【正文】 濃度過(guò)高或過(guò)低的紅細(xì)胞懸液會(huì)引起異常結(jié)果。 明確具體的樣本采集、處理方法及過(guò)程。 以下內(nèi)容僅對(duì)抗人球蛋白檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，說(shuō)明書(shū)其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫(xiě)。 產(chǎn)品技術(shù)要求的附錄應(yīng)包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。 。 無(wú)論直接抗人球蛋白試驗(yàn)還是間接抗人球蛋白試驗(yàn)，均應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途和適用人群分別進(jìn)行臨床試驗(yàn)。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 分別進(jìn)行每個(gè)預(yù)期用途的完整的性能評(píng)估資料，應(yīng)至少包括50 例陽(yáng)性病例。 日間重復(fù)性采用同一批次檢測(cè)卡每日重復(fù)進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)天數(shù)不少于 10 天。 對(duì)于抗人球蛋白檢測(cè)試劑建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究： ： 提供臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種不規(guī)則抗體（ IgG）檢測(cè)靈敏度和特異性的驗(yàn)證資料，明確所檢出抗體的抗體效價(jià)的具體要求，可參照以下要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 反應(yīng)體系的設(shè)置應(yīng)符合《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》等公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)操作 規(guī)范、指南或標(biāo)準(zhǔn)的要求。應(yīng)提交選擇比較過(guò)程，提交驗(yàn)證試驗(yàn)資料。 明確抗體的來(lái)源，如為單克隆抗體應(yīng)明確細(xì)胞株、克隆號(hào)等內(nèi)容。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。 5．試劑批放行前，應(yīng)對(duì)需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。 （ 3）半成品檢定內(nèi)容包括：陰 /陽(yáng)性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。 — 20℃保存。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長(zhǎng)處有吸收峰，如 FAM熒光素在 494nm、TET 熒光素在 521nm、 TAMRA 熒光素在 560nm 處有特異的吸收峰，雜交探針在 493nm、 625nm、 685nm 處有特異的吸收峰 ，檢定合格后入庫(kù)。 是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。 — 20℃保存。 ，應(yīng)提供與通行原材料比對(duì)研究結(jié)果及相關(guān)資料。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的注冊(cè)技術(shù)審查，其他類核酸檢測(cè)試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。蓋緊管蓋， 8000rpm 離心數(shù)秒后轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。若該診斷試劑沒(méi)有國(guó)家 — 9— 標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。對(duì)定量檢測(cè)試劑，同時(shí)應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要求進(jìn)行。對(duì)于定量檢測(cè)試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。 （ 3）其他材料 包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說(shuō)明書(shū)、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療 器械說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 3.化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測(cè)、溶液 pH 值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)龋鶓?yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原輔材 — 5— 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（ 2021 年版）》分析 純級(jí)別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18 26℃時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)≤ 15 分鐘， pH值應(yīng)為 。 （ 5）功能性實(shí)驗(yàn) 功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購(gòu)買，其供應(yīng)商要 求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。 — 2— 術(shù)人員、儀器設(shè) 備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。 第二篇：酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 1 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對(duì)酶聯(lián)免疫類檢測(cè)試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品 質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。如申報(bào)產(chǎn)品存在新的預(yù)期用途，應(yīng)有充分的臨床試驗(yàn)證據(jù)作為支持。 按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫(xiě)規(guī)范的要求。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見(jiàn)。樣本量估算過(guò)程中，評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（ P0）即 HBeAg、抗 HBe檢測(cè)試劑臨床陰 /陽(yáng)性符合率應(yīng)大于 95%。 3 家（含 3 家）符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展。 如申報(bào)產(chǎn)品性能優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，如產(chǎn)品靈敏度顯著高于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究和試驗(yàn)用體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結(jié)合，對(duì)產(chǎn)品的臨床性能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，從而支持預(yù)期用途所聲稱的內(nèi)容。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。研究所需的樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。用于該項(xiàng)研究的樣本可為人工構(gòu)建樣本，建議在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上明示對(duì)鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。 