【正文】 細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建 立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。 核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（ DNase）和核糖核酸酶（ RNase）污染。 應(yīng)作 HPLC 分析和紫外光吸收分析。 凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到 HPLC 純。 （ UNG） 具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IUUNG — 25— 在 37℃處理 3分鐘后， 103拷貝以下含 U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。 （ 2）以參考品 /對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。（ 3）以參考品 /對照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。 本指導(dǎo)原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 二、注冊申報(bào)資料要求 （一）綜述資料 綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注 冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號(hào)）（以下簡稱“ 44 號(hào)公告”）的相關(guān)要求。 與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。 、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。 產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細(xì)胞、血型抗體等。 與 C3d 陽性或陰性樣本反應(yīng)為陽性或陰性。 血清、血漿比對的評估資料。 穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。 臨床總病例數(shù)應(yīng)不少于 3000 例。 同時(shí)應(yīng)明確配合使用的試劑產(chǎn)品。產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和“ 44號(hào)公告”的相關(guān)規(guī)定。 （十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品 預(yù)期用途、檢驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。 4.【樣本要求】 明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。如配合其他試劑進(jìn)行試驗(yàn)，需注明試驗(yàn)方法應(yīng)完全符合配合試劑的試驗(yàn)操作要求。 。 6.【檢驗(yàn)方法】 明確配合使用的抗體篩查用紅細(xì)胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號(hào)等內(nèi)容。 2.【儲(chǔ)存條件及有效期】 說明試劑的儲(chǔ)存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。半成品檢定應(yīng)明確半成品的檢驗(yàn)要求及方法。風(fēng)險(xiǎn)分析中應(yīng)充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進(jìn)行抗人球蛋白檢測時(shí)可能存在一定的干擾、實(shí)驗(yàn)過程不規(guī)范、有些抗體較弱導(dǎo)致的檢測結(jié)果不穩(wěn)定等，申請人應(yīng)根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應(yīng)用可能存在的風(fēng)險(xiǎn)?？贵w致敏紅細(xì)胞檢測應(yīng)根據(jù)疾病的種類，分別進(jìn)行臨床試驗(yàn)。 該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比 試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。 采用陰性結(jié)果的血清重復(fù) 10次檢測，均應(yīng)出現(xiàn)陰性反應(yīng)。 特異性 與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的 O 型相應(yīng)抗原陽性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陽性。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來源等 。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 靈敏度：已知抗體效價(jià)的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種血型抗體（ IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于 1+。 本指導(dǎo)原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報(bào)資料中部分項(xiàng)目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。核酸擴(kuò)增法檢測試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。 2.成品質(zhì)量控制 （ 1）每一批核酸擴(kuò)增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測及注冊檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。 工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。應(yīng)具有 DNA 聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性， 94℃保溫 1 小時(shí)后仍保持 50%活性。端 )進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在 339。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（ PAGE）或 HPLC 級，不含雜帶。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。 2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和 — 23— 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。（ 2）如果在 FAM 通道有對數(shù)增長期或Ct 值小于 30 則 1）若樣本的 +008，則樣本的 HBVDNA 濃度 510?IU/ml 第四篇：核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo) 原則 3 附件 3 核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對核酸擴(kuò)增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。 五、參考文獻(xiàn)： 1.《中國生物制品規(guī)程》（ 2021 年版），化學(xué)工業(yè)出版社 — 10— 第三篇：乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒 (PCR 熒光探針法 ) 乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒 樣本要求 ：血清或血漿 1）血清：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血 2 毫升，注入無菌的干燥玻璃管，室溫放置 30— 60min，血標(biāo)本可自發(fā)完全凝集析出血清，或直接使用水平離心機(jī)， 1500rpm 離心 5 分鐘，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至 滅菌離心管 2）血漿：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血 2 毫升，注入含EDTA2K 或枸櫞酸鈉的玻璃管，立即顛倒玻璃管混合 5— 10 次，使抗凝劑和靜脈血充分混勻， 5— 10 分鐘后即可分離血漿，轉(zhuǎn)移至 滅菌離心管 ：所采集的標(biāo)本可立即用于測試，也可以保存在 — 20℃待測，保存期為 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送采用 0℃冰壺。 