【正文】 酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn) 過(guò)程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽(yáng)性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對(duì)定量檢測(cè)試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。 — 6— 企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰 /陽(yáng)性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（ hook 效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對(duì)于定量檢測(cè)試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。 一般用一定 濃度的正常人免疫球蛋白 G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人 IgG 酶結(jié)合物吸附，通過(guò)顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計(jì)算 CV 值。 主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不得隨意發(fā)生變更。（ 4）標(biāo)記用酶 應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度 RZ 值（ OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于 。 總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95％。 總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，蛋白含量≥ 32mg/ml。 生物輔料一般指在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。 （ 3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過(guò) Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測(cè)。 主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：（ 1）外觀 肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生 — 3— 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。 （二）原材料質(zhì)量控制 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。企業(yè)應(yīng)對(duì)試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測(cè)的第三類體外診斷試劑的注冊(cè)技術(shù)審查。 本指導(dǎo)原則系對(duì)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。 。 檢驗(yàn)過(guò)程有關(guān)的有機(jī)溶劑的安全性要求，例如操作和廢棄的注意事項(xiàng)。 11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】按照分析 性能評(píng)估資料內(nèi)容描述以下性能指標(biāo)：檢測(cè)限、企業(yè)內(nèi)部參考品符合率（如適用）、準(zhǔn)確性、線性、特異性等。應(yīng)描述在樣本采集，保存、運(yùn)輸中需遵循的原則及注意事項(xiàng)。對(duì)患者的臨床診斷應(yīng)采用相應(yīng)方法并結(jié)合其癥狀 /體征、病史等情況綜合進(jìn)行。 8.【陽(yáng)性判斷值 /參考區(qū)間】明確設(shè)定及驗(yàn)證陽(yáng)性判斷值 /參考區(qū)間所使用的樣本例數(shù)及類型、試驗(yàn)方法、統(tǒng)計(jì)方法及計(jì)算結(jié)果。內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液和工作液的短期和長(zhǎng)期保存方式、凍融次數(shù)等。另外應(yīng)說(shuō)明采樣過(guò)程中使用的濾紙型號(hào)應(yīng)與質(zhì)控品的濾紙型號(hào)一致。 4.【儲(chǔ)存條件及有效期】按照穩(wěn)定性研究資料，說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性，其他穩(wěn)定性也應(yīng)視情況明確，如開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及有效期。 明確檢測(cè)結(jié)果僅能初步提示某種遺傳代謝病，其最終結(jié)果要由相應(yīng)方法進(jìn)行確認(rèn)。 舉例：該產(chǎn)品用于定量檢測(cè) XXX（適用人群）全血干血斑中的氨基酸、游離肉堿和酰基肉堿、琥珀酰丙酮的濃度。 （十）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 17 號(hào)）的要求，進(jìn)口產(chǎn)品的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。 第三類產(chǎn)品技術(shù)要求中還應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。 ，技術(shù)審評(píng)中可根據(jù)產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)受益、產(chǎn)品預(yù)期臨床應(yīng)用情況、上市前研究等因素，附帶條件批準(zhǔn)上市。 應(yīng)針對(duì)每一種待測(cè)分析物（或相關(guān)分析物間的比值）和每種疾病的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單獨(dú)統(tǒng)計(jì)分析，以列表的形式進(jìn)行總結(jié)。應(yīng)對(duì)考核試劑與臨床診斷結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，建議分別對(duì)每種待測(cè)分析物和每種疾病的臨床性能相關(guān)指標(biāo)（例如臨床靈敏度和臨床特異度、假陽(yáng)性率和假陰性率、陰性似 然比和陽(yáng)性似然比、陰性預(yù)測(cè)值和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值等）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 質(zhì) 量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況。 ，樣本的收集、處理及保存等。 方案中應(yīng)明確，當(dāng)對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)分析原因并給出解釋，必要時(shí)進(jìn)行第三方復(fù)核。 臨床試驗(yàn)應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。 若臨床試驗(yàn)中使用部分已確診（回顧性）的陽(yáng)性病例進(jìn)行研究，應(yīng)提供充分的理由，并在試驗(yàn)方案和報(bào)告中對(duì)病例選擇的方式和原因進(jìn)行明確的說(shuō)明。在與同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)時(shí)，試驗(yàn)樣本應(yīng)盡量覆蓋各分析物的線性范圍，樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。 ，樣本的采集、處理和保存應(yīng)符合產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)及其他相關(guān)指導(dǎo)文件的要求。建議選擇不同地區(qū)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)，且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有相關(guān)檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)。