【正文】 樣本量估算過程中需要考慮臨床試驗(yàn)中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應(yīng)高于 10%。整個試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì) 量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品的要求。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。 本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。 、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 （ 2）純度和分子量 主要經(jīng) SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合 2021 年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 總蛋白中的牛血清白蛋白（ BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95%?；瘜W(xué)原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。如該產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 包被前應(yīng)對酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號、數(shù)量、標(biāo)識。 （四）質(zhì)量控制 （ 1）半成品抽樣 檢驗(yàn)人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各 — 8— 組分，作號標(biāo)記、待檢。試劑盒各組分應(yīng)留樣， 2 8℃定期作穩(wěn)定性考 核，同時作 37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 四、名詞解釋 酶聯(lián)免疫法：是指在酶標(biāo)板上包被特定的抗原（和 /或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關(guān)抗體（和 /或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和 /或抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和 /或抗原的存在。 （ 1）如果在 FAM 通道無明顯的對數(shù)增長期或 Ct 值等于 30，在 VIC 檢測通道擴(kuò)增曲線有對數(shù)增長期，則判定樣本的 HBVDNA 濃度小于檢測靈敏度。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。 （二）原材料 應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。 凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。端 (和 /或 339。 如 TaqDNA 聚合酶。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對電導(dǎo)率 pH、等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。 （ 4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進(jìn)行分裝和包裝。 四、名詞解釋 核酸擴(kuò)增法檢測試劑：核酸擴(kuò)增技術(shù)泛指以擴(kuò)增脫氧核糖核酸（ DNA）或核糖核酸（ RNA）為手段，檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（ LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（ TMA）等。 本指導(dǎo)原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。 抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細(xì)生產(chǎn)及鑒定過程。 ：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、 pH 值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究 驗(yàn)證。 （四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。 C3d 凝集強(qiáng)度≥ 2+。 批內(nèi)、日間、批間重復(fù)性檢測結(jié)果應(yīng)基本一致，檢測結(jié)果凝集強(qiáng)度差異不超過 1+。 （五）陽性判斷值 給出不同凝集強(qiáng)度的研究方法，并明確不同凝集強(qiáng)度代表的具體意義，并應(yīng)包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)步驟，提供不同凝集強(qiáng)度的圖例或相片。 （七）臨床試驗(yàn) 臨床試驗(yàn)總體要求及臨床試驗(yàn)資料的內(nèi)容應(yīng)符合《辦法》、“ 44 號公告”及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 16 號）的規(guī)定，以下僅結(jié)合抗人球蛋白檢測試劑的具體特點(diǎn)對其臨床試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容進(jìn)行闡述。 產(chǎn)品如適用于不同的預(yù)期用途（如不規(guī)則抗體篩查、抗體致敏紅細(xì)胞檢測、交叉配血等），每種預(yù)期用途均應(yīng)分別進(jìn)行至少 3000 例的臨床試驗(yàn)，如適用于不規(guī)則抗體篩查或抗體致敏紅細(xì)胞檢測等，每種預(yù)期用途應(yīng)分別包含不少于 100 例陽性病例，如適用于交叉配血相關(guān)用途，應(yīng)包含不少于 100 例交叉配血不合病例。 （八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料 產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料應(yīng)符合“ 44 號公告”的基本要求，并參照相應(yīng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。主要生產(chǎn)工藝應(yīng)以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質(zhì)量控制點(diǎn)。 說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。 5.【陽性判斷值】 明確各種試驗(yàn)方法的結(jié)果判斷方法及標(biāo)準(zhǔn)，并通過不同凝集強(qiáng)度的圖例或照片進(jìn)行詳細(xì)解釋。 三、參考文獻(xiàn) .體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 16 號） .2021 年 9 月 .體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 17 號） .2021 年 9 月 （ 2021 年版） .化學(xué)工業(yè)出版社 四、起草單位 國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。 7.【檢驗(yàn)方法的局限性】 未被檢出的抗 IgG 抗體在某些病例中可能有臨床意義。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 17 號）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。 如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國家 /行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。 