【正文】 若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實驗室完成。 （三）試劑盒各組分的生產(chǎn) 酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。如該產(chǎn)品具有國家標準品或參考品，應(yīng)使用國家標準品（參考品）進行標化；若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安 全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 （ 3）其他材料 包括試劑瓶標簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密 封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標準。 CV 值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標準，一般批內(nèi) CV≤ 5％，批間 CV≤ 10％。②吸附能力和精密性采用合適的方法進行檢驗。化學(xué)原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。 3.化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標準，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液 pH 值 、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合《中國生物制品主要原輔材 — 5— 料質(zhì)控標準（ 2021 年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。（ 3）酪蛋白： 應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。 總蛋白中的牛血清白蛋白（ BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為≥ 95%。 溶 解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18 26℃時，溶解時間應(yīng)≤ 15 分鐘， pH值應(yīng)為 。 球蛋白含量：取待測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于 %氯化鈉溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。無菌試驗：將血清直接 37℃放臵 7 天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或 — 4— 沉淀。這些生物原料的質(zhì)量標準應(yīng)符合 2021 年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準》規(guī)定的標準要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 （ 5）功能性實驗 功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。 （ 4）效價 效價的測定一般根據(jù)蛋白含 量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進行。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標準，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。 （ 2）純度和分子量 主要經(jīng) SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進行變更申請。這類原料可用于包被酶標反應(yīng)板、標記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準品（標準品）等。 ：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。 、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條 件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 — 2— 術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進行適 時的調(diào)整。 本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。 第三篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 1 酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。 四、參考文獻 .《臨床遺傳代謝病》，人民衛(wèi)生出版社，.《中國藥典》（ 2021 年版），中國醫(yī)藥科技出版社 .3.《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范》（ 2021 年版），（衛(wèi)婦 社發(fā)〔 2021〕 96 號） ,2021 年12 月 1 日 .4.《新生兒疾病篩查管理辦法》（中華人民共和國衛(wèi)生部令第 64 號 ） ， 2021 年 3 月 5日 .,FreeCarnitine,andAcylcarnitinesUsingTandemMassSpectrometry ，GuidanceforIndustryandFDAStaff ， FDA ，； ,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute。 ，將添加了其他物質(zhì)（例如待測物、干擾物質(zhì)等）的人全血（或模擬血液基質(zhì)）滴加至濾紙上，再經(jīng)過打孔處理的樣本。 相關(guān)操作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)的培訓(xùn)，并嚴格按照說明書的方法來進行試驗。 12.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容： 如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。各項評估應(yīng)包括評估方法、數(shù)據(jù)和結(jié)果。 。 。 樣本采集、運輸及處理不當、未按說明書操作等均有可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果，例如：血液未均勻浸透血斑區(qū)域、濾紙干血片打孔時打得太靠近血斑的邊緣、樣品收集或樣品干燥有問題、由于樣品受熱受潮，不能洗脫血斑、血斑濾紙受排泄物污染等等。 本試劑盒適用于全血干血斑樣本檢測，不適用于其它樣本檢測。 10.【檢驗方法的局限性】 本試劑盒的檢測結(jié)果僅能初步提示某種遺傳代謝病，其結(jié)果僅供臨床參考，不能作為診斷。 9.【檢驗結(jié)果的解釋】應(yīng)對不同的檢驗結(jié)果進行解釋，并明確后續(xù)處理方法。 說明檢測時應(yīng)特別注意的事項，如對精密度的控制措施、溶液的保存條件、其他影響檢測的因素等。 上機 檢測：儀器準備、設(shè)置、儀器使用相關(guān)參數(shù)及結(jié)果處理。 內(nèi)標準品溶液、各級工作液的配制方式。 上述內(nèi)容均需在穩(wěn)定性研究資料中詳述并進行性能評估驗證。明確采樣前處理、消毒、采樣量、保存條件及期限（短期、長期）、運送條件、凍融次數(shù)的限制等。 5.【適用儀器】明確所有適用儀器的具體型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。 