【正文】 ， 尤其與食品工業(yè)有關(guān)的菌種 ， 更應(yīng)慎重 。 ? 復篩過程中，要結(jié)合培養(yǎng)條件進行。 分初篩、復篩。 ? 劃線分離法 —— 平板劃線法 （四）篩 選 初篩：從分離得到的大量微生物中，將目標微生物 篩選出來的過程。 因此還必須分離 ， 純化 。 某些細菌的富集條件 富集對象 接種菌樣 添加營養(yǎng)物 (g) 特殊培養(yǎng)條件 好氧氨基酸氧化菌 土壤 – 好氧， 好氧性芽孢桿菌 土壤，巴氏消毒 – 好氧， 氨基酸發(fā)酵性梭菌 土壤，巴氏消毒 – 厭氧， 耐堿解尿素芽孢菌 土壤，巴氏消毒 尿素 50 好氧， 厭氧八疊球菌 土壤 葡萄糖 20 厭氧， pH2~3 乳酸菌 植物體或牛奶 葡萄糖 20 厭氧， 腸道細菌 土壤或污水 葡萄糖 20， CaCO320 好氧或厭氧， 丙酸菌 干酪 乳酸鈉 20 厭氧， 醋酸菌 果實或生啤酒 乙醇 40 好氧， 注：培養(yǎng)基成分為酵母膏 10g， KH2PO4或 K2HPO4 ， MgSO4 ? 富集培養(yǎng)的一般方法：采用有利于目的菌種而不利于無關(guān)微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)條件，以達到使目的菌種在群體中比例上升的目的。 ? 離地面 5~20cm處的土壤通氣良好、不受陽光直射，含菌量最高。 從自然界篩選 ? 采樣季節(jié)：以溫度適中 ， 雨量不多的秋初為好 。 這些特性包括形態(tài) 、培養(yǎng)特征 、 營養(yǎng)要求 、 生理生化特性 、 發(fā)酵周期 、 產(chǎn)品品種和產(chǎn)量 、 耐受最高溫度 、 生長和發(fā)酵最適溫度 、 最適 pH值 、 提取工藝等 。 ? 采樣： 有針對性地采集樣品 。 二、分離思路 ? 新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產(chǎn)的要求 、 菌種的特性 ， 采用各種篩選方法 ，快速 、 準確地把所需要的菌種挑選出來 。 ? 實驗室或生產(chǎn)用菌種若不慎污染了雜菌 ， 也必須重新進行分離純化 。 ? 增殖： 人為地通過控制養(yǎng)分或培條件 ， 使所需菌種增殖培養(yǎng)后 ， 在數(shù)量上占優(yōu)勢 。 三、新種分離與篩選的步驟 （ 一）采樣 采樣對象 以采集土壤為主 。 ? 采土方式：在選好適當?shù)攸c后 ， 用小薩子除去表土 ， 取離地面 515cm處的土約 10g， 盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中 ， 扎好 ， 標記 ， 記錄采樣時間 、 地點 、 環(huán)境條件等 ， 以備查考 。 ? 采土季節(jié)以春秋兩季最好。 ? 例如碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長，而其它微生物就可能死亡或淘汰。7H2O ，加水 1000ml。 在這 —步 ， 增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進一步應(yīng)用 ，而且控制得細一點 ， 好一點 。 常用的初選方法： ? 水解酶產(chǎn)生菌的篩選： 將酶的作用底物加在培 養(yǎng)基中，接種后適溫培 養(yǎng)，根據(jù)菌苔周圍是否 產(chǎn)生水解圈篩選出水解 酶產(chǎn)生菌。 2）搖瓶發(fā)酵篩選：將待測菌株進行液體振蕩培養(yǎng)，取 發(fā)酵濾液進行活力測定。 培養(yǎng)條件包括：培養(yǎng)基 pH值 發(fā)酵溫度 供氧量等。 