫封存法 ? 具體操作是：菌種為斜面培養(yǎng)菌種 ， 斜面不宜過長；選擇純凈優(yōu)質(zhì)石蠟油 ， 置三角燒瓶中經(jīng)過 121℃ 高壓蒸汽滅菌 1～2h， 將其放烘箱中 (160℃ 左右 )干熱處理 ，去除滅菌時滲入的水分 ， 待石蠟油變得清澈透明后冷卻即可加入斜面 ， 斜面上不能出現(xiàn)氣泡 ， 液蠟添加量以高出斜面頂部約 1cm左右為宜 。 保藏溫度要求在 4～ 4℃ 下 。因此，一些貴重菌株及生產(chǎn)優(yōu)良菌株不宜用此法保藏。 穿刺培養(yǎng)是將含 ％ ～ ％ 的瓊脂培養(yǎng)基裝試管滅菌后直立冷凝后 ， 用接種針尖挑取少量菌體 ， 垂直刺入瓊脂培養(yǎng)基中心 ， 放在適當(dāng)溫度下培養(yǎng) ， 待菌長好后即可放低溫保存 ， 此法較斜面保存有利 ， 大腸桿菌可保藏 2年以上不發(fā)生明顯變異 。 (二 )低溫定期移植法 ? 把培養(yǎng)好的斜面菌種放在低溫干燥處保存 ，定期移植 ， 一般 3～ 6個月移植一次 (視菌種特征而定 )。 因此 ， 保藏時間不宜過長 ， 一般不超過 1～ 3個月為宜 。 (二 )、菌種保藏 ? (一 )低溫保藏法 ? (二 )低溫定期移植法 ? (三 )液體石蠟封存保藏法 ? (四 )固體曲保藏法 ? (五 )甘油管保藏法 ? (六 )真空冷凍干燥法 ? (七 )液氮超低溫保存 現(xiàn)行的菌種保藏方法有下列諸種 : (一 )低溫保藏法 ? 這是一種常用的簡便方法 。 如快速降溫 ， 胞內(nèi)也很快形成冰晶 ， 胞內(nèi)外滲透壓基本平衡 ， 同時胞內(nèi)冰晶較小 ， 對細胞及原生質(zhì)膜的損傷也較小 ， 菌株不易死亡 ， 影響也較小 。 在作低溫保藏時 ， 注意盡量不損傷細胞 。 微生物生長要求適宜的溫度 、 水分 、 空氣和營養(yǎng)物質(zhì)等 ， 如將菌種處于低溫 、 干燥 、 無氧和缺乏營養(yǎng)的條件下 ， 就可以使菌種暫時處于休眠狀態(tài) 。 菌種保藏 ? 菌種保藏有許多的方法 ， 其共同的目標是把菌株的優(yōu)良性狀保存下來 ， 防止退化 、死亡或雜菌污染 。 前體：自身不能合成； 自身能合成，但產(chǎn)量低； 自身能合成，但有反饋調(diào)節(jié)作用。 ? 例：半胱氨酸和纈氨酸是青霉素母核。 ? 篩選淀粉酶活性高的突變株。 ? 低親和力的磷酸鹽轉(zhuǎn)運系統(tǒng) I； ? 高親和力的磷酸鹽轉(zhuǎn)運系統(tǒng) II。 ? 滲漏缺陷型：遺傳性障礙不完全的營養(yǎng)缺陷型。 ? (1)利用營養(yǎng)缺陷型篩選 ? 芳香族氨基酸與氯霉素有共同的凝膠體莽草酸，選育芳香族氨基酸缺陷型，有利于積累氯霉素。 ? (2)篩選抗反饋調(diào)節(jié)突變株 ? ①篩選結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株； ? ②利用回復(fù)突變篩選抗反饋突變菌株。 3 篩選自動化與篩選微型化 （二）理性化篩選 運用遺傳學(xué)、生物化學(xué)的原理，根據(jù)產(chǎn)物已知的或可能的生物合成途徑、代謝調(diào)控機制和產(chǎn)物分子結(jié)構(gòu)來進行設(shè)計和采用一些篩選方法，以打破微生物原有的代謝調(diào)控機制
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