【正文】 細的研究資料和驗證資料。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應建 立符合生物安全要求的設施和措施。 核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應無脫氧核糖核酸酶（ DNase）和核糖核酸酶（ RNase）污染。 應作 HPLC 分析和紫外光吸收分析。 凍干粉，純度應達到 HPLC 純。 （ UNG） 具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IUUNG — 25— 在 37℃處理 3分鐘后， 103拷貝以下含 U模板應完全降解，不能產(chǎn)生擴增產(chǎn)物。 （ 2）以參考品 /對照品進行半成品質(zhì)量控制。（ 3）以參考品 /對照品進行成品質(zhì)量檢驗。 本指導原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。 二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 綜述資料的撰寫應符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注 冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）（以下簡稱“ 44 號公告”）的相關(guān)要求。 與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應為陰性。 、每一步生產(chǎn)工藝的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。 產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內(nèi)或境外已批準上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細胞、血型抗體等。 與 C3d 陽性或陰性樣本反應為陽性或陰性。 血清、血漿比對的評估資料。 穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。 臨床總病例數(shù)應不少于 3000 例。 同時應明確配合使用的試劑產(chǎn)品。產(chǎn)品技術(shù)要求應符合《辦法》和“ 44號公告”的相關(guān)規(guī)定。 （十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品 預期用途、檢驗原理、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。 4.【樣本要求】 明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。如配合其他試劑進行試驗，需注明試驗方法應完全符合配合試劑的試驗操作要求。 。 6.【檢驗方法】 明確配合使用的抗體篩查用紅細胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。 2.【儲存條件及有效期】 說明試劑的儲存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。半成品檢定應明確半成品的檢驗要求及方法。風險分析中應充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行抗人球蛋白檢測時可能存在一定的干擾、實驗過程不規(guī)范、有些抗體較弱導致的檢測結(jié)果不穩(wěn)定等，申請人應根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應用可能存在的風險。抗體致敏紅細胞檢測應根據(jù)疾病的種類，分別進行臨床試驗。 該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比 試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。 采用陰性結(jié)果的血清重復 10次檢測，均應出現(xiàn)陰性反應。 特異性 與已知抗體類型的血型抗體對應的 O 型相應抗原陽性紅細胞的反應為陽性。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等 。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種血型抗體（ IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于 1+。 本指導原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。核酸擴增法檢測試劑是基于核酸擴增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。 2.成品質(zhì)量控制 （ 1）每一批核酸擴增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。 工藝研究的資料應能對反應體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應條件、校準方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。應具有 DNA 聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性， 94℃保溫 1 小時后仍保持 50%活性。端 )進行標記，如熒光素報告基團或其他發(fā)光標記物，在 339。純度應達到電泳級（ PAGE）或 HPLC 級，不含雜帶。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應提供的資料包括：對物料供應商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標準、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。 2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應具有與其技術(shù)要求相適應的人員、廠房、設施和 — 23— 儀器設備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴增檢測以及操作人員防護所需的設備。（ 2）如果在 FAM 通道有對數(shù)增長期或Ct 值小于 30 則 1）若樣本的 +008，則樣本的 HBVDNA 濃度 510?IU/ml 第四篇：核酸擴增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導 原則 3 附件 3 核酸擴增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則 一、前言 本指導原則主要針對核酸擴增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導性技術(shù)要求。 五、參考文獻： 1.《中國生物制品規(guī)程》（ 2021 年版），化學工業(yè)出版社 — 10— 第三篇：乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒 (PCR 熒光探針法 ) 乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒 樣本要求 ：血清或血漿 1）血清：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血 2 毫升，注入無菌的干燥玻璃管，室溫放置 30— 60min，血標本可自發(fā)完全凝集析出血清，或直接使用水平離心機， 1500rpm 離心 5 分鐘，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至 滅菌離心管 2）血漿：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血 2 毫升，注入含EDTA2K 或枸櫞酸鈉的玻璃管，立即顛倒玻璃管混合 5— 10 次，使抗凝劑和靜脈血充分混勻， 5— 10 分鐘后即可分離血漿，轉(zhuǎn)移至 滅菌離心管 ：所采集的標本可立即用于測試，也可以保存在 — 20℃待測，保存期為 6 個月，標本運送采用 0℃冰壺。 