高效液相色譜分析法hplc-文庫(kù)吧資料
2024-09-06 09:08本頁(yè)面
【正文】 兩電極間的電位差 (即所構(gòu)成原電他的電動(dòng)勢(shì) ) 進(jìn)行分析測(cè)定。 直接電位法 (direct potentiometry) ： 是將電極插入被測(cè)液中構(gòu)成原電池，根據(jù)原電池的電動(dòng)勢(shì)與被測(cè)離子活度間的函數(shù)關(guān)系直接測(cè)定離子活度的方法。 42 電位分析法原理 電位分析法 (potentiometry)：是基于測(cè)量浸入被測(cè)液中兩電極間的 電動(dòng)勢(shì) 或 電動(dòng)勢(shì)變化來(lái)進(jìn)行定量分析的一種電化學(xué)分析方法，稱為電位分析法。 包括組織電極和酶電極。電極上每個(gè)半反應(yīng)的還原電極電位 （ E ’ )與反應(yīng)型體活度的關(guān)系由能斯特方程（ Nernst equation ）表示： 若某一電極上半反應(yīng)的方程式為： Ox + ne Red 則其電極電位為 aadReOxlnnFRTEE ??? ? 五、電極的類型 基于電子交換反應(yīng)的電極 (1) 第一類電極： M n+/M (2) 第二類電極： M/MX（固體） (3) 第三類電極： M/MX (s)， NX (s)， N n+， (4) 第零類電極： 惰性金屬 選擇性電極 （ 1） 離子選擇性電極 (ion selective electrode, ISE) 包括常見(jiàn)的各種膜電極。 其中 E 0’ 代表氧化或還原半反應(yīng)的電極電位、 Δ E相間電位 代表電池中的液接電位（來(lái)源于濃度差或鹽橋）和膜電位。 電解池（ electrolytic cell）： 實(shí)現(xiàn)電化學(xué)反應(yīng)的能量由外電源供給的化學(xué)電池，它是將 電能轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)能 。 電化學(xué)分析方法主要有下面幾類： ： 測(cè)定 電阻 參量 ： 測(cè)定 電壓 參量 ： 測(cè)定 電量 參量 ： 測(cè)定 電流 時(shí)間 參量 ： 測(cè)定 電壓 電流 參量 二、電化學(xué)電池 ( electrochemical cell ) 它是由一對(duì)電極、電解質(zhì)和外電路三部分組成，它常分為原電池和電解池兩類。 41 電化學(xué)分析法概述 一、電化學(xué)分析 ( electrochemical analysis ) 根據(jù)物質(zhì)在溶液中的 電化學(xué)性質(zhì)及其變化 來(lái)進(jìn)行分析的方法稱電化學(xué)分析。H2O tR↑ ， k↑ ? 調(diào)節(jié) pH范圍： ~ pH 破壞鍵合相與載體的結(jié)合 pH 腐蝕柱子 3） 適用：極弱酸堿物質(zhì) pH=3~7弱酸； pH=7~8弱堿；兩性化合物 2． 對(duì)流動(dòng)相的要求： 1） 與固定液不反應(yīng) 2） 對(duì)樣品有良好溶解度 k=1~10 k=2~5 最理想的 3） 與檢測(cè)器匹配： UV（ 常用 ， 測(cè)定波長(zhǎng)應(yīng)大于溶劑的截止波長(zhǎng) ） 熒光 ， 電化學(xué) 4） 使用粘度小 、 純度高的流動(dòng)相 （ 甲醇 ， 乙腈 ） 使用前過(guò)濾 、 脫氣 3．洗脫方式 1） 等度洗脫 （ 恒組成溶劑洗脫 ） 以固定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫組分 （ 一個(gè)泵 ） 類似 GC的等溫度洗脫 2） 梯度洗脫： 在一定分析周期內(nèi)不斷變換流動(dòng)相的種類 和比例 即不斷改變其極性 （ 兩個(gè)泵 ） 適于分析極性差別較大的復(fù)雜組分 類似 GC的程序升溫 （ 沸程較長(zhǎng)樣品 ） 167。ttVVKVCVCWWk Rmsmmssms ??????。┑呐浔龋ㄊ苤鶞赜绊戄^：調(diào)整流動(dòng)相和固定相k三、 影響分離的因素 1. 固定相與裝柱方法的選擇： 選粒徑小的、分布均勻的球形固定相 （ dp≤10 μ m） 首選化學(xué)鍵合相，勻漿法裝柱 2. 流動(dòng)相及其流速的選擇： 選粘度小、低流速的流動(dòng)相 —— 甲醇， 約 1ml/min 3. 柱溫的選擇： 選室溫 250C左右 四、 HPLC法中分離條件的選擇 一、液固吸附色譜法（ LSC） (liquidsolid adsorption chromatography) 二 、 液液分配色譜法 （ LLC） (liquidliquid partition chromatography, chemical bonded phase chromatography 三 、 離子色譜法 （ IC） （ ionexchange chromatography and ion pair chromatography) 四 、 空間排阻色譜法 （ SEC） （ steric exclusion chromatography 167。39。39。)()(16 W tWtn RRe f f ??039。 22 基本理論和條件選擇 基礎(chǔ) 理論 ? 熱力學(xué)理論：塔板理論 —— 平衡理論 ? 動(dòng)力學(xué)理論：速率理論 —— Vander方程 一、塔板理論 理理 nLH /? 22212 )(16)()(WtWttn RRR ????理e ffe ff nLH /?22139。 利用手性固定相可以拆分分離具有手性的化 合物 。 用離子型固定相建立的離子交換色譜和離子對(duì) 色譜法分析離子型體的含量 。 3． 操作條件差別 GC：加溫操作 HPLC：室溫；高壓 （ 液體粘度大 ， 峰展寬小 ） 1． 貯液罐 （ 濾棒 ， 可濾 去顆粒狀物質(zhì) ） 2． 高壓泵 （ 輸液泵 ） 3． 進(jìn)樣
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