【正文】 乙型肝炎病毒 e抗原、 e抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（合集） 第一篇：乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 2 乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是針對(duì)乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法 規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。 一、適用范圍（一）背景簡(jiǎn)介乙型肝炎病毒（ hepatitisBvirus，HBV）屬嗜肝 DNA 病毒科，是乙型病毒性肝炎的病原體。 HBV 主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。 HBV 感染呈世界性流行，但不同地區(qū) HBV 感染的流行強(qiáng)度差異很大。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約 20 億人曾感染 HBV，其中 億人為慢性 HBV 感染者，每年約有 65萬(wàn)人死于 HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌（ HCC）。 通過(guò)免疫學(xué)方法檢 測(cè) HBV 標(biāo)志物是臨床最常用的 HBV 感染的病原學(xué)診斷方法。 HBV 具有三個(gè)抗原系統(tǒng)，如：乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg）與乙型肝炎病毒表面抗體（抗 HBs）、乙型肝炎病毒 e 抗原（ HBeAg）與乙型肝炎病毒 e 抗體（抗 HBe）、乙型肝炎病毒核心抗體（抗 HBc）及抗 HBcIgM。 HBV 抗原與抗體的血清學(xué)標(biāo)志物與臨床關(guān)系復(fù)雜，必須對(duì)幾項(xiàng)標(biāo)志物綜合分析，方有助于臨床診療。 HBeAg 是從病毒 C 基因的第一個(gè)起始密碼子開(kāi)始翻譯產(chǎn)生的包含PreC 及 C 序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白酶切除其 N 端 19 個(gè)氨基酸及 C 端 34 個(gè)氨基酸后成為可分泌的 e 抗原。 HBeAg 為可溶性蛋白質(zhì)，產(chǎn)生后分泌入血，在患者癥狀出現(xiàn)后大約 1 周出現(xiàn)，通常在幾周后消失，但在 HBV慢性感染者體內(nèi)可能持續(xù)存在。 血清 HBeAg 與 HBV 復(fù)制及疾病傳染性相關(guān)， HBV 感染患者的血清中存在 HBeAg 是病毒活躍復(fù)制的指標(biāo)。在 HBsAg 陽(yáng)性人群中， HBeAg 的消失以及抗 HBe 的出現(xiàn)是血清學(xué)轉(zhuǎn)換的標(biāo)志，表示病毒復(fù)制活躍程度的下降。但是，臨床上存在病毒復(fù)制活躍的患者血清中 HBeAg 為陰性的情況，如： HBV 基因組前 C 區(qū) 1896 位堿基的終止密碼變異，可導(dǎo)致HBeAg 陰性。 （二）本指導(dǎo)原則適用范圍 、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法等免疫學(xué)方法，對(duì)來(lái)源于血清或血漿等人體樣本中的 HBeAg、抗 HBe 進(jìn)行體外檢測(cè)，其臨床預(yù)期用途如下： 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷； 慢性乙型肝炎病毒感染者 HBeAg 陽(yáng)性與陰性人群區(qū)分； 慢性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。該指標(biāo)定量檢測(cè)可用于抗病毒療效的監(jiān)測(cè)等。 抗 HBe 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷及慢 性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。目前該標(biāo)志物定量檢測(cè)的臨床意義尚不明確。 HBeAg、抗 HBe 的定性檢測(cè)試劑，關(guān)于 HBeAg的定量檢測(cè)可參考本指南。 二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他等內(nèi)容。其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述申報(bào)產(chǎn)品臨床預(yù)期用途，包括適用人群、適應(yīng)癥及臨床使用環(huán)境； 產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品主要組成成分及檢測(cè)原理； 同類 產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從預(yù)期用途、產(chǎn)品性能等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號(hào)）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號(hào)）的相關(guān)要求。 （二）主要原材料研究資料 品主要原材料是指影響檢測(cè)反應(yīng)的靈敏度與特異性的生物活性物質(zhì)，本指導(dǎo)原則涉及產(chǎn)品的主要原材料如下： 檢測(cè)試劑：包被用抗 HBe，標(biāo)記用抗 HBe，反應(yīng)體系中各種信號(hào)放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標(biāo)液 /對(duì)照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。 抗 HBe 檢測(cè)試劑：包被用抗 HBe，標(biāo)記用抗 HBe， HBeAg，反應(yīng)體系中各種信號(hào)放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標(biāo)液 /對(duì)照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。 研究資料。主要原材料的篩選過(guò)程應(yīng)有科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、完整的實(shí)驗(yàn)過(guò)程、詳實(shí)的 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析過(guò)程，申請(qǐng)人應(yīng)能夠依據(jù)研究過(guò)程確定產(chǎn)品的主要原材料。 