項目2：微生物發(fā)酵技術(shù)任務(wù)1：微生物菌種篩選與保藏-全文預(yù)覽
【正文】 絲狀菌孢子等各類微生物都適用 ， 不宜用凍干法保存的微生物不到 2%。 (五 )甘油管保藏法 ? 本法也是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達(dá)到保藏目的 。是 3濾紙剪成 5mm 50mm的小條 ， 放入干燥的培養(yǎng)皿中滅菌 。 從斜面取出的孢子放入沙土管中混勻后 ， 可以不抽真空直接放干燥器內(nèi)保存 。 ? 也可將真菌分生孢子用接種環(huán)從斜面直接挑取放入沙土中 。 取河 (海 )沙 ， 過 (24目 )篩 ， 用 10％ 鹽酸浸泡 24h， 倒去鹽酸用清水沖洗至 pH呈中性 ， 去水烘干或曬干 。 (三 )液體石蠟低溫封存法 ? 具體操作是：菌種為斜面培養(yǎng)菌種 ， 斜面不宜過長；選擇純凈優(yōu)質(zhì)石蠟油 ， 置三角燒瓶中經(jīng)過 121℃ 高壓蒸汽滅菌 1～2h， 將其放烘箱中 (160℃ 左右 )干熱處理 ，去除滅菌時滲入的水分 ， 待石蠟油變得清澈透明后冷卻即可加入斜面 ， 斜面上不能出現(xiàn)氣泡 ， 液蠟添加量以高出斜面頂部約 1cm左右為宜 。因此，一些貴重菌株及生產(chǎn)優(yōu)良菌株不宜用此法保藏。 (二 )低溫定期移植法 ? 把培養(yǎng)好的斜面菌種放在低溫干燥處保存 ，定期移植 ， 一般 3～ 6個月移植一次 (視菌種特征而定 )。 (二 )、菌種保藏 ? (一 )低溫保藏法 ? (二 )低溫定期移植法 ? (三 )液體石蠟封存保藏法 ? (四 )固體曲保藏法 ? (五 )甘油管保藏法 ? (六 )真空冷凍干燥法 ? (七 )液氮超低溫保存 現(xiàn)行的菌種保藏方法有下列諸種 : (一 )低溫保藏法 ? 這是一種常用的簡便方法 。 在作低溫保藏時 ， 注意盡量不損傷細(xì)胞 。 菌種保藏 ? 菌種保藏有許多的方法 ， 其共同的目標(biāo)是把菌株的優(yōu)良性狀保存下來 ， 防止退化 、死亡或雜菌污染 。 ? 例：半胱氨酸和纈氨酸是青霉素母核。 ? 低親和力的磷酸鹽轉(zhuǎn)運系統(tǒng) I； ? 高親和力的磷酸鹽轉(zhuǎn)運系統(tǒng) II。 ? (1)利用營養(yǎng)缺陷型篩選 ? 芳香族氨基酸與氯霉素有共同的凝膠體莽草酸，選育芳香族氨基酸缺陷型，有利于積累氯霉素。 3 篩選自動化與篩選微型化 （二）理性化篩選 運用遺傳學(xué)、生物化學(xué)的原理，根據(jù)產(chǎn)物已知的或可能的生物合成途徑、代謝調(diào)控機(jī)制和產(chǎn)物分子結(jié)構(gòu)來進(jìn)行設(shè)計和采用一些篩選方法，以打破微生物原有的代謝調(diào)控機(jī)制，獲得能大量形成產(chǎn)物的高產(chǎn)突變株。 （二）誘變劑的選擇 （ 1）多種誘變劑輪換使用； （ 2）最適劑量。 二 誘變育種方案的設(shè)計 （一）制定篩選目標(biāo) 高產(chǎn)性狀再加輔助目標(biāo)。 （三）從前突變到突變 經(jīng)過修復(fù)系統(tǒng)后繼續(xù)保留的突變。 ? 選育方法： ? 1 自然選育； ? 2 誘變育種； ? 3 原生質(zhì)體技術(shù)； ? 4 雜交育種； ? 5 分子生物學(xué)方法。 實施后及時進(jìn)行實訓(xùn)報告的撰寫也總結(jié)。 總經(jīng)理：協(xié)調(diào)監(jiān)督各部工作，最后拿出完整的計劃書。 2. 學(xué)生模擬組建運營一個菌種保藏服務(wù)機(jī)構(gòu)，撰寫計劃書 (在理論教學(xué)期間完成 )。 分配實操任務(wù) (菌種篩選與保藏 )。 品控部：制定菌種保藏質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)及檢測方法。 實施過程中考核操作技能。 ? 選育目的： ? 1 產(chǎn)生新的生物活性物質(zhì)； ? 2 改變產(chǎn)品組分，改進(jìn)質(zhì)量； ? 3 簡化生產(chǎn)工藝條件，縮短生產(chǎn)周期； ? 4 適應(yīng)新的原材料； ? 5 提高產(chǎn)量。 ? 3 經(jīng)誘變劑處理后的退化變異 二 自然選育的方法 1 單孢子懸浮液的制備； 2 分離及單菌落培養(yǎng)； 3 篩選； 第二節(jié) 誘變育種 一 突變誘發(fā)過程 （一）誘變劑接觸 DNA分子前； （二） DNA損傷的修復(fù)； 1 光復(fù)合修復(fù)； 2 切補(bǔ)修復(fù)； 3 重組修復(fù)； 4 SOS修復(fù)系統(tǒng)； 5 DNA多聚酶的校正作用。 1 分離性延遲； 2 生理性延遲。 三 突變的誘發(fā) （一）出發(fā)菌株的選擇 （ 1）選擇純種； （ 2）選擇具有優(yōu)良性狀的出發(fā)菌株； （ 3）對誘變劑敏感。 ? 2 瓊脂塊篩選法 ? 優(yōu)點：操作簡便、速度快； ? 缺點：固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)差距大，不能準(zhǔn)確反應(yīng)生產(chǎn)能力。 ? 2 次級代謝產(chǎn)物高產(chǎn)菌株的篩選 ? 次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的條件
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