【正文】 （分析靈敏度）申報(bào)產(chǎn)品最低檢測(cè)限的性能評(píng)估資料應(yīng)包含最低檢測(cè)限的確定及驗(yàn)證過程。對(duì)于此類產(chǎn)品，性能評(píng)估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。 。 ：申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最 佳組合。參考品設(shè)置建議參考國(guó)家參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗原濃度 /抗體滴度要求，陰性參考品則 主要考慮對(duì)產(chǎn)品分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。申請(qǐng)人需在申報(bào)資料中提供依據(jù)主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對(duì)原材料進(jìn)行質(zhì)檢的資料，如主要原材料為外購(gòu)，還需提供主要原材料供應(yīng)商的出廠檢測(cè)報(bào)告。 對(duì)于涉及標(biāo)記的主要原材料，如外購(gòu)方提供的為已標(biāo)記好的原材料，則原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除了對(duì)原材料本身的質(zhì)量控制外，還應(yīng)依據(jù)標(biāo)記物特性，針對(duì)標(biāo)記物制定相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 企業(yè)對(duì)主要原材料的質(zhì)量控制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對(duì)原材料進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格方可用于生產(chǎn)。 如主要原材料為申請(qǐng)人自制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)明確原材料的制備原理，描述制備過程。 研究資料。其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述申報(bào)產(chǎn)品臨床預(yù)期用途，包括適用人群、適應(yīng)癥及臨床使用環(huán)境； 產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品主要組成成分及檢測(cè)原理； 同類 產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從預(yù)期用途、產(chǎn)品性能等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。 抗 HBe 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷及慢 性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。在 HBsAg 陽性人群中， HBeAg 的消失以及抗 HBe 的出現(xiàn)是血清學(xué)轉(zhuǎn)換的標(biāo)志，表示病毒復(fù)制活躍程度的下降。 HBV 抗原與抗體的血清學(xué)標(biāo)志物與臨床關(guān)系復(fù)雜，必須對(duì)幾項(xiàng)標(biāo)志物綜合分析，方有助于臨床診療。 HBV 感染呈世界性流行，但不同地區(qū) HBV 感染的流行強(qiáng)度差異很大。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。乙型肝炎病毒 e抗原、 e抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（合集） 第一篇：乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 2 乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法 規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約 20 億人曾感染 HBV，其中 億人為慢性 HBV 感染者，每年約有 65萬人死于 HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌（ HCC）。 HBeAg 是從病毒 C 基因的第一個(gè)起始密碼子開始翻譯產(chǎn)生的包含PreC 及 C 序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白酶切除其 N 端 19 個(gè)氨基酸及 C 端 34 個(gè)氨基酸后成為可分泌的 e 抗原。但是，臨床上存在病毒復(fù)制活躍的患者血清中 HBeAg 為陰性的情況，如： HBV 基因組前 C 區(qū) 1896 位堿基的終止密碼變異，可導(dǎo)致HBeAg 陰性。目前該標(biāo)志物定量檢測(cè)的臨床意義尚不明確。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號(hào)）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號(hào)）的相關(guān)要求。主要原材料的篩選過程應(yīng)有科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、完整的實(shí)驗(yàn)過程、詳實(shí)的 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析過程，申請(qǐng)人應(yīng)能夠依據(jù)研究過程確定產(chǎn)品的主要原材料。如抗原為天然抗原，應(yīng)明確抗原制備所選病毒毒株、病毒的培養(yǎng)、抗原提取及純化、抗原鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)； 如為重組抗原，則應(yīng)寫明目的基因的選擇及來源、基因克隆過程（如特定脫氧核糖核酸（ DNA）分子的體外處理、重組連接、轉(zhuǎn)化和宿主細(xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)過程）、抗原表達(dá)及抗原純化鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)。申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)需求，制定科學(xué)、合理的主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，在制定標(biāo)準(zhǔn)過程中建議遵循以下幾點(diǎn)： 主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法及原材料應(yīng)達(dá)到的客觀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。 質(zhì)控品、定標(biāo)液 /對(duì)照品，主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除被分析物外，還應(yīng)包含基質(zhì)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，例如基質(zhì)中被分析物的濃度要求、陰陽性要求及生物安全性指標(biāo)（如適用），質(zhì)控品應(yīng)明確賦值方法。 表 1 抗原外觀、蛋白濃度、純度、分子量及功能性實(shí)驗(yàn)等 2 抗體外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)及功能性實(shí)驗(yàn)等 3 標(biāo)記用酶酶的純度值（ RZ 值）以及功能性實(shí)驗(yàn) 料選擇、制備、陰陽性確認(rèn)等詳細(xì)研究資料。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。如涉及，申請(qǐng)人應(yīng)提供酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。 （四）分析性能評(píng)估資料申請(qǐng)人應(yīng)提交產(chǎn)品所有性能評(píng)價(jià)的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性 能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求。 選取至少 3 份高濃度臨床樣本，采用臨床參考方法或國(guó)家 /國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)其檢測(cè)靶物質(zhì)濃度進(jìn)行確定，之后將臨床樣本做系列倍比稀釋，將檢測(cè)結(jié)果的陽性率在 90%～ 95%（ n≥ 20）的最大稀釋倍數(shù)作為試劑盒的最低檢測(cè)限。 ，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)作出合理要求。 用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本均應(yīng)至少包含 3 個(gè)水平：臨界陽性樣品、中及強(qiáng)陽性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆? 干擾物質(zhì)應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。 （ HOOK）效應(yīng)須采用多份高濃度樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù) 3～ 5 份，對(duì)鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。可采用申報(bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品同時(shí)檢測(cè)不少于五套經(jīng)充分確認(rèn)的乙型肝炎患者系列采集樣本，也可采用申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)不少于五套的商業(yè)化 的血清轉(zhuǎn)換盤。研究過程中應(yīng)選取適當(dāng)?shù)呐R床樣本，應(yīng)包括經(jīng)確認(rèn)的標(biāo)志物為陽性的樣本及經(jīng)確認(rèn)標(biāo)志物為陰性的樣 本。 （六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。 申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行性能分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。 。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)是指現(xiàn)有條件下臨床上可獲得的能夠用來確定受試者目標(biāo)狀態(tài)的最佳方法，通常來自臨床和實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)學(xué)實(shí)踐，包括患者跟蹤隨訪等。入組人群還應(yīng)包括急性及慢性病毒性乙型肝炎患者，同時(shí)根據(jù)臨床驗(yàn)證需要，入組病例應(yīng)包括不同疾病進(jìn)展期（如：免疫耐受期、免疫活動(dòng)期等）的患者。 建議臨床試驗(yàn)采用前瞻性收集的樣本進(jìn)行研究，同時(shí)，在嚴(yán)格控制偏倚的前提下，允許入組部分符合要求的既往留存樣本。如試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考方法進(jìn)行對(duì)比研究，其臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。 HBeAg、抗 HBe 檢測(cè)試劑為定性檢測(cè)產(chǎn)品，如臨床試驗(yàn)采用申報(bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對(duì)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。 臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征； 如臨床試驗(yàn)研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。 ，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。 作為臨床評(píng)價(jià)資料時(shí)，其境外臨床試驗(yàn)資料在滿足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求的基礎(chǔ)上，應(yīng)至少有一家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)在中國(guó)境內(nèi)，檢測(cè)病例數(shù)不低于總病例數(shù)的 1/3。申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測(cè)要求。 （十）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、樣本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。 診療規(guī)范、防治指南、專家共識(shí)，其臨床試驗(yàn)入組病例應(yīng)能夠覆蓋產(chǎn)品適用人群。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。 三、參考文獻(xiàn) 1.《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號(hào)）， 2021 年 7 月 .《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021 年第 16 號(hào)），2021 年 9 月 11 日 .3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》，（國(guó)家食品藥品監(jiān) 督管理總局公告 2021 年第 17 號(hào)）， 2021 年 9 月 11 日 .食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告（國(guó)家食品藥品監(jiān)管總局公告 2021年第 44號(hào)），2021年 9月 5日 .，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì) .慢性乙型肝炎防治指南（ 2021 年版） .實(shí)用肝 XVI 臟病雜志，第 19 卷第 3 期 2021 年 5 月： .病毒性肝炎臨床實(shí)踐，人民衛(wèi)生 出 版 社 ，icalPracticeGuidelinesonthemanagementofhepatitisBvirusinfect， 67： ， ， Diagnosis ，andTreatmentofChronicHepatitisB ： ， 2021 ， 67 （ 4 ）：“ e”antigenandantibodytoHepatitisB “ e ”、起草單位國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 三、基本要求 （一）基本原則 、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。 、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。使用前應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個(gè)電泳道加樣量為 5μ g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。建議作以下檢驗(yàn)： （ 1）牛血清或羊血清 外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。 （ 2）牛血清白蛋白： 外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。 BSA 的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA 含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。 生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。 （ 1）酶標(biāo)板①外觀 明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。 （ 2）液體試劑裝量瓶 包括陰陽性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。 企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng) 與診斷試劑的待測(cè)樣品的基質(zhì)基本一致，如待測(cè)樣品為血清 /血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清 /血漿。 各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗(yàn)并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗(yàn)合格后方能用于包被。 樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于 5%。 （ 2）半成品檢驗(yàn) 根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)。對(duì)于精密性，一般情況下CV 不得高于 15％（采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法的診斷試劑 CV 不得高于 20％）。 產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號(hào)、實(shí)際包裝量、抽樣申請(qǐng)單的要求進(jìn)行抽樣，同時(shí)填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。 （ 1）成品檢驗(yàn) 成品檢驗(yàn)時(shí)，一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品 （參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。 五、參考文獻(xiàn)： 1.《中國(guó)生物制品規(guī)程》（ 2021 年版），化學(xué)工業(yè)出版社 — 10— 第三篇：乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒 (PCR 熒光探針法 )