【正文】 濃度過高或過低的紅細胞懸液會引起異常結果。 明確具體的樣本采集、處理方法及過程。 以下內(nèi)容僅對抗人球蛋白檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，說明書其他內(nèi)容應根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》要求進行編寫。 產(chǎn)品技術要求的附錄應包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。 。 無論直接抗人球蛋白試驗還是間接抗人球蛋白試驗，均應根據(jù)產(chǎn)品的預期用途和適用人群分別進行臨床試驗。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。 分別進行每個預期用途的完整的性能評估資料，應至少包括50 例陽性病例。 日間重復性采用同一批次檢測卡每日重復進行檢測，重復天數(shù)不少于 10 天。 對于抗人球蛋白檢測試劑建議著重對以下分析性能進行研究： ： 提供臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種不規(guī)則抗體（ IgG）檢測靈敏度和特異性的驗證資料，明確所檢出抗體的抗體效價的具體要求，可參照以下要求進行實驗。 反應體系的設置應符合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等公認標準操作 規(guī)范、指南或標準的要求。應提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。 明確抗體的來源，如為單克隆抗體應明確細胞株、克隆號等內(nèi)容。 本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。 5．試劑批放行前，應對需要進行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進行穩(wěn)定性試驗。 （ 3）半成品檢定內(nèi)容包括：陰 /陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。 — 20℃保存。另外，根據(jù)標記熒光素的不同，還應該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如 FAM熒光素在 494nm、TET 熒光素在 521nm、 TAMRA 熒光素在 560nm 處有特異的吸收峰，雜交探針在 493nm、 625nm、 685nm 處有特異的吸收峰 ，檢定合格后入庫。 是指特定的帶有示蹤物（標記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。 — 20℃保存。 ，應提供與通行原材料比對研究結果及相關資料。 二、適用范圍 本指導原則適用于核酸擴增法檢測試劑的注冊技術審查，其他類核酸檢測試劑可參照相關內(nèi)容。蓋緊管蓋， 8000rpm 離心數(shù)秒后轉移至擴增檢測區(qū)。若該診斷試劑沒有國家 — 9— 標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質量。對定量檢測試劑，同時應分析其線性相關系數(shù)和定量質控品檢測結果的準確性。 分裝及包裝均應按照相應的標準操作規(guī)程要求進行。對于定量檢測試劑，其標準品（或校準品）溶液應具有量值溯源性。 （ 3）其他材料 包括試劑瓶標簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫(yī)療 器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定》建立相應質量控制標準。 3.化學原材料 化學原材料的質量標準，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液 pH 值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應符合《中國生物制品主要原輔材 — 5— 料質控標準（ 2021 年版）》分析 純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18 26℃時，溶解時間應≤ 15 分鐘， pH值應為 。 （ 5）功能性實驗 功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關性。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應商要 求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求進行變更申請。 — 2— 術人員、儀器設 備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）》的要求建立相應的質量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。 第二篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術審查指導原則 附件 1 酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術審查指導原則 一、前言 本指導原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應體系、產(chǎn)品 質量控制等環(huán)節(jié)提出指導性技術要求。如申報產(chǎn)品存在新的預期用途，應有充分的臨床試驗證據(jù)作為支持。 按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應符合相關編寫規(guī)范的要求。研究者應充分考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結果對受試者的風險性，應提交倫理委員會的審查意見。樣本量估算過程中，評價指標的臨床可接受標準（ P0）即 HBeAg、抗 HBe檢測試劑臨床陰 /陽性符合率應大于 95%。 3 家（含 3 家）符合要求的臨床試驗機構開展。 如申報產(chǎn)品性能優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，如產(chǎn)品靈敏度顯著高于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準的比較研究和試驗用體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結合，對產(chǎn)品的臨床性能進行綜合評價，從而支持預期用途所聲稱的內(nèi)容。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。研究所需的樣本量應滿足統(tǒng)計學要求。用于該項研究的樣本可為人工構建樣本，建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應的研究結果。 交叉反應： 申請人應針對可能出現(xiàn)在檢測樣本中的病原體進行交叉反應驗證，用于交叉反應驗證的樣品，除乙型肝炎病毒相關標志物外，評估 HBeAg檢測試劑交叉反應的樣本應盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床相關病原體抗原陽性樣本； 評估抗 HBe檢測試劑交叉反應的樣本應盡量采用臨床相關病原體抗體陽性樣本。 