交叉反應(yīng)： 申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)可能出現(xiàn)在檢測(cè)樣本中的病原體進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣品，除乙型肝炎病毒相關(guān)標(biāo)志物外，評(píng)估 HBeAg檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床相關(guān)病原體抗原陽(yáng)性樣本； 評(píng)估抗 HBe檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用臨床相關(guān)病原體抗體陽(yáng)性樣本。 申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)企業(yè)最低檢測(cè)限參考品，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來(lái)源等。 ， HBeAg 檢測(cè)試劑一般采用雙抗體夾心法，抗 HBe檢測(cè)試劑一般為競(jìng)爭(zhēng)法。 本指導(dǎo)原則涉及的主要原材料常見(jiàn)的質(zhì)量控制指標(biāo)見(jiàn)表 1。針對(duì)主要原材料抗體，應(yīng)明確免疫刺激原的名稱及來(lái)源。 （二）主要原材料研究資料 品主要原材料是指影響檢測(cè)反應(yīng)的靈敏度與特異性的生物活性物質(zhì)，本指導(dǎo)原則涉及產(chǎn)品的主要原材料如下： 檢測(cè)試劑：包被用抗 HBe，標(biāo)記用抗 HBe，反應(yīng)體系中各種信號(hào)放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標(biāo)液 /對(duì)照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。 （二）本指導(dǎo)原則適用范圍 、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法等免疫學(xué)方法，對(duì)來(lái)源于血清或血漿等人體樣本中的 HBeAg、抗 HBe 進(jìn)行體外檢測(cè)，其臨床預(yù)期用途如下： 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷； 慢性乙型肝炎病毒感染者 HBeAg 陽(yáng)性與陰性人群區(qū)分； 慢性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。 通過(guò)免疫學(xué)方法檢 測(cè) HBV 標(biāo)志物是臨床最常用的 HBV 感染的病原學(xué)診斷方法。 本指導(dǎo)原則是針對(duì)乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 HBV 主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。 血清 HBeAg 與 HBV 復(fù)制及疾病傳染性相關(guān)， HBV 感染患者的血清中存在 HBeAg 是病毒活躍復(fù)制的指標(biāo)。 二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他等內(nèi)容。同時(shí)，抗原應(yīng)明確抗原名稱、生物學(xué)來(lái)源； 抗體明確抗體名稱、生物學(xué)來(lái)源、刺激免疫原名稱及其來(lái)源（天然或重組）、克隆號(hào)（如為單克隆抗體）等信息。 人源或其他生物源性原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)包含生物安全性指標(biāo)。企業(yè)參考品應(yīng)至少包括：陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品、精密度參考品。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。企業(yè)參考品的檢測(cè)應(yīng)符合參考品說(shuō)明書(shū)的要求。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求： 對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑本身的影響外，還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、實(shí)驗(yàn)地 點(diǎn)、檢測(cè)批次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。建議采用弱陽(yáng)性水平樣本對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測(cè)。 （五）陽(yáng)性判斷值確定資料此類產(chǎn)品臨界值通常采用定標(biāo)液 /對(duì)照品檢測(cè)結(jié)果經(jīng)特定的計(jì)算公式得出，樣本檢測(cè)結(jié)果通過(guò)與臨界值進(jìn)行比較以判斷檢測(cè)結(jié)果的陰陽(yáng)性。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測(cè)方法學(xué)、檢測(cè)性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性。 臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型應(yīng)為實(shí)際臨床檢測(cè)中常用的樣本類型。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。除此之外，還應(yīng)同時(shí)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)兩種分析方法的一致性。 （八）產(chǎn)品技術(shù)要求申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技 術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 9 號(hào)）的有關(guān)要求，編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。 不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測(cè)的第三類體外診斷試劑的注冊(cè)技術(shù)審查。 （二）原材料質(zhì)量控制 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。 （ 3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過(guò) Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測(cè)。 總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，蛋白含量≥ 32mg/ml。（ 4）標(biāo)記用酶 應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的 檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度 RZ 值（ OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于 。 一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白 G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人 IgG 酶結(jié)合物吸附，通過(guò)顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計(jì)算 CV 值。 酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過(guò)程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽(yáng)性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液 、終止液等，對(duì)定量檢測(cè)試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。 選擇經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包 被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于 2 8℃。若某類試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè) 參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。質(zhì)檢人員同時(shí)應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。 1）取 200μ l 樣品，加入 450μ lDNA提取液 I 和 4μ l 的內(nèi)標(biāo)溶液，用振蕩器劇烈混勻 15 秒，瞬時(shí)離心數(shù)秒。 本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