實(shí)驗(yàn)10雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量(已修改)
2025-05-11 05:38 本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)十 雙縮脲法測(cè)定 蛋白質(zhì)濃度 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1. 學(xué)習(xí)常見蛋白質(zhì)含量測(cè)定的原理和方法 2. 掌握雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法 二、原理 一 、 分光光度法的基本原理及方法 （ 一 ） 利用吸收光譜對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析 維生素 B12溶液的吸收光譜 主要方法： （ 1） 比較吸收光譜曲線 （ 2） 比較最大吸收波長(zhǎng) 蛋白質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)為 280nm； 核酸的最大吸收波長(zhǎng)為 260nm。 （ 3） 比較吸光度的比值 純 DNA： 2 8 02 6 0 ?nmnmAA（二）利用吸收光譜對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析 1． 原理 BeerLambert（ 比爾 ） 定律： T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=εcl 其中： T為透光率； A為吸光率； I0為入射光強(qiáng)度； I為透射光強(qiáng)度； ε為摩爾消光系數(shù)； C為溶液濃度； L為溶液光程的厚度 2． 常用方法 （ 1） 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 ? 標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品的測(cè)定條件必須一致。 （ 2） 標(biāo)準(zhǔn)管法 CX/AX=CS/AS， 已知 CS， 測(cè)定 AS、 AX可求得 CX。 （ 3） 摩爾吸光系數(shù)法 C=A/?（ ?為 L=1cm， C為 1 mol/L時(shí)的吸光系數(shù) ， 也稱為摩爾吸光系數(shù) 。 微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)總含量 被測(cè)的天然含氮化合物與濃硫酸共熱時(shí)分解出氨 ， 氨與硫酸反應(yīng)生成硫酸銨 。 在凱氏定氮儀中加入強(qiáng)堿堿化消化液 ， 使硫酸銨分解出氨 。 用水蒸汽蒸餾法將氨蒸入無(wú)機(jī)酸溶液中 ， 然后再用標(biāo)準(zhǔn)
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