【正文】 ； 同類 產品在國內外批準上市的情況，應著重從預期用途、產品性能等方面寫明擬申報產品與目前市場上已獲批準的同類產品之間的主要區(qū)別。在 HBsAg 陽性人群中， HBeAg 的消失以及抗 HBe 的出現是血清學轉換的標志，表示病毒復制活躍程度的下降。 HBV 感染呈世界性流行，但不同地區(qū) HBV 感染的流行強度差異很大。乙型肝炎病毒 e抗原、 e抗體檢測試劑注冊技術審查指導原則（合集） 第一篇：乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑注冊技術審查指導原則 附件 2 乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑注冊技術審查指導原則本指導原則旨在指導注冊申請人對乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。據世界衛(wèi)生組織報道，全球約 20 億人曾感染 HBV，其中 億人為慢性 HBV 感染者，每年約有 65萬人死于 HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝細胞癌（ HCC）。但是，臨床上存在病毒復制活躍的患者血清中 HBeAg 為陰性的情況，如： HBV 基因組前 C 區(qū) 1896 位堿基的終止密碼變異，可導致HBeAg 陰性。綜述資料的撰寫應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）的相關要求。如抗原為天然抗原，應明確抗原制備所選病毒毒株、病毒的培養(yǎng)、抗原提取及純化、抗原鑒定等方法及相關參數； 如為重組抗原，則應寫明目的基因的選擇及來源、基因克隆過程（如特定脫氧核糖核酸（ DNA）分子的體外處理、重組連接、轉化和宿主細胞繁殖等實驗過程）、抗原表達及抗原純化鑒定等方法及相關參數。 質控品、定標液 /對照品，主要原材料質量控制標準除被分析物外，還應包含基質的質量控制標準，例如基質中被分析物的濃度要求、陰陽性要求及生物安全性指標（如適用），質控品應明確賦值方法。 （三）主要生產工藝及反應體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產工藝的確定依據。 （四）分析性能評估資料申請人應提交產品所有性能評價的研究資料，對于每項分析性 能的評價都應包括具體研究目的、實驗方法、可接受標準、實驗數據、統(tǒng)計方法等詳細資料。 選取至少 3 份高濃度臨床樣本，采用臨床參考方法或國家 /國際標準品對其檢測靶物質濃度進行確定，之后將臨床樣本做系列倍比稀釋，將檢測結果的陽性率在 90%～ 95%（ n≥ 20）的最大稀釋倍數作為試劑盒的最低檢測限。 用于精密度評價的臨床樣本均應至少包含 3 個水平：臨界陽性樣品、中及強陽性樣品，并根據產品特性設定適當的精密度要求。 （ HOOK）效應須采用多份高濃度樣本進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個梯度的稀釋液重復 3～ 5 份，對鉤狀效應進行合理的驗證。研究過程中應選取適當的臨床樣本，應包括經確認的標志物為陽性的樣本及經確認標志物為陰性的樣 本。 申請人應對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內，每間隔一定的時間段對儲存樣本進行性能分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性。臨床參考標準是指現有條件下臨床上可獲得的能夠用來確定受試者目標狀態(tài)的最佳方法，通常來自臨床和實驗室的醫(yī)學實踐，包括患者跟蹤隨訪等。 建議臨床試驗采用前瞻性收集的樣本進行研究，同時，在嚴格控制偏倚的前提下，允許入組部分符合要求的既往留存樣本。 HBeAg、抗 HBe 檢測試劑為定性檢測產品，如臨床試驗采用申報產品與已上市同類產品進行比對的試驗設計，可采用單組目標值法樣本量公式估算最低樣本量。 ，必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。申報試劑已有適用的國家標準品、參考品發(fā)布，申請人應在產品技術要求中提出檢測要求。 診療規(guī)范、防治指南、專家共識，其臨床試驗入組病例應能夠覆蓋產品適用人群。 三、參考文獻 1.《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）， 2021 年 7 月 .《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》，（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021 年第 16 號），2021 年 9 月 11 日 .3.《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》，（國家食品藥品監(jiān) 督管理總局公告 2021 年第 17 號）， 2021 年 9 月 11 日 .食品藥品監(jiān)督管理總局關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告（國家食品藥品監(jiān)管總局公告 2021年第 44號），2021年 9月 5日 .，中華醫(yī)學會感染病學分會 .慢性乙型肝炎防治指南（ 2021 年版） .實用肝 XVI 臟病雜志，第 19 卷第 3 期 2021 年 5 月： .病毒性肝炎臨床實踐，人民衛(wèi)生 出 版 社 ，icalPracticeGuidelinesonthemanagementofhepatitisBvirusinfect， 67： ， ， Diagnosis ，andTreatmentofChronicHepatitisB ： ， 2021 ， 67 （ 4 ）：“ e”antigenandantibodytoHepatitisB “ e ”、起草單位國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心。 三、基本要求 （一）基本原則 、生產用的各種原料、輔料等應制定其相應的質量標準，并應符合有關法規(guī)的要求。使用前應按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規(guī)定的質量標準。效價應達到規(guī)定的要求。 （ 2）牛血清白蛋白： 外觀：應為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其它雜質顆粒。 生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。 （ 2）液體試劑裝量瓶 包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應有相應的裝量瓶，并建立相應的質量控制標準，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。 