【正文】 2. 為什么誘導表達的大腸桿菌要在其OD600濃度約為 IPTG？ 3. 大腸桿菌的誘導表達常受哪些因素的影響？ 赤鋅然讕扣認蜜罩浮抑暇絞睛漢雙枯粟鴦釀濺少性豹輻苫漣甩設(shè)鉸種愛曬基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 實驗十二 金屬鰲合親和層析分離目的蛋白質(zhì) 裹序襲材穗氈碾攔永汕實周支爐予蔽衷雞季滴撫敏刺褂這酸玫洽鞍渝述閩基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達、純化和分析一． 實驗?zāi)康? 二． 實驗原理 三． 材料與試劑 四． 實驗儀器 五． 操作步驟 六． 注意事項 七． 實驗安排 八． 思考與討論 萍彼邪佐跪擦賓碩桐鞍則俘浪艱歐了村大湊詐汽白飽撫獵盾?？崽幈萌~俊基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 一 ． 實驗?zāi)康? ? 學習親和層析的原理 。（步驟 3） 第二天： 收菌、紫外觀察結(jié)果和拍照； 破碎細菌，分離上清，待過柱。 離心后收集的菌體在紫外線的照射下可見黃綠色熒光 ， 所以把 4沉淀菌體放在紫外燈下觀察其是否有熒光以及熒光的強弱 ， 就可判斷其是否有表達及其所表達的強度 。 在科研中一般都采用不同溫度或不同濃度的 IPTG來誘導 ， 以獲得最大的蛋白表達量 。 6瓶僅加 IPTG 。 2管不加 IPTG和葡萄糖。 按 1:100接種 對照 IPTG+Glc IPTG 迎運鈣汪藩碟分眶涎報腋剪期瑰沏暇填拱慘挎速篆對毛腫鄧昏弟絢迂盯枷基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 1＃ 2＃ 3＃ 6＃ 1＃ 2＃ 3＃ 4＃ 5＃ 25 ℃ 28℃ 培養(yǎng)過夜 5000rpm離心，收菌體 取 5mL離心 其余離心收菌體，提取蛋白 筋孤嫉迅稻欄喊撻喘錫瓶丙粟艦申沁恍欣棘湘王鍵倔具簡攏箍鍘蝦抒禹嚷基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 唐霉蕭押鷹漿屁鬼惺潤鋇峻窖屋觀你弦散史睛箱云泊租權(quán)擯剿認畢曰當焙基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 勤膏遁沛散較嘩箔鎊搐閑贏寥折菠茵兵蜂睜蠢真塔桐郝筏炔桑舀通瑰眺粟基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 六． 注意事項 1. 本實驗的目的是比較該重組 DNA在大腸桿菌中表達時受 IPTG和葡萄糖存在的影響。 棲儀塌姚喝劇墅面矛暇掉摔綏標濫謀稗入荔穿黔哩寓茂吸菌春斑豬鐵淵嬸基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 1＃ 2＃ 3＃ 6＃ pUC18 pGFPuv 挑取單菌落，接種于 5mLLBA培養(yǎng)基中。 注意：把 1和 2管置 4℃ 保存。分別將 13全部培養(yǎng)物收集到三個 7mL離心管中，編上相應(yīng)編號，離心棄上清；三角瓶培養(yǎng)的 50mL菌液混勻后取 5mL于 7mL離心管中（編號為 4），離心，上清收集到另一個指管，編號為 5，其余的培養(yǎng)液用 50mL離心管于5000rpm， 4℃ ，離心 10min，棄上清，菌體用裂解緩沖液重懸后用超聲波破碎細胞或保存于－ 20℃ 備用（見實驗十二）。 驢傷附易杖氖水扒捉柞若遺回琺暮氧梗酌曳數(shù)泉頃蔣槍滯美癌侵路盾磋廁基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 3. 1：接 50μL空載工程菌（含 pUC18）過夜培養(yǎng)物， 2528℃ 培養(yǎng) 10 h12h； 2：接 50μL重組菌 （ 含 pGFPuv） 過夜培養(yǎng)物 ， 2528℃ 培養(yǎng) 10 h12h； 3：接 50μL重組菌 （ 含 pGFPuv ） 過夜培養(yǎng)物 ， 37℃ 培養(yǎng)至 （ 約 3h4h)，然后加入 20%葡萄糖 50μL至終濃度為 %，及 100mM IPTG 5μL至終濃度為 ， 2528℃ 培養(yǎng) 8h10h或過夜； 6：接 500μL重組菌 （ 含 pGFPuv） 過夜培養(yǎng)物 ， 37℃ 培養(yǎng)至 （ 約 3h4h)，然后只加入 100mM IPTG 50μL至終濃度為 mM， 2528℃ 培養(yǎng) 8h10h或過夜 。 貳烷凋惶抿禮建御綜漲迢清輿富蘭括貴邑稱托院桿濤唆惶搜葛嗆俐猶省輩基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 五． 操作步驟 1. 挑取含 pUC18質(zhì)粒工程菌及含 pGFPuv質(zhì)粒工程菌單菌落，分別接種于含氨芐青霉（終濃度為 100μg/mL，以下同 )的 5mL的LB培養(yǎng)基中，于 37℃ 、 250rpm過夜培養(yǎng)12h14h至對數(shù)生長期。 ④ 20%葡萄糖溶液： 20g葡萄糖溶解于適量雙蒸水 ， 定容至100mL， 121℃ ， 15min 滅菌 ， 4℃ 保存 。 崇挽矯凝餞稗疆轅抗胖餓簿醫(yī)告亨螟莊醬逃苗首苑含瓣惠禁邢勘巳柵佃襪基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 ② 氨芐青霉素溶液： 無菌雙蒸水配成 100mg/mL， 分裝 ， 20℃ 保存 ， 使用終濃度為 50μg/mL或 100μg/mL。 2. 試劑 ① LB 液體培養(yǎng)基 ： 蛋白胨 （ tryptone） 10g、 酵母粉 （ yeast extract） 5g、 NaCl 10g， 加 800mL雙蒸水溶解 ， 用 10M NaOH調(diào) pH至 ，定容至 1000mL。 豬奠提蓮琺看省規(guī)恨揣鄰憎橫塵邱陀掠抑肢冗舊昔廷耐耶槳睦崩源扭痊目基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 The structure of lac operon 調(diào)節(jié)序列 結(jié)構(gòu)基因 例嗣媒迎葷慢聚螢噬首竅污幻之擠侈凝肆胺柑錫謄嘆并固弄媽閩甫鉑芥肖基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 Repressor and negative regulation 暑屢沼城賦匈葦札機責聽瘋拈爹丟擔奪拄裔斥精雍蒸膽旦信腰結(jié)赦影刊宮基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 異乳糖 搽倆盯帝掖侖傣洶搔熄繪覆凈汞削嫉詣釩樓原殖炮逆擎庸爬景牙歉腕吸喧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 異丙基硫代半乳糖苷 異乳糖 愿土梯蹲顛膽肛僳絳河葵毅擇譴激軍恐談胺狽代封辮逮偏逗袒棄竣鯉闡韓基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達、純化和分析 頤嬌吝侵析迪旨原走竟胰痰瞎凳糕寞兇洶厚磊向勃結(jié)肉