據(jù)有的國家規(guī)定 ， 微生物中除啤酒酵母 、 脆壁酵母 、 黑曲霉 、 米曲霉和枯草桿菌作為食用無須作毒性試驗外 ， 其他微生物作為食用 ， 均需通過兩年以上的毒性試驗 。 自然選育 在生產(chǎn)過程中 ， 不經(jīng)過人工處理 ， 利用菌種的 自然突變 而進行 菌種篩選 的過程叫做 自然選育 。代謝更加旺盛 ,生產(chǎn)性能提高 。 （ 2） 基因突變 是指 DNA分子結(jié)構(gòu)中的某一部位發(fā)生變化（又稱 點突變 ）。 經(jīng)誘變處理后 ， 微生物的遺傳物質(zhì) 、 DNA和 RNA的化學結(jié)構(gòu) 發(fā)生改變 ， 從而引起微生物的 遺傳變異 。 ? 一般突變率隨誘變劑量的增大而增高，但達到一定劑量后，突變率會下降。 ? 營養(yǎng)缺陷型的回復突變株中也可獲得抗反饋突變株。 用作誘變的出發(fā)菌株必須對它的 產(chǎn)量、形態(tài)、生理 等方面有相當了解。 C 劑量選擇 ? 各種 誘變因素 有它們各自的誘變劑量單位 ， 如紫外線劑量單位用焦耳 ， x一射線劑量單位是庫 （ 侖 ）每千克 ， 中子劑量單位是戈 。 D 變異菌株的篩選 誘變育種工作的一個主要任務(wù)是獲得 高產(chǎn)變異菌株 。 E 高產(chǎn)菌株的獲得需要篩選條件的配合 在誘變育種過程中高產(chǎn)菌株的獲得還必須有合適的 篩選條件的配合 。誘變效率高，但它可能 影響鄰近基因的性能。 脫氨劑： 堿基脫氨或脫氮，引起堿基對轉(zhuǎn)換， 造成的遺傳損傷較多。 但是 ， 一個菌種 長期使用誘變劑處理之后 ， 其 生活能力 一般要逐漸下降 ， 例如 生長周期延長 ，孢子量減少 ， 代謝減慢 ， 產(chǎn)量增加緩慢 ， 誘變因素對產(chǎn)量基因影響的有效性降低 等 。 微生物 雜交育種 所使用的 配對菌株 稱為 直接親本 。 所謂 營養(yǎng)缺陷型菌株 是微生物經(jīng)誘變劑處理后產(chǎn)生的一種 生化突變體 。 在再生成細胞的菌落中就有可能獲得具有理想性狀的 重組子 。 參與融合的親株數(shù)并不限于一個 ， 可以多至三個 、 四個 ，這足一般常規(guī)雜交所達不到的 。 這樣往往可以提高篩選效率 。 根據(jù)微生物細胞壁組成和結(jié)構(gòu)的不同 ， 采用不同的酶 ， 有時還要采取一些措施 ， 如添加甘氨酸 、蔗糖或抗生素等 ， 以提高細胞壁對酶解的敏感性； 原生質(zhì)體對滲透壓極其敏感 ， 低滲易引起細胞破裂 。 原生質(zhì)體再生 原生質(zhì)體再生 就是使原生質(zhì)體重新長出細胞壁 ， 恢復完整的細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)； 為獲得較高的再生率 ， 在實驗過程中應(yīng)避免剪切力過大使原生質(zhì)體破裂； 涂布時 ， 原生質(zhì)體濃度不宜過高； 菌齡 、 再生時的溫度 、 溶菌酶用量和溶壁時間等因素都會影響原生質(zhì)體的再生 。 ? 篩選出來的融合重組子還需要對它們進行生理生化及生產(chǎn)性能的測定。 種子擴培的目的 ? 接種量的需要 ? 菌種的馴化 ? 縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平 種子的制備過程 ? 種子制備的過程大致可分為： ? 實驗室種子制備階段 ? 生產(chǎn)車間種子制備階段 一、實驗室種子的制備 ?實驗室種子的制備一般采用兩種方式 ? 對于產(chǎn)孢子能力強的及孢子發(fā)芽、生長繁殖快的菌種可以 采用固體培養(yǎng)基或斜面（靜置培養(yǎng)）培養(yǎng)孢子 ，孢子可直接作為種子罐的種子，這樣操作簡便，不易污染雜菌。