實(shí)驗(yàn)10雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量(參考版)
2025-05-02 05:38本頁面
【正文】 返回 722型分光光度計(jì)的外形 光路 光路 。 2.*樣品蛋白質(zhì)含量應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。 根據(jù)樣品的 OD540從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品的蛋白質(zhì)含量（ mg/mL），再根據(jù)樣品的體積算出樣品的濃度。 0號(hào)管調(diào)零 ，測(cè)定各管 540nm光吸收值。 Coomassie DyeBased 蛋白質(zhì)定量 PROTEIN + Amax = 595nm BLUE Acid Coomassie G250 Protein Dye Complex O CH 2 CH 3 NH C CH 3 CH 3 N CH 2 SO 3 CH 3 CH 2 N CH 2 CH 2 CH 3 SO 3 Na + 雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì) * 雙縮脲反應(yīng)： 雙縮脲在堿性條件下與銅離子結(jié)合生成紫紅色化合物 ， 顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比 。 考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 考馬斯亮藍(lán)在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi) ， 蛋白質(zhì)和染料結(jié)合符合比爾定律 ， 因此可以通過測(cè)定染料在 595nm處光吸收的增加量得到與其結(jié)合的蛋白質(zhì)量 。 利用紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點(diǎn)是迅速 、簡便 、 不消耗樣品 、 可回收利用 、 低濃度鹽類不干擾測(cè)定 。 紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵 ， 因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì) ，吸收高峰在 280 nm波長處 。 其不足之處是此反應(yīng)受多種因素干擾 。在一定條件下 ， 藍(lán)色強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的量成正比例 。 Folin酚試劑法 (Lowry法 )測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵 (—CO—NH—
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