【正文】 三、參考文獻 .體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 16 號） .2021 年 9 月 .體外診斷試劑說明書編寫指導原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 17 號） .2021 年 9 月 （ 2021 年版） .化學工業(yè)出版社 四、起草單位 國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。 7.【檢驗方法的局限性】 未被檢出的抗 IgG 抗體在某些病例中可能有臨床意義。 5.【陽性判斷值】 明確各種試驗方法的結(jié)果判斷方法及標準，并通過不同凝集強度的圖例或照片進行詳細解釋。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性。 說明與預期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 17 號）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。主要生產(chǎn)工藝應(yīng)以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質(zhì)量控制點。 如果擬申報試劑已有相應(yīng)的國家 /行業(yè)標準發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。 （八）產(chǎn)品風險分析資料 產(chǎn)品風險分析資料應(yīng)符合“ 44 號公告”的基本要求，并參照相應(yīng)的行業(yè)標準進行風險分析。 應(yīng)進行考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，并對定性結(jié)果進行Kappa檢驗以驗證檢測結(jié)果的一致性。 產(chǎn)品如適用于不同的預期用途（如不規(guī)則抗體篩查、抗體致敏紅細胞檢測、交叉配血等），每種預期用途均應(yīng)分別進行至少 3000 例的臨床試驗，如適用于不規(guī)則抗體篩查或抗體致敏紅細胞檢測等，每種預期用途應(yīng)分別包含不少于 100 例陽性病例，如適用于交叉配血相關(guān)用途，應(yīng)包含不少于 100 例交叉配血不合病例。應(yīng)采用臨床患者樣本進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。 （七）臨床試驗 臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內(nèi)容應(yīng)符合《辦法》、“ 44 號公告”及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 16 號）的規(guī)定，以下僅結(jié)合抗人球蛋白檢測試劑的具體特點對其臨床試驗中應(yīng)重點關(guān)注的內(nèi)容進行闡述。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。 （五）陽性判斷值 給出不同凝集強度的研究方法，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應(yīng)包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強度的圖例或相片。 抗凝劑的適用性研究驗證。 批內(nèi)、日間、批間重復性檢測結(jié)果應(yīng)基本一致，檢測結(jié)果凝集強度差異不超過 1+。 重復性 分別采用 IgG 性質(zhì)抗 D 抗體， IgG 性質(zhì)抗 Jka/Jkb 抗體， IgG 性質(zhì)抗 Fya/Fyb 抗體進行重復性驗證。 C3d 凝集強度≥ 2+。 分析性能評估試驗中應(yīng)明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的試驗方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。 （四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究目的、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應(yīng)確保均勻無氣泡，以及質(zhì)量控制的要求。 ：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、 pH 值等物理指標及功能性進行研究 驗證。 效價：如采用倍比稀釋的方法驗證抗人球蛋白試劑的效價，分別采用 IgG 和 /或 C3d致敏的細胞或根據(jù)廠家確立的研究方法進行驗證。 抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細生產(chǎn)及鑒定過程。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從靈敏度、特異性、效價、重復性等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的異同。 本指導原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補充。 四、名詞解釋 核酸擴增法檢測試劑：核酸擴增技術(shù)泛指以擴增脫氧核糖核酸（ DNA）或核糖核酸（ RNA）為手段，檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（ LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴增反應(yīng)（ TMA）等。結(jié)果應(yīng)符合要求。 （ 4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進行分裝和包裝。如果 產(chǎn)品具有國家標準品或參考品，應(yīng)以其進行檢定。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對電導率 pH、等關(guān)鍵參數(shù)進行有效控制。 20℃保存。 如 TaqDNA 聚合酶。應(yīng)提供合成機構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如 HPLC 分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標記的熒光素或化學發(fā)光物進行核實，并作 HPLC 分析。端 (和 /或 339。以紫外分光光度計測定OD260nm/OD280nm 的比值在 — 之間，可視為合格引物。 凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達到試劑生產(chǎn)要求。 （ dNTP） 核酸的組成成分，包括： dATP、 dUTP、 dGTP、 dCTP 和 dTTP。 （二）原材料 應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標準品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標準等的相關(guān)研究資料。 《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標準，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。 （ 1）如果在 FAM 通道無明顯的對數(shù)增長期或 Ct 值等于 30，在 VIC 檢測通道擴增曲線有對數(shù)增長期，則判定樣本的 HBVDNA 濃度小于檢測靈敏度。 100℃恒溫處理 10177。 