【正文】 。 在不規(guī)則抗體篩查、交叉配血試驗中 LISS 液可以增強抗原抗體的反應，應嚴格按產(chǎn)品說明書規(guī)范使用低離子液。 8.【注意事項】 上腔部分 或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。如配合其他試劑進行試驗，需注明試驗方法應完全符合配合試劑的試驗操作要求。 6.【檢驗方法】 明確配合使用的抗體篩查用紅細胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。 明確紅細胞配制使用的 LISS 液的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。 明確適用的抗凝劑的要求。 4.【樣本要求】 明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。 2.【儲存條件及有效期】 說明試劑的儲存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。 1.【預期用途】 /或間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細胞的檢測（明確疾病類型）等，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參 考文獻，則應以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。 （十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品 預期用途、檢驗原理、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。半成品檢定應明確半成品的檢驗要求及方法。主要原材料應明確抗體來源、克隆 號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應明確填充物來源及主要特征、質(zhì)量控制要求，緩沖液應明確組成、 pH 值等特性及質(zhì)控要求。 產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標應至少包括靈敏度、特異性、重復性等。產(chǎn)品技術(shù)要求應符合《辦法》和“ 44號公告”的相關(guān)規(guī)定。風險分析中應充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行抗人球蛋白檢測時可能存在一定的干擾、實驗過程不規(guī)范、有些抗體較弱導致的檢測結(jié)果不穩(wěn)定等，申請人應根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應用可能存在的風險。臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應列明所有病例的具體臨床診斷信 息、凝集強度和抗體鑒定結(jié)果，如有不符樣本應列明第三方確認的結(jié)果。 對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致 [考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果不一致、與對比試劑凝集強度差異較大（差異 2 個凝集強度及以上） ]的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認試驗，同時應給出最終的抗體鑒定結(jié)果。 同時應明確配合使用的試劑產(chǎn)品。抗體致敏紅細胞檢測應根據(jù)疾病的種類，分別進行臨床試驗。 在進行間接抗人球蛋白檢測試劑臨床試驗的過程中除與對比試劑進行比較外，陽性結(jié)果應給出不規(guī)則抗體的具體鑒定結(jié)果。應包括對檢測易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。 臨床總病例數(shù)應不少于 3000 例。 該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比 試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。 試 劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。 應對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性。 穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。 試驗 使用被不規(guī)則抗體和 /或 C3d 致敏的紅細胞進行反應，評價產(chǎn)品性能，適用的性能評價內(nèi)容可以參照間接抗人球蛋白試驗。 采用部分臨床樣本進行檢測靈敏度和特異性的評價，應考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應包括陽性和陰性病例。 血清、血漿比對的評估資料。 采用陰性結(jié)果的血清重復 10次檢測，均應出現(xiàn)陰性反應。 批間重復性采用至少三批檢測卡進行重復檢測。 批內(nèi)重復性采用同一批次檢測卡重復進行檢測，重復次數(shù)不少于10 次。 與 C3d 陽性或陰性樣本反應為陽性或陰性。 特異性 與已知抗體類型的血型抗體對應的 O 型相應抗原陽性紅細胞的反應為陽性。 靈敏度 與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于 1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結(jié)果。所有試驗方法應符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。 產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內(nèi)或境外已批準上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細胞、血型抗體等。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等 。如紅細胞懸液制備要求及紅細胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉(zhuǎn)數(shù)和時間的方式設(shè)置離心條件。 、每一步反應體系的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。 、每一步生產(chǎn)工藝的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 ：應說明組成成分，并對外觀、性狀、 pH 值等物理指標及功能性進行研究驗證。 2. 填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。 與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應為陰性。 靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種血型抗體（ IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于 1+。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。 （二）主要原材料研究資料 主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質(zhì) 量標準的研究資料。 二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 綜述資料的撰寫應符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注 冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）（以下簡稱“ 44 號公告”）的相關(guān)要求。 本指導原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。 一、范圍 抗人球蛋白檢測試劑可進行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配 血、抗體致敏紅細胞的檢測等。 本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。 本指導原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。核酸擴增法檢測試劑是基于核酸擴增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。穩(wěn)定性試驗可采用加速破壞試驗。（ 4）成品檢驗的內(nèi)容應包括：陰 /陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。（ 3）以參考品 /對照品進行成品質(zhì)量檢驗。 2.成品質(zhì)量控制 （ 1）每一批核酸擴增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。檢測結(jié)果應符合質(zhì)量標準的要求。如果產(chǎn)品不具有國家標準品或參考品，應根據(jù)規(guī)定制備相應的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 （ 2）以參考品 /對照品進行半成品質(zhì)量控制。 工藝研究的資料應能對反應體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應條件、校準方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。 （三 ）生產(chǎn)工藝 核酸擴增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。 具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性。 （ UNG） 具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IUUNG — 25— 在 37℃處理 3分鐘后， 103拷貝以下含 U模板應完全降解，不能產(chǎn)生擴增產(chǎn)物。應具有 DNA 聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性， 94℃保溫 1 小時后仍保持 50%活性。避光、 20℃保存。應以可見 — 紫外分光光度計進行 200— 800nm 掃描，在 260nm 處應有吸收峰。 凍干粉，純度應達到 HPLC 純。端 )進行標記，如熒光素報告基團或其他發(fā)光標記物，在 339。通常采用 DNA 合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在 539。 20℃保存。 應作 HPLC 分析和紫外光吸收分析。純度應達到電泳級（ PAGE）或 HPLC 級，不含雜帶。 — 24— 由一定數(shù)量的 dNTP 構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（ DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。應為高效液相色譜（ HPLC）純、 PCR 級，無 DNase 和 RNase 污染。 核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應無脫氧核糖核酸酶（ DNase）和核糖核酸酶（ RNase）污染。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應提供的資料包括：對物料供應商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標準、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。使用未列入上述標準的化學試劑，應不低于分析純。 ，擴增體系應設(shè)定合理的內(nèi)標和外標，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴增產(chǎn)物須進行確證研究。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應建 立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。 2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應具有與其技術(shù)要求相適應的人員、廠房、設(shè)施和 — 23— 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴增檢測以及操作人員防護所需的設(shè)備。 三、基 本要求 （一）基本原則 《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。 本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善、科學技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。 本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。（ 2）如果在 FAM 通道有對數(shù)增長期或Ct 值小于 30 則 1）若樣本的 +008，則樣本的 HBVDNA 濃度 510?IU/ml 第四篇：核酸擴增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導 原則 3 附件 3 核酸擴增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則 一、前言 本指導原則主要針對核酸擴增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導性技術(shù)要求。 （擴增和產(chǎn)物分析區(qū)） 反應結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后的圖像調(diào)節(jié) baseline 值得Start 值、 End 值以及 Threshold 值，點擊 Analysis 自動獲取分析結(jié)果，在 Repoet 界面查看結(jié)果，記錄未知樣本數(shù)值（ C） (1)陰性質(zhì)控品： FAM 通道無對數(shù)增長期或 Ct 值等于 30， VIC 檢測通道擴增曲線為明 顯對數(shù)增長期 (2)HBV 陽性質(zhì)控品： FAM 通道有明顯的對數(shù)增長期且 Ct 值小于30(3)HBV 陽性定量參考品： FAM 通道有明顯的對數(shù)增長期，呈典型 S形曲線。 1 分鐘 2） 1