申報產(chǎn)品檢測企業(yè)最低檢測限參考品，檢測結果應滿足相應要求。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。 ， HBeAg 檢測試劑一般采用雙抗體夾心法，抗 HBe檢測試劑一般為競爭法。 本指導原則涉及的主要原材料常見的質量控制指標見表 1。針對主要原材料抗體，應明確免疫刺激原的名稱及來源。 （二）主要原材料研究資料 品主要原材料是指影響檢測反應的靈敏度與特異性的生物活性物質，本指導原則涉及產(chǎn)品的主要原材料如下： 檢測試劑：包被用抗 HBe，標記用抗 HBe，反應體系中各種信號放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質，試劑盒中包含的定標液 /對照品（如涉及）、質控品（如涉及）等。 （二）本指導原則適用范圍 、化學發(fā)光法、時間分辨免疫熒光法等免疫學方法，對來源于血清或血漿等人體樣本中的 HBeAg、抗 HBe 進行體外檢測，其臨床預期用途如下： 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷； 慢性乙型肝炎病毒感染者 HBeAg 陽性與陰性人群區(qū)分； 慢性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學轉換的判定。 通過免疫學方法檢 測 HBV 標志物是臨床最常用的 HBV 感染的病原學診斷方法。 本指導原則是針對乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。 HBV 主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。 血清 HBeAg 與 HBV 復制及疾病傳染性相關， HBV 感染患者的血清中存在 HBeAg 是病毒活躍復制的指標。 二、注冊申報資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價以及其他等內(nèi)容。同時，抗原應明確抗原名稱、生物學來源； 抗體明確抗體名稱、生物學來源、刺激免疫原名稱及其來源（天然或重組）、克隆號（如為單克隆抗體）等信息。 人源或其他生物源性原材料質量控制標準中應包含生物安全性指標。企業(yè)參考品應至少包括：陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品、精密度參考品。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應對可用于樣本稀釋的基質或處理方法進行研究，通過實驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質或處理方法。企業(yè)參考品的檢測應符合參考品說明書的要求。針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求： 對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，除檢測試劑本身的影響外，還應對分析儀、操作者、實驗地 點、檢測批次等要素進行相關的驗證。建議采用弱陽性水平樣本對每種干擾物質的干擾影響進行檢測。 （五）陽性判斷值確定資料此類產(chǎn)品臨界值通常采用定標液 /對照品檢測結果經(jīng)特定的計算公式得出，樣本檢測結果通過與臨界值進行比較以判斷檢測結果的陰陽性。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結論。對比試劑在預期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學、檢測性能等方面應與試驗用體外診斷試劑具有較好的可比性。 臨床試驗中所涉及的樣本類型應為實際臨床檢測中常用的樣本類型。臨床試驗樣本量應滿足統(tǒng)計學要求，可采用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法進行估算。除此之外，還應同時進行假設檢驗評價兩種分析方法的一致性。 （八）產(chǎn)品技術要求申請人應當在原材料質量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、臨床評價等結果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技 術要求編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 9 號）的有關要求，編寫產(chǎn)品技術要求。產(chǎn)品說明書中相關技術內(nèi)容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。 不合理的樣本采集、轉運及處理以及不當?shù)膶嶒灢僮骱蛯嶒灜h(huán)境均有可能導致假陰性或假陽性結果。 二、適用范圍 本指導原則適用于有關病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術審查。 （二）原材料質量控制 與產(chǎn)品質量最密切相關的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。 （ 3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進行檢測。 總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥ 32mg/ml。（ 4）標記用酶 應在產(chǎn)品的質量標準中明示所使用的標記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的 檢驗方法和質量標準進行檢驗，酶的純度 RZ 值（ OD403nm/OD280nm）應大于 。 一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白 G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人 IgG 酶結合物吸附，通過顯色反應，使用酶標儀讀數(shù)，計算 CV 值。 酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液 、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標準品（或校準品）溶液。 選擇經(jīng)檢驗合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包 被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗合格后，包被酶標反應板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標反應板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于 2 8℃。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業(yè) 參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質量。質檢人員同時應檢查相關原始記錄。 1）取 200μ l 樣品，加入 450μ lDNA提取液 I 和 4μ l 的內(nèi)標溶液，用振蕩器劇烈混勻 15 秒，瞬時離心數(shù)秒。 本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