如主要原材料為外購(gòu)，應(yīng)確定供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商應(yīng)為原材料的生產(chǎn)商，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。同時(shí)，抗原應(yīng)明確抗原名稱、生物學(xué)來(lái)源； 抗體明確抗體名稱、生物學(xué)來(lái)源、刺激免疫原名稱及其來(lái)源（天然或重組）、克隆號(hào)（如為單克隆抗體）等信息。 如主要原材料為申請(qǐng)人自制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)明確原材料的制備原理，描述制備過(guò)程。如抗原為天然抗原，應(yīng)明確抗原制備所選病毒毒株、病毒的培養(yǎng)、抗原提取及純化、抗原鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)； 如為重組抗原，則應(yīng)寫明目的基因的選擇及來(lái)源、基因克隆過(guò)程（如特定脫氧核糖核酸（ DNA）分子的體外處理、重組連接、轉(zhuǎn)化和宿主細(xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)過(guò)程）、抗原表達(dá)及抗原純化鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)。針對(duì)主要原材料抗體，應(yīng)明確免疫刺激原的名稱及來(lái)源。如為多克隆抗體，應(yīng)明確免疫動(dòng)物品系及抗體的收集、純化過(guò)程； 如為單克隆抗體 ，應(yīng)明確免疫動(dòng)物品系，雜交瘤細(xì)胞的制備、細(xì)胞的培養(yǎng)及抗體的收集、純化過(guò)程。 企業(yè)對(duì)主要原材料的質(zhì)量控制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對(duì)原材料進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格方可用于生產(chǎn)。申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)需求，制定科學(xué)、合理的主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，在制定標(biāo)準(zhǔn)過(guò)程中建議遵循以下幾點(diǎn)： 主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法及原材料應(yīng)達(dá)到的客觀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。 主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)至少包括原材料的功能性指標(biāo)要求，功能性指標(biāo)可 以為功能性實(shí)驗(yàn)指標(biāo)或其他體現(xiàn)原材料相應(yīng)生物活性的指標(biāo)。 人源或其他生物源性原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)包含生物安全性指標(biāo)。 對(duì)于涉及標(biāo)記的主要原材料，如外購(gòu)方提供的為已標(biāo)記好的原材料，則原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除了對(duì)原材料本身的質(zhì)量控制外，還應(yīng)依據(jù)標(biāo)記物特性，針對(duì)標(biāo)記物制定相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 質(zhì)控品、定標(biāo)液 /對(duì)照品，主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除被分析物外，還應(yīng)包含基質(zhì)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，例如基質(zhì)中被分析物的濃度要求、陰陽(yáng)性要求及生物安全性指標(biāo)（如適用），質(zhì)控品應(yīng)明確賦值方法。 本指導(dǎo)原則涉及的主要原材料常見(jiàn)的質(zhì)量控制指標(biāo)見(jiàn)表 1。申請(qǐng)人可根據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)及質(zhì)量控制需求，針對(duì)主要原材料制定合理的控制標(biāo)準(zhǔn)。申請(qǐng)人需在申報(bào)資料中提供依據(jù)主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對(duì)原材料進(jìn)行質(zhì)檢的資料，如主要原材料為外購(gòu)，還需提供主要原材料供應(yīng)商的出廠檢測(cè)報(bào)告。 表 1 抗原外觀、蛋白濃度、純度、分子量及功能性實(shí)驗(yàn)等 2 抗體外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)及功能性實(shí)驗(yàn)等 3 標(biāo)記用酶酶的純度值（ RZ 值）以及功能性實(shí)驗(yàn) 料選擇、制備、陰陽(yáng)性確認(rèn)等詳細(xì)研究資料。 企業(yè)參考品的基質(zhì)建議與申報(bào)產(chǎn)品適用的樣本類型一致。企業(yè)參考品應(yīng)至少包括：陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品、精密度參考品。參考品設(shè)置建議參考國(guó)家參考品，陽(yáng)性參考品應(yīng)著重考慮抗原濃度 /抗體滴度要求，陰性參考品則 主要考慮對(duì)產(chǎn)品分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 ， HBeAg 檢測(cè)試劑一般采用雙抗體夾心法，抗 HBe檢測(cè)試劑一般為競(jìng)爭(zhēng)法。 ，如：包被工藝、標(biāo)記工藝（如涉及）、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)等研究資料。 ：申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最 佳組合。