【正文】 。 特異性 與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的 O 型相應(yīng)抗原陽性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陽性。 靈敏度 與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于 1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結(jié)果。所有試驗方法應(yīng)符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。 產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細(xì)胞、血型抗體等。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。如紅細(xì)胞懸液制備要求及紅 細(xì)胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應(yīng)提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機(jī)型號固定轉(zhuǎn)數(shù)和時間的方式設(shè)置離心條件。 、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。 、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研 究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 ：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、 pH 值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究驗證。 2. 填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。 與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。 靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種血型抗體（ IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于 1+。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。 （二）主要原材料研究資料 主要原材料研究資料應(yīng)包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究資料。 二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格 式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）（以下簡稱“ 44 號公告”）的相關(guān)要求。 本指導(dǎo)原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。 一、范圍 抗人球蛋白檢測試劑可進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測等。 本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人 員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。核酸擴(kuò)增法檢測試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。穩(wěn)定性試驗可采用加速破壞試驗。（ 4）成品檢驗的內(nèi)容應(yīng)包括：陰 /陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。（ 3）以參考品 /對照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗。 2.成品質(zhì)量控制 （ 1）每一批核酸擴(kuò)增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。檢測結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 （ 2）以參考品 /對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。 工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。 （三 ）生產(chǎn)工藝 核酸擴(kuò)增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。 具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性。 （ UNG） 具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IUUNG — 25— 在 37℃處理 3分鐘后， 103拷貝以下含 U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。應(yīng)具有 DNA 聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性， 94℃保溫 1小時后仍保持 50%活性。避光、 20℃保存。應(yīng)以可見 — 紫外分光光度計進(jìn)行 200— 800nm 掃描，在 260nm 處應(yīng)有吸收峰。 凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到 HPLC 純。端 )進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在 339。通常采用 DNA 合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在 539。 20℃保存。 應(yīng)作 HPLC 分析和紫外光吸收分析。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（ PAGE）或 HPLC級，不含雜帶。 — 24— 由一定數(shù)量的 dNTP 構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（ DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。應(yīng)為高效液相色譜（ HPLC）純、 PCR 級，無 DNase 和 RNase污染。 核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（ DNase）和核糖核酸酶（ RNase）污染。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。 ，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。 2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和 — 23— 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。 三、基本要求 （一）基本原則 《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。 本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用 ，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。 五、參考文獻(xiàn)： 1.《中國生物制品規(guī)程》（ 2021年版），化學(xué)工業(yè)出版社 — 10— 第三篇：核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指 導(dǎo)原則 3 附件 3 核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對核酸擴(kuò)增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。 （ 2）穩(wěn)定性試驗 在批放行前，每一批試劑應(yīng)完 成 37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 （ 1）成品檢驗 成品檢驗時，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。質(zhì)檢人員同時應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。 產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進(jìn)行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。 企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。對于精密性，一般情況下CV 不得高于 15％（采用競爭抑制法的診斷試劑 CV 不得高于 20％）。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 （ 2）半成品檢驗 根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。 樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于 5%。 選擇經(jīng)檢驗合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包 被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于 2 8℃。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗合格后方能用于包被。 應(yīng)對配制過程及配制的液體進(jìn)行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的 — 7— 功能性實驗及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、 pH 值等；酶作用底物應(yīng)測定在無相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對其終止酶促反應(yīng)的能力進(jìn)行測定。 各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。 酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液 、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。 企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清 /血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清 /血漿。 — 6— 企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰 /陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（ hook效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。 （ 2）液體試劑裝量瓶 包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。 一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白 G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人 IgG 酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計算 CV 值。 （ 1）酶標(biāo)板①外觀 明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。 主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更。 生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。（ 4）標(biāo)記用酶 應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行檢驗，酶的純度 RZ 值（ OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于 。 BSA 的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA 含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。 總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95％。 （ 2）牛血清白蛋白： 外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。 總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥ 32mg/ml。建議作以下檢驗： （ 1）牛血清或羊血清 外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。 生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。效價應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 （ 3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個電泳道加樣量為 5μ g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。 主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（ 1）外觀 肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生 — 3— 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 （二）原材料質(zhì)量控制 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。 、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工 藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。 三、基本要求 （一）基本原則 、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查。應(yīng)在