四、名詞解釋 酶聯(lián)免疫法：是指在酶標板上包被特定的抗原（和 /或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關(guān)抗體（和 /或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復合物再與相應(yīng)的酶標記的抗體和 /或抗原進一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和 /或抗原的存在。 每一批酶聯(lián)免疫類檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。試劑盒各組分應(yīng)留樣， 2 8℃定期作穩(wěn)定性考 核，同時作 37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標準。 檢驗指標一般包括陰 /陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標準要求。 （四）質(zhì)量控制 （ 1）半成品抽樣 檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各 — 8— 組分，作號標記、待檢。 應(yīng)對包被過程進行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、 pH 值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監(jiān)控等。 包被前應(yīng)對酶標反應(yīng)板進行質(zhì)量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標反應(yīng)板的批號、數(shù)量、標識。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實驗室完成。如該產(chǎn)品具有國家標準品或參考品，應(yīng)使用國家標準品（參考品）進行標化；若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 CV 值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標準，一般批內(nèi) CV≤ 5％，批間 CV≤ 10％。化學原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。 對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。 總蛋白中的牛血清白蛋白（ BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為≥ 95%。 球蛋白含量：取待測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于 %氯化鈉溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。這些生物原料的質(zhì)量標準應(yīng)符合 2021 年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準》規(guī)定的標準要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 （ 4）效價 效價的測定一般根據(jù)蛋白含量 測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進行。 （ 2）純度和分子量 主要經(jīng) SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。這類原料可用于包被酶標反應(yīng)板、標記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準品（標準品）等。 、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學原理。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導原則執(zhí)行。 本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。 申報產(chǎn)品應(yīng)明確不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。 結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求， HBeAg、抗 HBe檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點關(guān)注以下內(nèi)容。產(chǎn)品檢驗報告應(yīng)符合相應(yīng)的國家標準品、參考品的要求。 HBeAg、抗 HBe 檢測試劑的產(chǎn)品性能指標應(yīng)主要包括：物理性狀、陰 /陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì) 量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。 如產(chǎn)品臨床試驗采用其他統(tǒng)計學模型進行統(tǒng)計分析，如優(yōu)效性試驗等，應(yīng)充分說明其合理性。 樣本量估算過程中需要考慮臨床試驗中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應(yīng)高于 10%。臨床試驗樣本量估算的方法有很多，如單組目標值法、優(yōu)效性試驗的樣本量估算等。 試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性 符合率等。如申報產(chǎn)品所適用的樣本類型同時包含血清、血 漿等多個樣本類型，應(yīng)針對不同樣本類型進行同源比對。 根據(jù)產(chǎn)品臨床驗證的目的，入組人群應(yīng)包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦。 如申報產(chǎn)品在該類產(chǎn)品現(xiàn)有的臨床預期用途下，有新的臨床預期用途（如：定量檢測產(chǎn)品的治療效果監(jiān)測等），應(yīng)采用試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準進行比較研究，對產(chǎn)品新預期用途進行臨 床評價。 （七）臨床試驗臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技 術(shù)指導原則》的要求。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng) 提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。 在陽性判斷值設(shè)定后，申請人應(yīng)當選取一定數(shù)量陰、陽性真實臨床樣本進行實驗驗證。建議申請人采用受試者工作特征（ ROC）曲線的方式進行臨界值的研究，明確臨界值的計算公式。 換的檢測，應(yīng)進行相應(yīng)性能研究。 其他抗凝劑研究，如申請人聲稱產(chǎn)品適用樣本類型為血漿或血清，建議申請人采用血清血漿同源比對的方式對抗凝劑干擾進行研究，研究應(yīng)能夠覆蓋所有聲稱的 抗凝劑種類。建議在病毒感染的醫(yī)學決定水平進行交叉反應(yīng)的驗證，申請人應(yīng)詳細 說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果等。 設(shè)定合理的精密度評價周期，例如：為期至少 20 天的檢測，每天至少由 2 人完成不少于 2 次的完整檢測，從而對批內(nèi) /批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。臨床樣本收集過程中應(yīng)考慮不同濃度及患者感染病毒的基因型（我國主要流行的 B、 C、 D 型）。