考馬斯亮藍(lán)g-250法測(cè)定蛋白質(zhì)含量(參考版)
2025-01-09 22:25本頁(yè)面
【正文】 七、思考題 1．制作標(biāo)準(zhǔn)曲線及測(cè)定樣品時(shí)，為什么要將各試管中溶液縱向倒轉(zhuǎn)混合？ 參考答案 1．將各試管中溶液縱向倒轉(zhuǎn)混合目的是使反應(yīng)充分，并且使整個(gè)反應(yīng)液均一，否則在比色測(cè)定時(shí)，結(jié)果會(huì)有較大偏差，使標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作不標(biāo)準(zhǔn)，后續(xù)的測(cè)定結(jié)果就不可靠。 3．蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán) G250結(jié)合的反應(yīng)十分迅速，在 2min左右反應(yīng)達(dá)到平衡；其結(jié)合物在室溫下 1h內(nèi)保持穩(wěn)定。 六、附 注 1． Bradford 法由于染色方法簡(jiǎn)單迅速，干擾物質(zhì)少，靈敏度高，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)曲線 1號(hào)試管做空白。 （ 2）測(cè)定：另取 2支 10mL具塞試管，按下表取樣。其余步驟同（ 1）操作，做出蛋白質(zhì)濃度為 0~1 000μ g／ mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線。蓋塞后，將各試管中溶液縱向倒轉(zhuǎn)混合， 放置2min后用 1cm 光經(jīng)的比色杯在 595nm 波長(zhǎng)下比色，記錄各管測(cè)定的光密度 OD595nm，并做標(biāo)準(zhǔn)曲線。此溶液在常溫下可放置一個(gè)月。 二、 材料、主要儀器和試劑 1．實(shí)驗(yàn)材料 新鮮綠豆芽
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