實驗二蛋白質(zhì)的顏色反應及蛋白質(zhì)含量測定(參考版)
2025-05-17 22:03本頁面
【正文】 有大量脂肪性物質(zhì)同時存在時 ， 會產(chǎn)生渾濁的反應混合物 ， 這時可用乙醇或石油醚使溶液澄清后離心 ， 取上清液再測定 。 30min后 ， 可有霧狀沉淀發(fā)生 。 一些陽離子如 K+、Na+、 Mg2+等物質(zhì)對測定無影響；而大量的去污劑如 SDS等會嚴重干擾測定；乙醇的存在會使蛋白質(zhì)沉淀 ， 改變?nèi)玖项伾? （ 3） 雙縮脲法：本實驗方法測定范圍 1－ 10mg/mL蛋白質(zhì) 。 （ 2） 考馬斯亮藍法測定中 ， 蛋白 染料復合物會有少部分吸附于比色杯壁上 ， 但此復合物的吸附量可以忽略 。 試管編號 0 1 2 3 4 5 6 7 標準蛋白溶液 2 (mL) 0 樣液 2 3mL 卵清蛋白3ml 蒸餾水（ mL） 0 0 雙縮脲試劑 (mL) 2 2 2 2 2 2 2 2 蛋白質(zhì)濃度 (mg/mL) 0 ？ ？ A595nm 充分混勻后，顯色后 30min內(nèi)測定 A540，否則會有 CuO2形成。 試管編號 0 1 2 3 4 5 6 7 標準蛋白溶液 1 (mL) 0 樣液 1 1mL 卵清蛋白 1ml %NaCl溶液（ mL） 0 0 考馬斯亮藍試劑 (mL) 4 4 4 4 4 4 4 4 蛋白質(zhì)濃度 (?g/mL) 0 10 20 30 40 50 ？ ？ A595nm 搖勻， 1 h內(nèi)以 0號試管為空白對照，在 595nm處比色 OD595nm 以 OD595nm為縱坐標，標準蛋白含量為橫坐標，在 Excell上繪制標準曲線。注：此反應需在 pH:57時進行 ? 黃色反應：取 1支試管加入蛋白質(zhì)溶液 10滴，再加 34滴濃硝酸，混勻，在酒精燈上加熱，黃色，冷卻后加 45ml 10% NaOH，觀察顏色變?yōu)殚冱S色。 PROTEIN + Amax = 595nm BLUE Acid Coomassie G250 Protein Dye Complex O CH 2 CH 3 NH C CH 3 CH 3 N CH 2 SO 3 CH 3 CH
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