產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。 （ 2）半成品檢驗 根據(jù)試劑盒的企業(yè)標準或者制檢規(guī)程進行半成品的檢驗。酶標反應板經(jīng)檢驗合格后方能用于包被。 企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應 與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清 /血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應為血清 /血漿。 （ 1）酶標板①外觀 明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應剔除。 BSA 的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA 含量，其標準為≥90%。建議作以下檢驗： （ 1）牛血清或羊血清 外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳，一般每個電泳道加樣量為 5μ g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。 、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。應在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。如有適用的臨床診療指南，則應在此項下引用，相應檢驗結(jié)果的解釋應符合相關(guān)指南的要求。 （十）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預期用途、樣本采集及處理、檢驗方法、檢驗結(jié)果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。 作為臨床評價資料時，其境外臨床試驗資料在滿足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術(shù)指導原則》要求的基礎上，應至少有一家臨床試驗機構(gòu)在中國境內(nèi)，檢測病例數(shù)不低于總病例數(shù)的 1/3。 臨床試驗樣本量除需滿足上述統(tǒng)計學估算的最低樣本量要求外，還應保證入組病例覆蓋受試者的各種特征； 如臨床試驗研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。如試驗用體外診斷試劑與臨床參考方法進行對比研究，其臨床評價標準應包括臨床靈敏度、臨床特異度等。入組人群還應包括急性及慢性病毒性乙型肝炎患者，同時根據(jù)臨床驗證需要，入組病例應包括不同疾病進展期（如：免疫耐受期、免疫活動期等）的患者。 。 （六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究?？刹捎蒙陥螽a(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品同時檢測不少于五套經(jīng)充分確認的乙型肝炎患者系列采集樣本，也可采用申報產(chǎn)品檢測不少于五套的商業(yè)化 的血清轉(zhuǎn)換盤。 干擾物質(zhì)應根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的干擾情況進行驗證。 ，如標準差或變異系數(shù)等評價標準作出合理要求。各項性能評價應符合以下要求。如涉及，申請人應提供酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。 表 1 抗原外觀、蛋白濃度、純度、分子量及功能性實驗等 2 抗體外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價及功能性實驗等 3 標記用酶酶的純度值（ RZ 值）以及功能性實驗 料選擇、制備、陰陽性確認等詳細研究資料。申請人應依據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)需求，制定科學、合理的主要原材料質(zhì)量控制標準，在制定標準過程中建議遵循以下幾點： 主要原材料的質(zhì)量控制標準應包括相應實驗方法及原材料應達到的客觀評價標準。主要原材料的篩選過程應有科學合理的實驗設計、完整的實驗過程、詳實的 實驗數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析過程，申請人應能夠依據(jù)研究過程確定產(chǎn)品的主要原材料。目前該標志物定量檢測的臨床意義尚不明確。 HBeAg 是從病毒 C 基因的第一個起始密碼子開始翻譯產(chǎn)生的包含PreC 及 C 序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細胞內(nèi)蛋白酶切除其 N 端 19 個氨基酸及 C 端 34 個氨基酸后成為可分泌的 e 抗原。 本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法 規(guī)、標準的不斷完善和科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。應在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。 HBV 抗原與抗體的血清學標志物與臨床關(guān)系復雜，必須對幾項標志物綜合分析，方有助于臨床診療。 抗 HBe 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷及慢 性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學轉(zhuǎn)換的判定。 研究資料。 企業(yè)對主要原材料的質(zhì)量控制，生產(chǎn)企業(yè)應依據(jù)質(zhì)量控制標準對原材料進行檢驗，檢驗合格方可用于生產(chǎn)。申請人需在申報資料中提供依據(jù)主要原材料的質(zhì)量控制標準對原材料進行質(zhì)檢的資料，如主要原材料為外購，還需提供主要原材料供應商的出廠檢測報告。 ：申請人應考慮反應時間、反應溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實驗確定上述條件的最 佳組合。對于此類產(chǎn)品，性能評估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。臨床樣本收集過程中應考慮不同濃度及患者感染病毒的基因型（我國主要流行的 B、 C、 D 型）。建議在病毒感染的醫(yī)學決定水平進行交叉反應的驗證，申請人應詳細 說明交叉反應樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果等。 換的檢測，應進行相應性能研究。 在陽性判斷值設定后，申請人應當選取一定數(shù)量陰、陽性真實臨床樣本進行實驗驗證。 （七）臨床試驗臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技 術(shù)指導原則》的要求。 根據(jù)產(chǎn)品臨床驗證的目的，入組人群應包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦。 試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性 符合率等。