應(yīng)進(jìn)行考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計(jì)算，并以四格表的形式進(jìn)行列表，并對定性結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證檢測結(jié)果的一致性。應(yīng)采用臨床患者樣本進(jìn)行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。對于實(shí)時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。 抗凝劑的適用性研究驗(yàn)證。 重復(fù)性 分別采用 IgG 性質(zhì)抗 D 抗體， IgG 性質(zhì)抗 Jka/Jkb 抗體， IgG 性質(zhì)抗 Fya/Fyb 抗體進(jìn)行重復(fù)性驗(yàn)證。 分析性能評估試驗(yàn)中應(yīng)明確所有試驗(yàn)每種試劑的用量、試劑紅細(xì)胞的濃度、采用的試驗(yàn)方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應(yīng)確保均勻無氣泡，以及質(zhì)量控制的要求。 效價(jià)：如采用倍比稀釋的方法驗(yàn)證抗人球蛋白試劑的效價(jià)，分別采用 IgG 和 /或 C3d致敏的細(xì)胞或根據(jù)廠家確立的研究方法進(jìn)行驗(yàn)證。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從靈敏度、特異性、效價(jià)、重復(fù)性等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。如申請人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補(bǔ)充。結(jié)果應(yīng)符合要求。如果 產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。 20℃保存。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如 HPLC 分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作 HPLC 分析。以紫外分光光度計(jì)測定OD260nm/OD280nm 的比值在 — 之間，可視為合格引物。 （ dNTP） 核酸的組成成分，包括： dATP、 dUTP、 dGTP、 dCTP 和 dTTP。 《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 100℃恒溫處理 10177。 每一批酶聯(lián)免疫類檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測及注冊檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。 檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括陰 /陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。 應(yīng)對包被過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗(yàn)、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、 pH 值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗(yàn)、干燥過程的監(jiān)控等。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實(shí)驗(yàn)室完成。 CV 值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi) CV≤ 5％，批間 CV≤ 10％。 對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。 球蛋白含量：取待測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于 %氯化鈉溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。 （ 4）效價(jià) 效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量 測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。 申報(bào)產(chǎn)品應(yīng)明確不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。 結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求， HBeAg、抗 HBe檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。 HBeAg、抗 HBe 檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰 /陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。 如產(chǎn)品臨床試驗(yàn)采用其他統(tǒng)計(jì)學(xué)模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，如優(yōu)效性試驗(yàn)等，應(yīng)充分說明其合理性。臨床試驗(yàn)樣本量估算的方法有很多，如單組目標(biāo)值法、優(yōu)效性試驗(yàn)的樣本量估算等。如申報(bào)產(chǎn)品所適用的樣本類型同時包含血清、血 漿等多個樣本類型，應(yīng)針對不同樣本類型進(jìn)行同源比對。 如申報(bào)產(chǎn)品在該類產(chǎn)品現(xiàn)有的臨床預(yù)期用途下，有新的臨床預(yù)期用途（如：定量檢測產(chǎn)品的治療效果監(jiān)測等），應(yīng)采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究，對產(chǎn)品新預(yù)期用途進(jìn)行臨 床評價(jià)。對于實(shí)時穩(wěn)定性研究，應(yīng) 提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。建議申請人采用受試者工作特征（ ROC）曲線的方式進(jìn)行臨界值的研究，明確臨界值的計(jì)算公式。 其他抗凝劑研究，如申請人聲稱產(chǎn)品適用樣本類型為血漿或血清，建議申請人采用血清血漿同源比對的方式對抗凝劑干擾進(jìn)行研究，研究應(yīng)能夠覆蓋所有聲稱的 抗凝劑種類。 設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期，例如：為期至少 20 天的檢測，每天至少由 2 人完成不少于 2 次的完整檢測，從而對批內(nèi) /批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價(jià)。 （分析靈敏度）申報(bào)產(chǎn)品最低檢測限的性能評估資料應(yīng)包含最低檢測限的確定及驗(yàn)證過程。 。參考品設(shè)置建議參考國家參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗原濃度 /抗體滴度要求，陰性參考品則 主要考慮對產(chǎn)品分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。 對于涉及標(biāo)記的主要原材料，如外購方提供的為已標(biāo)記好的原材料，則原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除了對原材料本身的質(zhì)量控制外，還應(yīng)依據(jù)標(biāo)記物特性，針對標(biāo)記物制定相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 如主要原材料為申請人自制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)明確原材料的制備原理，描述制備過程。其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述申報(bào)產(chǎn)品臨床預(yù)期用途，包括適用人群、適應(yīng)癥及臨床使用環(huán)境； 產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品主要組成成分及檢測原理