【正文】 C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（五篇） 第一篇： C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 6C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì) C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。 本指導(dǎo)原則是對(duì) C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定 的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。 一、范圍 C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒是指利用免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨法、免疫熒光法等基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對(duì)人全血、血清、血漿或其他體液中的 C 反應(yīng)蛋白進(jìn)行體外定量測(cè)定的試劑。 二、注冊(cè)申報(bào)資料要求 （一）綜述資料 C反應(yīng)蛋白（ Creactiveprotein， CRP）由肝細(xì)胞合成，在胎兒期產(chǎn)生，非母體胎盤傳遞。其產(chǎn)生機(jī)理是：當(dāng)機(jī)體受感染或組織受損傷時(shí)巨噬細(xì)胞和其他白細(xì)胞等被激活，產(chǎn)生白 細(xì)胞介素 6(IL6)、白細(xì)胞介素 1（ IL1）、腫瘤壞死因子 TNFa 等細(xì)胞因子及其他介導(dǎo)物，這些細(xì)胞因子和介導(dǎo)物到達(dá)肝臟，刺激肝細(xì)胞和上皮細(xì)胞合成 CRP。在結(jié)構(gòu)上， CRP 含 5 個(gè)多肽鏈亞單位，非共價(jià)地結(jié)合為盤形多聚體，分子量為 ～ 14萬(wàn)，CRP 是一種典型的急性時(shí)相蛋白。 常規(guī) CRP 測(cè)定包括定性、半定量和定量分析，可用于評(píng)價(jià)感染，組織損傷和炎癥性疾病。對(duì)于常規(guī)的 CRP 測(cè)定，參考值通常被認(rèn)為是臨床上含量高于 10 毫克 /升。在健康人群血液中 CRP 水平低于 5 毫克 /升，而在各種條件下，急性炎癥 4～ 8 小時(shí)內(nèi)， CRP 值達(dá)到約 20 至 500毫克 /升。常規(guī) CRP 作為急性炎癥評(píng)估指標(biāo)比紅細(xì)胞沉降率（ ESR）和白細(xì)胞計(jì)數(shù)更敏感、更可靠。 超敏 C 反應(yīng)蛋白線性范圍低端低于常規(guī) CRP，這種較低的范圍可擴(kuò)大使用適應(yīng)癥， C 反應(yīng)蛋白是非特異性的，必須結(jié)合臨床癥狀綜合評(píng)估，不能作為特定的疾病或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的確診依據(jù)。 圖 1 超敏 CRP 與常規(guī) CRP的區(qū)別超敏 C 反應(yīng)蛋白常見(jiàn)的用途可作為心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別的輔助手段。配合傳統(tǒng)的急性冠脈綜合征臨床診斷使用，可作為冠狀動(dòng)脈疾病或急性冠脈綜合征復(fù)發(fā)的預(yù)警指示物。 圖 2超 敏 CRP的臨床意義表 1各種 CRP的區(qū)別及性能要求常規(guī) CRP超敏 CRP 用途感染，組織損傷和炎癥性疾病的評(píng)價(jià)。提供炎癥性疾病的診斷，治療和監(jiān)控的信息是區(qū)分低水平炎癥狀態(tài)的靈敏指標(biāo) ,血清hsCRP 水平與動(dòng)脈粥樣硬化及急性腦梗死 (ACI)等心腦血管疾病的發(fā)生、嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān)參考值范圍參考值范圍 :約 10mg/L 健康人群：≤ 5mg/L 急性范圍 :20500mg/L 參考值范圍 :1mg/L 推薦線性范圍≥ 5mg/L 到上限（二）產(chǎn)品說(shuō)明書說(shuō)明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重 要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說(shuō)明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說(shuō)明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。 結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo) 原則》的要求，下面對(duì) C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說(shuō)明書編制。 1.【預(yù)期用途】 C 反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、全血和 /或其他體液中的 C 反應(yīng)蛋白濃度，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。 注 1： CRP 值是非特異性的，不能作為特定的疾病或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)指標(biāo)，不建議把 CRP的具體臨床診斷意義列入預(yù)期用途。 注 2： C反應(yīng)蛋白包括常規(guī) C反應(yīng)蛋白（ CRP）、超敏 CRP（ hsCRP），具體根據(jù)臨床試 驗(yàn)核定。 2.【主要組成成份】（ 1）說(shuō)明試劑包含主要組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。 （ 2）試劑中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，申請(qǐng)人應(yīng)列出相關(guān)試劑 /耗材的名稱、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。 （ 3）試劑盒中不包含質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材，應(yīng)說(shuō)明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材的制造商、產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號(hào)等詳細(xì)信息； 如包含校準(zhǔn)品和 /或質(zhì)控品，應(yīng)說(shuō)明其主要組成成分及其生物學(xué)來(lái)源，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的檢測(cè)范圍。 3.【儲(chǔ)存條件及有 效期】試劑的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息作詳細(xì)介紹。并對(duì)開封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、濕度及效期等條件予以明確。 4.【樣本要求】 重點(diǎn)明確以下內(nèi)容： （ 1）樣本采集：采集時(shí)間點(diǎn)是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，具體采集部位及類型，詳述具體的操作方法或列出相關(guān)操作指南文件以指導(dǎo)使用者（最好能夠給出具體圖示），盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的影響。 （ 2）樣本處理及保存：樣本的保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）、運(yùn)輸條件等。冷藏 /冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)限制。 （ 3）樣本的最大可稀釋倍數(shù)。 5.【適用機(jī)型】所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。 6.【檢驗(yàn)方法】 詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括： （ 1）實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度等注意事項(xiàng)，檢驗(yàn)試劑及樣本復(fù)溫等要求。 （ 2）試劑使用方法（手工 /半自動(dòng) /全自動(dòng)）、注意事項(xiàng)。 （ 3）詳述待測(cè)樣品的預(yù)處理方法、步驟 及注意事項(xiàng)。 （ 4）明確樣本檢測(cè)加樣量及觀察時(shí)間。 7.【參考值（參考范圍）】應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡(jiǎn)單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考值（范圍）”。 8.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】結(jié)合質(zhì)控品對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。本試劑的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀 /體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。如存在檢測(cè)灰區(qū)，應(yīng)對(duì)灰區(qū)結(jié)果的處理方式一并詳 述。明確有可能存在的數(shù)值升高因素及數(shù)值降低因素，明確說(shuō)明對(duì)何種條件下需要進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，以及在重復(fù)檢測(cè)時(shí)對(duì)待測(cè)樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述。 9.【檢驗(yàn)方法局限性】（ 1）干擾物質(zhì)及 HOOK 效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。 （ 2）操作時(shí)必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程，精心操作才能得到正確結(jié)果，對(duì)操作程序作任何修改都可能影響結(jié)果。 （ 3）有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析。 某些未知成分屏蔽了抗原決定簇使之無(wú)法與抗體結(jié)合； C 反應(yīng)蛋白抗原隨著樣本放置時(shí)間的延長(zhǎng)和外界溫度上升逐漸降解無(wú)法被抗體識(shí)別； 不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、樣本中被測(cè)物質(zhì)濃度過(guò)低等均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。 10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)： 注 1：由于 C 反應(yīng)蛋白目前尚無(wú)國(guó)家參考品，故選用國(guó)際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內(nèi)部參考品，以后國(guó)家參考品若建立，采用國(guó)家參考品。 注 2：對(duì)線性范圍、分析靈敏度等的最低要求見(jiàn)表 1。 （ 1）準(zhǔn)確度： a)檢測(cè)線性范圍內(nèi)幾個(gè)濃度點(diǎn)的 C 反應(yīng)蛋白參考物質(zhì)（國(guó)際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內(nèi)部參考品），檢測(cè)濃度＜ 3mg/L 時(shí)，結(jié)果誤差在177。20%內(nèi)； 檢測(cè)濃 度＞ 3mg/L 時(shí)，結(jié)果誤差應(yīng)在177。 15%（建議相對(duì)偏差）內(nèi)。 注 1：最低不得低于國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生部門質(zhì)控允許范圍。 注 2：推薦檢測(cè)范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個(gè)樣本測(cè)試，其中低值樣本推薦 hsCRP1mg/L 左右， CRP10mg/L左右。 b)回收：將已知濃度的 C 反應(yīng)蛋白加入到血液基質(zhì)或其他體液成份中，其回收率在（ 85%～ 115%）范圍內(nèi)。 c）比對(duì)：用已上市試劑盒或參考方法進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。 （ 2）線性范圍：確立線性范圍至少應(yīng)取 5點(diǎn)（包括下限、中限及上限） ，每次應(yīng)重復(fù)測(cè)定三次，計(jì)算出直線方程 y=a+bx，相關(guān)系數(shù) r 值≥ 。 （ 3）分析靈敏度或檢測(cè)限（空白限）： a）分析靈敏度：說(shuō)明試劑的分析靈敏度或不高于某濃度水平，簡(jiǎn)單介紹確定方法，對(duì)功能靈敏度如何研究可一并注明。 b）檢出限：用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)測(cè)定 20 次，得出 20 次測(cè)量結(jié)果，計(jì)算其平均值（ M）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），得出 M+2SD，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度結(jié)果進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將 M+2SD 的結(jié)果代入上述方程中，求出對(duì)應(yīng)的濃度值，即為最低檢出限。 （ 4）重復(fù)性：同一批次的檢測(cè)試劑對(duì)檢測(cè)范圍內(nèi)某個(gè)濃度的 C反應(yīng)蛋白樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè) 10 次，計(jì)算 10 次測(cè)量結(jié)果的平均值（ M）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），根據(jù)公式 CV=SD/M 100%得出變異系數(shù)，變異系數(shù) CV（ %）≤ 15%。 注：推薦檢測(cè)范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個(gè)樣本測(cè)試，其中低值樣本推薦 hsCRP1mg/L 左右， CRP10mg/L左右。 （ 5）批間差：三個(gè)批次的檢測(cè)試劑對(duì)檢測(cè)范圍內(nèi)某個(gè)濃度的 C反應(yīng)蛋白樣本各重復(fù)檢測(cè) 10 次，計(jì)算 30 次測(cè)量結(jié)果的平均值（ M）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），根據(jù)公式 CV=SD/M 100%得出變異系數(shù)，變異系數(shù) CV（ %）值應(yīng)≤ 20%。 注：推薦檢測(cè)范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個(gè)樣本測(cè)試，其中低值樣本推薦 hsCRP1mg/L 左右， CRP10mg/L左右。 （ 6）校準(zhǔn)品溯源 性申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù) GB/T214152021 提供所用校準(zhǔn)品的來(lái)源、賦值過(guò)程和相應(yīng)指標(biāo)、以及不確定度等內(nèi)容。 （ 7）質(zhì)控品性能要求（如有） a)定值質(zhì)控品測(cè)量準(zhǔn)確度應(yīng)至少給出一種用校準(zhǔn)品校準(zhǔn)測(cè)量程序后測(cè)定該定值質(zhì)控品的試驗(yàn)方法。 b)均一性通常取同批號(hào)的一定數(shù)量最小包裝單元的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，每包裝單元測(cè)試 1 次，按下面的公式計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差 S1； 另用上述校準(zhǔn)品、質(zhì)控品中的 1 個(gè)最小包裝單元連續(xù)測(cè)試相同次數(shù)，計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差 S2； 按下列各公式計(jì)算瓶間重 復(fù)性 CV%，所有參數(shù)的瓶間重復(fù)性結(jié)果均應(yīng)符合要求。最小裝量不夠完成瓶間差檢測(cè)的可只進(jìn)行批內(nèi)精密度檢測(cè)。 公式 1 公式 2 公式 3 公式 4 當(dāng) S1（八）生物安全性（如適用）校準(zhǔn)品、質(zhì)控品如含人源性成分，用經(jīng)過(guò)國(guó)家批檢合格的以下三種體外診斷試劑盒對(duì)該試劑盒的校準(zhǔn)品、質(zhì)控分別進(jìn)行檢測(cè)： a)人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒； b)丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒； c)乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒， HIV抗體、 HCV抗體和 HBsAg應(yīng)為陰性。 11.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容： （ 1） 有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過(guò)了 HBsAg、 HIV1/2Ab、 HCVAb等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。 （ 2）建議實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境要求，如溫度、濕度、電磁環(huán)境等。 （ 3）對(duì)采集樣本的要求，建議使用新鮮血液，不建議使用高脂乳糜樣、黃疸、高類風(fēng)濕因子樣本，勿使用溶血樣本，明確樣本的處理辦法。 （ 4）對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都視為傳染源進(jìn)行處理。 （ 5）其他有關(guān) C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng)。 （三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說(shuō)明擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。另外，對(duì)于國(guó)產(chǎn)試劑，應(yīng)參考《中國(guó)生物制品規(guī)程》（ 2021 年版），將擬申報(bào)產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定、校準(zhǔn)品制備溯源過(guò)程、質(zhì)控品的制備賦值過(guò)程等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。 作為定量檢測(cè)試