產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號(hào)、實(shí)際包裝量、抽樣申請單的要求進(jìn)行抽樣，同時(shí)填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。 （ 2）半成品檢驗(yàn) 根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗(yàn)合格后方能用于包被。 企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng) 與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清 /血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清 /血漿。 （ 1）酶標(biāo)板①外觀 明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。 BSA 的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA 含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。建議作以下檢驗(yàn)： （ 1）牛血清或羊血清 外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個(gè)電泳道加樣量為 5μ g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。 、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。 （十）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、樣本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。 作為臨床評價(jià)資料時(shí)，其境外臨床試驗(yàn)資料在滿足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求的基礎(chǔ)上，應(yīng)至少有一家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)在中國境內(nèi)，檢測病例數(shù)不低于總病例數(shù)的 1/3。 臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征； 如臨床試驗(yàn)研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。如試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考方法進(jìn)行對比研究，其臨床評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。入組人群還應(yīng)包括急性及慢性病毒性乙型肝炎患者，同時(shí)根據(jù)臨床驗(yàn)證需要，入組病例應(yīng)包括不同疾病進(jìn)展期（如：免疫耐受期、免疫活動(dòng)期等）的患者。 。 （六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究?？刹捎蒙陥?bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品同時(shí)檢測不少于五套經(jīng)充分確認(rèn)的乙型肝炎患者系列采集樣本，也可采用申報(bào)產(chǎn)品檢測不少于五套的商業(yè)化 的血清轉(zhuǎn)換盤。 干擾物質(zhì)應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。 ，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)作出合理要求。各項(xiàng)性能評價(jià)應(yīng)符合以下要求。如涉及，申請人應(yīng)提供酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。 表 1 抗原外觀、蛋白濃度、純度、分子量及功能性實(shí)驗(yàn)等 2 抗體外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)及功能性實(shí)驗(yàn)等 3 標(biāo)記用酶酶的純度值（ RZ 值）以及功能性實(shí)驗(yàn) 料選擇、制備、陰陽性確認(rèn)等詳細(xì)研究資料。申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)需求，制定科學(xué)、合理的主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，在制定標(biāo)準(zhǔn)過程中建議遵循以下幾點(diǎn)： 主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法及原材料應(yīng)達(dá)到的客觀評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。主要原材料的篩選過程應(yīng)有科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、完整的實(shí)驗(yàn)過程、詳實(shí)的 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析過程，申請人應(yīng)能夠依據(jù)研究過程確定產(chǎn)品的主要原材料。目前該標(biāo)志物定量檢測的臨床意義尚不明確。 HBeAg 是從病毒 C 基因的第一個(gè)起始密碼子開始翻譯產(chǎn)生的包含PreC 及 C 序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白酶切除其 N 端 19 個(gè)氨基酸及 C 端 34 個(gè)氨基酸后成為可分泌的 e 抗原。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法 規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 HBV 抗原與抗體的血清學(xué)標(biāo)志物與臨床關(guān)系復(fù)雜，必須對幾項(xiàng)標(biāo)志物綜合分析，方有助于臨床診療。 抗 HBe 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷及慢 性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。 研究資料。 企業(yè)對主要原材料的質(zhì)量控制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對原材料進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格方可用于生產(chǎn)。申請人需在申報(bào)資料中提供依據(jù)主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對原材料進(jìn)行質(zhì)檢的資料，如主要原材料為外購，還需提供主要原材料供應(yīng)商的出廠檢測報(bào)告。 ：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最 佳組合。對于此類產(chǎn)品，性能評估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。臨床樣本收集過程中應(yīng)考慮不同濃度及患者感染病毒的基因型（我國主要流行的 B、 C、 D 型）。建議在病毒感染的醫(yī)學(xué)決定水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證，申請人應(yīng)詳細(xì) 說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果等。 換的檢測，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)性能研究。 在陽性判斷值設(shè)定后，申請人應(yīng)當(dāng)選取一定數(shù)量陰、陽性真實(shí)臨床樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。 （七）臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技 術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。 根據(jù)產(chǎn)品臨床驗(yàn)證的目的，入組人群應(yīng)包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦。 試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性 符合率等。