【正文】 遺傳重組 。在再生細胞的菌落中就有可能獲得具有理想性狀的 重組子 。 ? 培養(yǎng)時間一般為 4~14天。 ? 例如在四環(huán)素、土霉素生產(chǎn)中，配制產(chǎn)孢子斜面培養(yǎng)基用的麩皮，因小麥產(chǎn)地、品種、加工方法及用量的不同對孢子質(zhì)量的影響也不同。 （ 2）冷藏時間 ? 斜面冷藏對孢子質(zhì)量的影響與孢子成熟程度有關(guān)。因此首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性，其次是提供種子培養(yǎng)的適宜環(huán)境保證無雜菌侵入，以獲得優(yōu)良種子。 三、菌種保藏的方法 C 沙土管保藏法（ 細菌，霉菌，防線菌 ） 這是國內(nèi)常采用的一種方法。 保護劑還可以起 支持作用 ，使微生物疏松地固定在上面。 我國國內(nèi)目前已有 部分單位采用液氮法保存菌種 。 美國 ATCC采用 先將菌液降溫到 0℃ ， 再以 每分鐘降低 1℃ 的速度 ， 一直降低到－ 38℃ ， 然后才把裝有菌液的安瓿管放入 液氮罐的氣相中 。所以，國內(nèi)外都已較普遍地應(yīng)用。 一般保存期為三個月到六個月 。 接種量 ? 接種量的大小決定于生產(chǎn)菌種在發(fā)酵罐中生長繁殖的速度，采用較大的接種量可以縮短發(fā)酵罐中菌絲繁殖達到高峰的時間，使產(chǎn)物的形成提前到來，并可減少雜菌的生長機會。從表中看出相對濕度在 40%~45%時孢子數(shù)量最多，且孢子顏色均勻，質(zhì)量較好。 ?確定種子罐級數(shù)需注意的問題 ? 種子級數(shù)越少越好，可簡化工藝和控制，減少染菌機會 ? 種子級數(shù)太少，接種量小，發(fā)酵時間延長，降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率，增加染菌機會 ? 雖然種子罐級數(shù)隨產(chǎn)物的品種及生產(chǎn)規(guī)模而定。 ? 培養(yǎng)溫度一般為 37?C。 原生質(zhì)體制備 一般采用酶解法除壁 。 營養(yǎng)標記菌株 （ 即 營養(yǎng)缺陷型菌株 ） 是最常用的遺傳標記之一 。 幾種常見的物理、化學誘變劑的使用方法 1）物理誘變劑：紫外線、 X— 射線、 γ— 射線，快中子； 電離輻射特點： 導致 DNA斷裂缺失，造成不可回復 的缺失突變。如果用這種菌株于生產(chǎn)是很有益的，而用 作出發(fā)菌株則不適宜 。 （ 1） 染色體畸變 是指染色體或 DNA片斷的 缺失、易位、逆位、重復 等。 ? 復篩過程中，要結(jié)合培養(yǎng)條件進行。 某些細菌的富集條件 富集對象 接種菌樣 添加營養(yǎng)物 (g) 特殊培養(yǎng)條件 好氧氨基酸氧化菌 土壤 – 好氧， 好氧性芽孢桿菌 土壤，巴氏消毒 – 好氧， 氨基酸發(fā)酵性梭菌 土壤，巴氏消毒 – 厭氧， 耐堿解尿素芽孢菌 土壤，巴氏消毒 尿素 50 好氧， 厭氧八疊球菌 土壤 葡萄糖 20 厭氧， pH2~3 乳酸菌 植物體或牛奶 葡萄糖 20 厭氧， 腸道細菌 土壤或污水 葡萄糖 20， CaCO320 好氧或厭氧， 丙酸菌 干酪 乳酸鈉 20 厭氧， 醋酸菌 果實或生啤酒 乙醇 40 好氧， 注：培養(yǎng)基成分為酵母膏 10g， KH2PO4或 K2HPO4 ， MgSO4 這些特性包括形態(tài) 、培養(yǎng)特征 、 營養(yǎng)要求 、 生理生化特性 、 發(fā)酵周期 、 產(chǎn)品品種和產(chǎn)量 、 耐受最高溫度 、 生長和發(fā)酵最適溫度 、 最適 pH值 、 提取工藝等 。 ? 增殖： 人為地通過控制養(yǎng)分或培條件 ， 使所需菌種增殖培養(yǎng)后 ， 在數(shù)量上占優(yōu)勢 。 ? 例如碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長，而其它微生物就可能死亡或淘汰。 