如涉及，申請(qǐng)人應(yīng)提供酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。 ：申請(qǐng)人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。 。 （四）分析性能評(píng)估資料申請(qǐng)人應(yīng)提交產(chǎn)品所有性能評(píng)價(jià)的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性 能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來(lái)源等。 分析性能評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對(duì)于此類產(chǎn)品，性能評(píng)估中所用樣品（除非特別說(shuō)明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求。 /陽(yáng)性參考品符合率申請(qǐng)人應(yīng)考察申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)企業(yè)陰 /陽(yáng)性參考品的符合情況，陽(yáng)性參考品重在評(píng)估產(chǎn)品包容性，陰性參 考品旨在評(píng)價(jià)試劑特異性。企業(yè)參考品的檢測(cè)應(yīng)符合參考品說(shuō)明書的要求。 （分析靈敏度）申報(bào)產(chǎn)品最低檢測(cè)限的性能評(píng)估資料應(yīng)包含最低檢測(cè)限的確定及驗(yàn)證過(guò)程。 選取至少 3 份高濃度臨床樣本，采用臨床參考方法或國(guó)家 /國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)其檢測(cè)靶物質(zhì)濃度進(jìn)行確定，之后將臨床樣本做系列倍比稀釋，將檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性率在 90%～ 95%（ n≥ 20）的最大稀釋倍數(shù)作為試劑盒的最低檢測(cè)限。 申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)企業(yè)最低檢測(cè)限參考品，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。 ， 將試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品等進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果一致性。臨床樣本收集過(guò)程中應(yīng)考慮不同濃度及患者感染病毒的基因型（我國(guó)主要流行的 B、 C、 D 型）。 ，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)作出合理要求。因模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來(lái)的所有變異因素，因此精密度評(píng)價(jià)中所用樣本應(yīng)至少包含精密度參考品及若干臨床樣本。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求： 對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑本身的影響外，還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、實(shí)驗(yàn)地 點(diǎn)、檢測(cè)批次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。 設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少 20 天的檢測(cè)，每天至少由 2 人完成不少于 2 次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi) /批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。 用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本均應(yīng)至少包含 3 個(gè)水平：臨界陽(yáng)性樣品、中及強(qiáng)陽(yáng)性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆? 交叉反應(yīng)： 申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)可能出現(xiàn)在檢測(cè)樣本中的病原體進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣品，除乙型肝炎病毒相關(guān)標(biāo)志物外，評(píng)估 HBeAg檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床相關(guān)病原體抗原陽(yáng)性樣本； 評(píng)估抗 HBe檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用臨床相關(guān)病原體抗體陽(yáng)性樣本。病原體種類應(yīng)包括人類 EB病毒（ EBV）、巨細(xì)胞病毒（ CMV）、人類免疫缺陷病毒（ HIV）、乙型肝炎病毒（表面抗原 /抗體、核心抗體）、丙型肝炎病毒（ HCV）等。建議在病毒感染的醫(yī)學(xué)決定水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證，申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì) 說(shuō)明交叉反應(yīng)樣本來(lái)源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果等。 干擾物質(zhì)應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度條件（“最差條件”）下進(jìn)行評(píng)價(jià)，干擾物質(zhì)的選取應(yīng)至少包括：血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、類風(fēng)濕因子、自身抗體及常見(jiàn)治療性藥物等。建議采用弱陽(yáng)性水平樣本對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測(cè)。 其他抗凝劑研究，如申請(qǐng)人聲稱產(chǎn)品適用樣本類型為血漿或血清