各種工作液在配制過程中應嚴格按質量標準中的配方進行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進行相應的質量檢驗并達到質量標準后，方可使用或分裝。 樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應嚴格按照質量標準中的量進行過濾后再分裝，分裝量的誤差應小于 5%。對于精密性，一般情況下CV 不得高于 15％（采用競爭抑制法的診斷試劑 CV 不得高于 20％）。 （ 1）成品檢驗 成品檢驗時，一般使用國家標準品（參考品）或經國家標準品 （參考品）標化后的企業(yè)參考品，并達到相應質量要求。 1 分鐘 2） 12021rpm 離心 5 分鐘，備用 試劑準備（試劑準備區(qū)）直接使用 HBVPCR 反應管 （樣品制備區(qū)） 往上述 HBV 反應管中用帶濾芯吸嘴分別加入待測樣本、 陰性質控品、 HBV 強陽性質控品、 HBV 臨界陽性質控品和陽性定量參考品的上清液各 20μ l。 本指導原則是在現行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善、科學技術的不斷發(fā)展，其相關內容也將進行適時的調整。 ，擴增體系應設定合理的內標和外標，試劑需設置抗污染的特定措施，擴增產物須進行確證研究。應為高效液相色譜（ HPLC）純、 PCR 級，無 DNase 和 RNase 污染。 20℃保存。應以可見 — 紫外分光光度計進行 200— 800nm 掃描，在 260nm 處應有吸收峰。 具逆轉錄酶活性，無核酸內切酶活性。如果產品不具有國家標準品或參考品，應根據規(guī)定制備相應的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經批準的同類產品的質量。（ 4）成品檢驗的內容應包括：陰 /陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產品）和穩(wěn)定性。 本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。 （二）主要原材料研究資料 主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質 量標準的研究資料。 2. 填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質量控制要求。 、每一步反應體系的確認資料及試驗數據。所有試驗方法應符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。 批內重復性采用同一批次檢測卡重復進行檢測，重復次數不少于10 次。 采用部分臨床樣本進行檢測靈敏度和特異性的評價，應考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應包括陽性和陰性病例。 應對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性。應包括對檢測易產生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。 對于兩種試劑檢測結果不一致 [考核試劑與對比試劑檢測結果不一致、與對比試劑凝集強度差異較大（差異 2 個凝集強度及以上） ]的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認試驗，同時應給出最終的抗體鑒定結果。 產品技術要求的性能指標應至少包括靈敏度、特異性、重復性等。產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參 考文獻，則應以規(guī)范格式對此內容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。 明確適用的抗凝劑的要求。 8.【注意事項】 上腔部分 或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。 在不規(guī)則抗體篩查、交叉配血試驗中 LISS 液可以增強抗原抗體的反應，應嚴格按產品說明書規(guī)范使用低離子液。 明確紅細胞配制使用的 LISS 液的生產廠家、規(guī)格、貨號等內容。 1.【預期用途】 /或間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細胞的檢測（明確疾病類型）等，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。主要原材料應明確抗體來源、克隆 號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應明確填充物來源及主要特征、質量控制要求，緩沖液應明確組成、 pH 值等特性及質控要求。臨床試驗數據記錄表應列明所有病例的具體臨床診斷信 息、凝集強度和抗體鑒定結果，如有不符樣本應列明第三方確認的結果。 在進行間接抗人球蛋白檢測試劑臨床試驗的過程中除與對比試劑進行比較外，陽性結果應給出不規(guī)則抗體的具體鑒定結果。 試 劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內容的研究結果應分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。 試驗 使用被不規(guī)則抗體和 /或 C3d 致敏的紅細胞進行反應，評價產品性能，適用的性能評價內容可以參照間接抗人球蛋白試驗。 批間重復性采用至少三批檢測卡進行重復檢測。 靈敏度 與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數的凝集強度不小于 1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結果。如紅細胞懸液制備要求及紅細胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉數和時間的方式設置離心條件。 ：應說明組成成分，并對外觀、性狀、 pH 值等物理指標及功能性進行研究驗證。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。 一、范圍 抗人球蛋白檢測試劑可進行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配 血、抗體致敏紅細胞的檢測等。穩(wěn)定性試驗可采用加速破壞試驗。檢測結果應符合質量標準的要求。 （三 ）生產工藝 核酸擴增類檢測試劑的基本生產工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。避光、 20℃保存。通常采用 DNA 合成儀人工合成，合成后經聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在 539。 — 24— 由一定數量的 dNTP 構成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（