蛋白質(zhì)的提取ppt課件-文庫吧資料
2025-05-09 06:15本頁面
【正文】 不宜過多或過少。 【 注意事項 】 點樣前，應(yīng)將薄膜表面多余的緩沖液用濾紙吸去，吸水量以不干不濕為宜。 6. 記錄和分析實驗結(jié)果 漂洗完畢后將薄膜取出 , 放在濾紙上。 平衡片刻 (23min)；使其自然充滿緩沖液；而后電壓 120V，電流 ～ ㎝ ，通電 45分鐘。用邊緣整齊的玻片沾取 少量 無溶血血清，垂直按壓于醋纖膜 標(biāo)號 一端約 ㎝ 處 (約 2～ 3μl) 泳 將 點樣端 的薄膜平貼在 陰極 濾紙橋上（ 點樣面朝下 ），另一端平貼在陽極濾紙橋上 (見下圖 )。 【 實驗試劑 】 巴比妥 巴比妥鈉緩沖液 (， mol/L，離子強(qiáng)度 ) % 氨基黑 10B染色液 漂洗液 將 2 8 cm醋酸纖維薄膜置于電泳緩沖液中，浸泡 15 min左右，至完全浸透，方可用于點樣。 ：公用。 ：一排桌子公用 5套，包括平衡、染色各用一套，漂洗用 3套。該薄膜電泳具有微量、快速、簡便、分辨力高，對樣品無拖尾和吸附現(xiàn)象等優(yōu)點 血清蛋白參考值 等電點 分子量（ kDa） 占總蛋白的百分?jǐn)?shù) (%) 清蛋白 69 61~71 α 1球蛋白 200 3~4 α 2球蛋白 300 6~10 β 球蛋白 90~150 7~11 γ 球蛋白 156~950 9~18 4. 經(jīng)醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白按電泳速度分為 5條區(qū)帶，從正極端依次為清蛋白、 α1 球蛋白、 α2 球蛋白、 β 球蛋白及 γ 球蛋白，經(jīng)染色可計算出各蛋白質(zhì)的百分含量。 V=EQ/(6πrη) M=V/E=Q/(6πrη) V：電泳速度 M：遷移率 E：電場強(qiáng)度 Q：顆粒帶電荷量 r：球形分子半徑 η ：介質(zhì)粘度 【 實驗原理 】 2. 影響電泳的因素： 內(nèi)在因素： 蛋白所帶凈電荷的量、蛋白的大小和形狀 外界因素： 電場強(qiáng)度、溶液的 pH值、溶液的離子強(qiáng)度和電滲現(xiàn)象 影響蛋白質(zhì)分子運動速度的因素 決定 運動方向 電場 作用力 形成 阻力 決定 運動速率 電荷性質(zhì) 電荷量 分子形狀 分子大小 √ √ √ √ √ √ √ （如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后， 涂抹成均勻的薄膜 則成為醋酸纖維素薄膜。 【 實驗原理 】 ：是指帶電粒子在電場中向本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。 思考：如何配制不同 PH值不同的緩沖液？ 實驗四 血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳 【 目的要求 】 掌握電泳技術(shù)的一般原理和基本操作過程。 如 H2CO3/NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等 3） 緩沖溶液－－洗脫劑 作用： 配制： 調(diào)節(jié)酸和鹽的用量 ， 可配制不同 pH的緩沖液 。 電泳： 帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程 （四）純度鑒定 — 電泳 2）電泳結(jié)果分析 如果出現(xiàn)一個條帶：樣品中含有 一個分子質(zhì)量級別 多肽； 如果出現(xiàn)兩個條帶：樣品中含有 兩個分子質(zhì)量級別 多肽。內(nèi)部有許多貫穿的 通道 . 根據(jù)相對 分子質(zhì)量的大小 分離蛋白質(zhì)的方法 概念： 凝膠色譜法純化蛋白質(zhì) 洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液， 促使蛋白質(zhì)分子的差速流動。 滲透作用 （ 2）蒸餾水和甲苯的作用？ ? 離心沉降法 ? 凝膠色譜法 ?
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