【正文】 抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（共五則范文） 第一篇：抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 5 抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是對抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。 本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn) 體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。 一、適用范圍從方法學(xué)考慮，在本文中抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒是指采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，利用全自動、半自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，對人血清或血漿等樣本中抗甲狀腺過氧化物酶抗體的含量進(jìn)行體外定量分析的試劑。化學(xué)發(fā)光免疫分析法主要有直接化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光、酶促間接化學(xué)發(fā)光等。 根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔 2021〕 242號），抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒的管理類別為二類，分類代碼為 6840。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。 本指導(dǎo)原則不適用于： （一）單獨申請注冊的抗甲狀腺過氧化物酶抗體校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。 （二）化學(xué)發(fā)光免疫分析法原理之外的其他抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒。 二、注冊申報資料要求（一）綜述資料甲狀腺過氧化物酶（ thyroidperoxidase， TPO），是催化甲狀腺激素的重要酶，由甲狀腺濾泡細(xì)胞合成。其主要成分是由 933個氨基酸 殘基組成的分子量 103kD的 10%糖化的血色素樣蛋白質(zhì)，表達(dá)在細(xì)胞表面，在濾泡腔面的微絨毛處分布最為豐富。該酶可與甲狀腺球蛋白（ Thyroglobulin， Tg）協(xié)同作用將 L酪氨酸碘化，并將一碘酪氨酸和二碘酪氨酸聯(lián)結(jié)成為甲狀腺激素 T T3 和 rT3。 TPO 也是自身免疫性甲狀腺疾病一種重要的自身抗 原 ， 可 以 刺 激 機 體 免 疫 系 統(tǒng) 產(chǎn) 生 抗 TPO 抗體（ Antibodiestothyroidperoxidase， AntiTPO）。 AntiTPO 作為自身免疫性甲狀腺疾病一種主要的自身抗體，可通過激活補體、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo) 的細(xì)胞毒作用和致敏的 T 殺傷細(xì)胞直接殺傷等作用機制，引起甲狀腺濾胞損傷，間接的抑制甲狀腺素的合成，導(dǎo)致甲狀腺功能減退。檢測該類抗體的主要適用癥為自身免疫性甲狀腺疾病（包括突眼性甲狀腺腫和橋本甲狀腺炎等）。 AntiTPO抗體主要以 IgG 類為主，該抗體主要見于自身免疫性甲狀腺病，如橋本甲狀腺炎（陽性率 85%~100%）、 Graves ?。栃月?65%）、原發(fā)性黏液性水腫患者； 也見于其他器官特異性自身免疫病，如 1型糖尿?。栃月?14%）、Addison ?。栃月?31%）、惡性貧血（陽性率 55%） 及產(chǎn)后甲狀腺炎（陽性率 15%）等。目前認(rèn)為， AntiTPO 抗體為人類自身免疫性甲狀腺炎較理想的標(biāo)志抗體，陽性結(jié)果可用于自身免疫性甲狀腺疾病的輔助診斷。 綜述資料應(yīng)主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同方面進(jìn)行介紹。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申 報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）的相關(guān)要求。 （二）主要原材料研究資料（如需提供） /抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗資料。如抗原 /抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗原 /抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗原 /抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并對其工藝有相關(guān)的驗證。同時確定該抗原 /抗體作為主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 如為申請人外購，則應(yīng)詳述其名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外 購方出具的抗原 /抗體性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述申請人對該抗原 /抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。 （如有）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。 GB/T21415— 2021/ISO17511： 2021《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)、以及不確定度等內(nèi)容。明確校準(zhǔn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并提供校準(zhǔn)品的溯源性文件，校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)品或國際標(biāo)準(zhǔn)品。 （三）主要 生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）生產(chǎn)工藝主要包括：各組分制備工藝的研究，包括試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定依據(jù)等。反應(yīng)體系主要包括：反應(yīng)條件、樣本用量、試劑用量等確定的依據(jù)。 ，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 。 /抗體包被工藝研究：申請人應(yīng)考慮如包被緩沖液及添加量、濃度、時間、溫度等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。 ：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)模式、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。 ：申請人應(yīng)考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的樣本及試劑的添加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗確定樣本稀釋基質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他試劑用量（校準(zhǔn)品、標(biāo)記物、底物等）的研究資料。 （四）分析性能評估資料企業(yè)應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。建議選擇不少于 3 批產(chǎn)品對以下分析性能進(jìn)行研究，包括檢出限、線性、準(zhǔn)確度、重復(fù)性、批間差、特異性等指標(biāo)。 對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用儀器】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。如產(chǎn)品涉及不同包裝規(guī)格，則需要提供每個包裝規(guī)格在不同型號儀器上的評估資料； 如不同包裝規(guī)格之間不存在性能上的差異，需要提交包裝規(guī)格間不存在性能差異的說明。 ，其結(jié)果應(yīng)滿足相關(guān)國際 /國家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求： 相對偏差根據(jù)企業(yè)提供的試劑盒線性區(qū)間，將有證參考物質(zhì)或其他公認(rèn)的參考物質(zhì)，或由參考方法定值的人源性樣品（可適當(dāng)添加被測物，以獲得高濃度的樣品）作為樣本，合理設(shè)置 2~3 個濃度，將其作為樣本按照待測試劑盒說明書的步驟進(jìn)行檢測，每個樣品重復(fù)測定 3 次，測試結(jié)果記為（ Xi），按式（ 1）分別計算相對偏差（ Bi）。如果 3 次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于 2 次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有 1 次結(jié)果不符合要求 ，則應(yīng)重新連續(xù)測試 20 次，并分別按照公式（ 1）計算相對偏差，如果大于等于 19 次測試的結(jié)果符合要求。 ?????（ 1）式中： Bi—— 相對偏差； Xi—— 測量濃度； T—— 標(biāo)定濃度。 注：優(yōu)先考慮使用國家標(biāo)準(zhǔn)品或國際標(biāo)準(zhǔn)品、參考品。 比對試驗參考體外診斷試劑分析性能評估相關(guān)技術(shù)審查指導(dǎo)原則的要求完成準(zhǔn)確度（方法學(xué)比對）評估。 取不少于 40 個合理分布在線性區(qū)間內(nèi)不同濃度的人血清或 /和血漿樣本，待測 AntiTPO 試劑與生產(chǎn)企業(yè)選定的比對系統(tǒng)進(jìn)行比對試驗。每份樣本按待測試劑及選定比對系統(tǒng)的要求分別進(jìn)行檢測，每份樣本各測定 1 遍，用線性回歸方法對兩組結(jié)果進(jìn)行線性擬合，得到線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)（ r）和斜率，計算各個樣本的待測試劑測定值與比對系統(tǒng)測定值的絕對偏差或相對偏差。 回收實驗參考體外診斷試劑分析性能評估相關(guān)技術(shù)審查指導(dǎo)原則要求完成準(zhǔn)確度（回收實驗）評估。 方法：選擇接近參考區(qū)間的常規(guī)檢測樣本，分為體積 相同的 3— 4份，在其中 2— 3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標(biāo)準(zhǔn)液制備待回收分析樣本，加入體積小于原體積的 10%，制成 2— 3 個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進(jìn)行測定，通常對樣本進(jìn)行 3 次重復(fù)測定，計算均值，取其均值進(jìn)行下述計算，求得回收率。 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告： 用公式（ 2）計算回收率： ??（ 2）式中： R— 回收率； V— 加入待測物標(biāo)準(zhǔn)液的體積； V0— 基礎(chǔ)樣本的體積 C— 基礎(chǔ)樣本加入待測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后的檢測濃度； C0— 基礎(chǔ)樣本的檢測濃度； Cs— 待測物標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。 （ LOD）申請人應(yīng)評估空白限（ LOB）和檢出限（ LOD）。 空白限的建立可使用檢測零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液的方法進(jìn)行。例如重復(fù)測定 20 次，根據(jù)測量結(jié)果的平均值（ M）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），計算 M+2SD及其對應(yīng)的濃度值，結(jié)果應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。 檢出限的確立可采用系列稀釋參考品的方法進(jìn)行。建議使用國際參考品 /國家參考品進(jìn)行梯度稀釋并進(jìn)行至少 60 次檢測 ， 95%以上的檢測結(jié)果高于空白限作為檢出限。最低檢出限應(yīng)不高于 12IU/ml。另外，應(yīng)使用最低檢出限或接近最低檢出限水平的樣本進(jìn)行檢出限的驗證，結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。 測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的人血清 /血漿，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇 7— 11 個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至 130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié) 果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，確定線性范圍。 驗證線性范圍時，可以采用高濃度樣本稀釋的方法驗證線性，將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少 5 種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區(qū)間的下限。按試劑說明書操作，對每一濃度的樣本均重復(fù)檢測不少于 2 次，計算其平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，計算線性相關(guān)系數(shù) r，應(yīng)不低于，線性區(qū)間應(yīng)不窄于 [12， 400]IU/mL。 ，兩個濃度都應(yīng)在試劑的測量范圍內(nèi) ，且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值附近樣本和病理高值樣本，建議采用濃度為（ 30177。 6） IU/mL和（ 200177。 40） IU/mL的樣本。 分別用不同濃度的樣本各重復(fù)檢測 10 次，計算 10 次測量結(jié)果的平均值（ M）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），根據(jù)公式（ 3）得出變異系數(shù)（ CV）。 CV=SD/M 100%????????（ 3） 3 個批號的試劑盒分別檢測濃不同濃度（建議與重復(fù)性樣本濃度的選擇一致）的樣本，各重復(fù) 10 次，計算每個濃度樣本 30 次測量結(jié)果的平均值（ M）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），根據(jù)公式（ 3）得出變異系數(shù)（ CV），應(yīng)不大于 15%。 CLSI的 EP7A2《臨床生化干擾實驗批準(zhǔn)指南》或《 WS/T4162021干擾實驗指南》進(jìn)行特異性評估。 交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗體等的驗證情況，應(yīng)至少驗證與抗甲狀腺球蛋白抗體的交叉反應(yīng)情 況。 干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如血紅蛋白、高脂、黃疸、類風(fēng)濕因子、抗核抗體、嗜異性抗體、總蛋白以及說明書中聲稱其他的干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體樣本生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。建議將研究結(jié)果在說明書中進(jìn)行說明。 如無法獲得含有高濃度干擾物質(zhì)的樣本，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區(qū)間附近樣本、中濃度值樣本中的方式進(jìn)行驗證。方法為對模擬添加樣本分別進(jìn)行驗證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾試驗的評價標(biāo) 準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度，被測物濃度至少應(yīng)包括其醫(yī)學(xué)決定水平的濃度。 （ HOOK）效應(yīng)（如適用）說明不會產(chǎn)生 HOOK 效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。每個濃度重復(fù) 3 份，對鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗證。建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。 過度稀釋可能影響樣本基質(zhì)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必