試劑盒中不包含但該 項檢測必需的組分，說明書中應(yīng)列出相關(guān)試劑 /耗材的名稱、生產(chǎn)企業(yè)、貨號、注冊證號 /備案憑證編號（如有）及其他相關(guān)信息，質(zhì)控品的濾紙應(yīng)明確型號。 2.【檢驗原理】詳細說明該產(chǎn)品檢測各類分析物的前處理方式（衍生 /非衍生）、檢測原理及掃描模式（必要時可用圖示說明）。建議聲稱的遺傳代謝病應(yīng)盡量覆蓋我國相對常見的病種，可參考表 1 中所列的疾病。 介紹臨床適應(yīng)癥及背景，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。 1.【預(yù)期用途】 第一自然段：描述預(yù)期用途，包括適用人群，樣本類型，被測物等。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申 報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，若某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。應(yīng)提供連續(xù) 3 個生產(chǎn)批次樣品的檢驗合格報告。附錄中應(yīng)將內(nèi)標準品、標準品、質(zhì)控品的設(shè)計及來源，參考品設(shè) 置，生產(chǎn)工藝流程及質(zhì)控關(guān)鍵點等重點內(nèi)容予以明確。申請人應(yīng)當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下 ,根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 9 號）的有關(guān)要求編寫。具 體情況可參見《用于罕見病防治醫(yī)療器械注冊審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。 ，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。 應(yīng)明確樣本的納入與排除情況。亦可同時對二者的陰 /陽性符合率和總符合率進行分析，對結(jié)果進行χ 2 檢驗或kappa檢驗以檢驗其定性結(jié)果的一致性。同時，應(yīng)根據(jù)臨床診斷結(jié)果，統(tǒng)計并明確每種疾病與待測分析物指標之間的對應(yīng)關(guān)系。 統(tǒng)計學(xué)分析對臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法。 具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、結(jié)果不一致樣本的校驗； 陽性病例后續(xù)操作方法、病例脫落情況，以及是否符合臨床試驗方案等。 各試驗機構(gòu)的病例數(shù)、陰性 /陽性檢出例數(shù)、檢出的遺傳代謝病情況等。 、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。 /排除的情況、盲法操作流程等。 點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。 在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法，以保證試驗結(jié)果的客觀性，并在臨床試驗方案中明確。 試驗方案中應(yīng)確定合理、嚴格的病例納入 /排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在整個臨床試驗過程中均應(yīng)遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。在產(chǎn)品說明書中應(yīng)根據(jù)臨床結(jié)果對檢出的遺傳代謝病和分析物指標異常情況進行描述，其中采用回顧性病例進行的研究應(yīng)另行說明。同時，臨床試驗檢測結(jié)果應(yīng)盡量覆蓋所有待測分析物指標異常情況。 根據(jù)臨床發(fā)病率、臨床診治情況及其他因素綜合考慮，對于我國相對常見的遺傳代謝病如高苯丙氨酸血癥（ HPA）、甲基丙二酸血癥（ MMA）、原發(fā)性肉堿缺乏癥（ PCD）等 ,應(yīng)通過前瞻性臨床試驗檢出真陽性病例； 其他發(fā)病率相對更低 的疾病也應(yīng)盡可能在前瞻性臨床試驗中檢出所聲稱疾病病例。 應(yīng)根據(jù)疾病發(fā)病率和性能要求等估算合理的樣本量，并在臨床試驗方案中明確樣本量確定的依據(jù)。所有 樣本均應(yīng)可以溯源。試驗應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。操作人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)的培訓(xùn)，并能熟練操作實驗。臨床試驗機構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報產(chǎn)品的特點和預(yù)期用途。 申請人還應(yīng)同時選擇已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，與考核試劑進行一定例數(shù)的比較研究試驗，以評價考核試劑的臨床準確性。 （七）臨床評價資料 前瞻性的臨床試驗方式為主，以試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與臨床診斷結(jié)果進行比較研究的方法，評價考核試劑的臨床診斷性能相關(guān)指標，從而證明其臨床性能滿足預(yù)期用途的要求。由于某些化合物在干血斑中不穩(wěn)定，應(yīng)對這些分析物的情況進行研究，提供其在干血斑中的儲存有效期數(shù)據(jù)。主要包括冷藏和冷凍條件下的儲存條件研究、有效期驗證、運輸穩(wěn)定性驗證以及干血斑萃取后儲存條件的驗證等。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。主要涉及兩部分內(nèi)容，申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。如無灰區(qū)設(shè)置，也應(yīng)提交相關(guān)的 依據(jù)。 應(yīng)明確樣本入組標準（例如體重、年齡等），并說明試驗方案及其合理性。根據(jù)該類試劑的臨床用途，應(yīng)盡量降低產(chǎn)品的假陰性率，并將假陽性率控制在一定范圍。 （五）陽性判斷值 /參 考區(qū)間確定資料對于此類試劑，應(yīng)對每種待測分析物設(shè)定陽性判斷值或參考區(qū)間。 以上性能研究原則上應(yīng)包括所有的待測分析物，并應(yīng)盡可能使用全血干血斑進行評估。若不同的機型會導(dǎo)致不同的研究結(jié)果，也應(yīng)分別進行詳述。例如，設(shè)計高低兩個濃度樣本交叉連續(xù)進樣，并重復(fù)多次，較低濃度樣本的檢測結(jié)果應(yīng)符合其準確性的要求。應(yīng)至少對上述幾種交叉反應(yīng)物質(zhì)進行研究，并結(jié)合申報試劑的臨床適應(yīng)癥對其他可能存在交叉反應(yīng)的物質(zhì)進行評估。應(yīng)研究血液中可能存在的交叉反應(yīng)物質(zhì)對待測分析物造成的干擾，對每一對交叉反應(yīng)物質(zhì) /分析物進行統(tǒng)計學(xué) 和臨床意義上的分析，評估可能存在的風險。建議至少在內(nèi)源性水平附近濃度對每種干擾物質(zhì)的干擾影響進行評價。其他還可能包 括潛在患者（如母親）引入的化合物、樣本采集過程中加入的化合物、血液中存在的其他化合物等，例如常用藥物、麻醉劑、消毒劑、服用的營養(yǎng)物質(zhì)、機體其他代謝產(chǎn)物等。特異性研究的樣本可為全血干血斑或模擬添加被研究物的模擬干血斑。 精密度的評價應(yīng)選擇多個濃度水平進行，一般來說應(yīng)包含正常內(nèi)源性水平、醫(yī)學(xué)決定水平、異常值（異常高值 /異常低值）水平等，各待測分析物可根據(jù)臨床實際情況和指標設(shè)置的臨床意義，選擇不同的濃度水平進行研究，并提交濃度選擇的依據(jù)。 例如：為期至少 XX 天的連續(xù)檢測，每天至少由 X