2）搖瓶發(fā)酵篩選：將待測菌株進行液體振蕩培養(yǎng)，取 發(fā)酵濾液進行活力測定。代謝更加旺盛 ,生產(chǎn)性能提高 。 ? 營養(yǎng)缺陷型的回復突變株中也可獲得抗反饋突變株。 E 高產(chǎn)菌株的獲得需要篩選條件的配合 在誘變育種過程中高產(chǎn)菌株的獲得還必須有合適的 篩選條件的配合 。 微生物 雜交育種 所使用的 配對菌株 稱為 直接親本 。 這樣往往可以提高篩選效率 。 種子擴培的目的 ? 接種量的需要 ? 菌種的馴化 ? 縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平 種子的制備過程 ? 種子制備的過程大致可分為： ? 實驗室種子制備階段 ? 生產(chǎn)車間種子制備階段 一、實驗室種子的制備 ?實驗室種子的制備一般采用兩種方式 ? 對于產(chǎn)孢子能力強的及孢子發(fā)芽、生長繁殖快的菌種可以 采用固體培養(yǎng)基或斜面（靜置培養(yǎng)）培養(yǎng)孢子 ，孢子可直接作為種子罐的種子，這樣操作簡便，不易污染雜菌。 ? 種子罐級數(shù)取決于： ? 菌種生長特性（如菌種傳代后的穩(wěn)定性）、孢子發(fā)芽及菌體繁殖速度； ? 所采用發(fā)酵罐的容積 ? 另外還與發(fā)酵罐中種子培養(yǎng)液的最低 接種量（種子液體積 /培養(yǎng)液體積） 以及種子罐與發(fā)酵罐的容積比等有關(guān)。 （ 2）濕度 制備斜面孢子培養(yǎng)基的濕度對孢子的數(shù)量和質(zhì)量有較大的影響。時間太長，菌種趨于老化，生產(chǎn)能力下降，菌體自溶；種齡太短，造成發(fā)酵前期生長緩慢。一般可通過保持培養(yǎng)基營養(yǎng)成分在最低水平缺氧狀態(tài)，干燥和低溫，使菌種處于“體眠”狀態(tài)，抑制其繁殖能力。在這樣的環(huán)境中，微生物的生長和代謝都暫時停止，不易發(fā)生變異。用保護劑制備好菌液后，加入準備好的安瓶管中，一般安瓿管的裝量為－ 1mL。 ?復壯措施： ? 對已衰退菌種配合一定培養(yǎng)條件進行單細胞分離純化 ? 淘汰衰退的個體 ? 選擇合適的培養(yǎng)基 思考題 名詞解釋 多因素低劑量的誘變效應(yīng)、互變異構(gòu)效應(yīng)、染色體畸變、基因突變、表型延遲、營養(yǎng)缺陷型、雜交育種、原生質(zhì)體融合、原生質(zhì)體再生、菌種的擴培、接種量、菌種退化、菌種復壯 采集土壤微生物樣品時應(yīng)該注意哪些問題？ 什么是增殖培養(yǎng)？為什么要進行增殖培養(yǎng)？ 土壤中分離純化微生物的方法有哪些？請簡述之。 其保存期最長 。 C間歇滅菌三次 ， 滅菌試驗合格后烘干備用 。 產(chǎn)物生成量 ?在抗生素發(fā)酵中，產(chǎn)物生成量是考察種子質(zhì)量的重要指標，因為種子液中產(chǎn)物生成量的多少間接反映種子的生產(chǎn)能力和成熟程度。 ? 冷藏時間對孢子的生產(chǎn)能力也有影響。磷含量太多或太少也會影響孢子的質(zhì)量。 ? 培養(yǎng)時間為 5~14天。 ? 融合重組子的檢出方法： ? 直接法 將融合液涂布在不補充親株生長需要的生長因子高滲再生培養(yǎng)基平板上，直接篩選出原養(yǎng)型重組子。即使是 相同接合型的真菌細胞 也能發(fā)生原生質(zhì)體的相互融合， 并可對原生質(zhì)體進行 轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染 ?？梢栽斐缮x途徑 完全中斷。 對不同微生物使用的劑量是不同的 ， 致死率取決于誘變劑量 ， 而 致死率和變異率 之間有一定關(guān)系 。 ? 表型延遲 就是指某一突變在 DNA復制和細胞分裂后，才在細胞表型上顯示出來，造成不純的菌落。 ? 目前菌種選育常采用 自然選育 和 誘變育種 等方法，帶有一定的 盲目性 ，尚屬于 經(jīng)