臨床診斷結(jié)果中陽(yáng)性病例的確認(rèn)應(yīng)有充分的依據(jù)，包括采用現(xiàn)有條件下公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，疾病診療指南中明確的疾病診斷方法，行業(yè)內(nèi)的專家共識(shí)等。可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行檢測(cè)，從而確認(rèn)樣本的穩(wěn)定性。 （有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究。 另外，如存在灰區(qū)，應(yīng)提交灰區(qū)設(shè)定的依據(jù)，并在說(shuō)明書(shū)【陽(yáng)性判斷值】和【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】項(xiàng)進(jìn)行解釋說(shuō)明。應(yīng)盡量獲取足夠大的樣本量，設(shè)定合理的臨床靈敏度和臨床特異度預(yù)期值進(jìn)行陽(yáng)性判斷值 /參考區(qū)間的研究。 進(jìn)行性能研究所使用的樣本形式應(yīng)為干血斑，且應(yīng)從萃取溶解開(kāi)始進(jìn)行分析性能的評(píng)價(jià)。 ，還應(yīng)考慮進(jìn)樣器等分析系統(tǒng)的殘留對(duì)結(jié)果產(chǎn)生的影響。 交叉反應(yīng)交叉反應(yīng)物質(zhì)一般是指在血液中存在的，在待測(cè)分析物掃描模式下，與待測(cè)分析物有相同質(zhì)荷比的其他化合物。 干擾物質(zhì)干擾物質(zhì)應(yīng)至少包括血紅蛋白、脂類、膽紅素等。申請(qǐng)人還 應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。 精密度精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保 證研究的科學(xué)合理性，具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)指南或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行?；厥諏?shí)驗(yàn)方法一般為：向全血中添加不同濃度待測(cè)分析物，制備成干血斑，檢測(cè)后計(jì)算回收率，回收率的計(jì)算方法為在含有已知“理論”分析物含量的干血斑提取物中實(shí)際測(cè)得的該分析物含量，以百分比表示。分析物濃度水平覆蓋范圍應(yīng)具臨床意義，至少包含典型的內(nèi)源水平、醫(yī)學(xué)決定水平等。 研究過(guò)程中應(yīng)對(duì)各物質(zhì)濃度進(jìn)行精確的確認(rèn)，每一濃度樣本應(yīng)平行檢測(cè)多次。建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究： ，因通常情況下不易獲得低于內(nèi)源水平的樣本，申請(qǐng)人可自行設(shè)計(jì)合理的模擬方法進(jìn)行研究。 ，如萃取方法、衍生條件、進(jìn)樣條件、質(zhì)譜條件等。主要包括以下內(nèi)容： ，可以圖表方式表示。 線性參考品應(yīng)建立能夠覆蓋所有待測(cè)分析物的線性參考品。檢測(cè)限參考品應(yīng)盡量使用全血干血斑，考 慮到檢測(cè)限濃度的樣本難以獲得的情況，可采用內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品替代待測(cè)分析物的方式，來(lái)模擬制備檢測(cè)限參考品，例如將檢測(cè)限水平的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品加入人全血基質(zhì)中制備模擬干血斑等。 ：應(yīng)提供企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證資料。質(zhì)控品使用的濾紙應(yīng)明確型號(hào)。每種待測(cè)分析物應(yīng)對(duì)應(yīng)其標(biāo)記后的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品，如有特殊情況無(wú)法對(duì)應(yīng)其自身標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)說(shuō)明理由，并提交 使用替代內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品是否會(huì)對(duì)產(chǎn)品性能產(chǎn)生影響的評(píng)價(jià)資料。 、種類、相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、經(jīng)臨床驗(yàn)證的遺傳代謝病與分析物間的對(duì)應(yīng)關(guān)系等。 二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括臨床適應(yīng)癥背景情況、產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和 評(píng)價(jià)以及其他內(nèi)容。 本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。中性丟失掃描通常用于氨基酸的分析檢測(cè)，以恒定的質(zhì)量 差異，在一定質(zhì)量范圍內(nèi)同時(shí)測(cè)定第一級(jí)、第二級(jí)質(zhì)量分析器中所有的前體離子和產(chǎn)物離子，檢測(cè)能產(chǎn)生特定中性碎片丟失的前體離子。其原理是使用含有內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的溶液對(duì)干血斑進(jìn)行萃取并采用串聯(lián)質(zhì)譜分析，每種待測(cè)分析物對(duì)于內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)程度與它的濃度 成比例，根據(jù)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度即可計(jì)算分析物的濃度。其臨床表現(xiàn)主要包括神經(jīng)系統(tǒng)損害、代謝紊亂、相關(guān)器官功能異常、生長(zhǎng)遲緩、皮膚及毛發(fā)異常、特殊氣味等。 一、適用范圍本指導(dǎo)原則提及的氨基酸、肉堿（包括游離肉堿和?；鈮A）和琥珀酰丙酮分別是指針對(duì)遺傳代謝病的疾病標(biāo)記物。 本指導(dǎo)原則是針對(duì)該類試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 。 檢驗(yàn)過(guò)程有關(guān)的有機(jī)溶劑的安全性要求，例如操作和廢棄的注意事項(xiàng)。 11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】按照分析性能評(píng)估資料內(nèi)容描述以下性能指標(biāo)：檢測(cè)限、企業(yè)內(nèi)部參考品符合率（如適用）、準(zhǔn)確性、線性、特異性等。應(yīng)描述在樣本采集，保存、運(yùn)輸中需遵循的原則及注意事項(xiàng)。對(duì)患者的臨床診斷應(yīng)采用相應(yīng)方法并結(jié)合其癥狀 /體征、病史等情況綜合進(jìn)行。 8.【陽(yáng)性判斷值 /參考區(qū)間】明確設(shè)定及驗(yàn)證陽(yáng)性判斷值 /參考區(qū)間所使用的樣本例數(shù)及類型、試驗(yàn)方法、統(tǒng)計(jì)方法及計(jì)算結(jié)果。內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液和工作液的短期和長(zhǎng)期保存方式、凍融次數(shù)等。另外應(yīng)說(shuō)明采樣過(guò)程中使用的濾紙型號(hào)應(yīng)與質(zhì)控品的濾紙型號(hào)一致。 4.【儲(chǔ)存條件及有效期】按照穩(wěn)定性研究資料，說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性，其他穩(wěn)定性也應(yīng)視情況明確，如開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及有效期。 明確檢測(cè)結(jié)果僅能初步提示某種遺傳代謝病，其最終結(jié)果要由相應(yīng)方法進(jìn)行確認(rèn)。 舉例：該產(chǎn)品用于定量檢測(cè) XXX（適用人群）全血干血斑中的氨基酸、游離肉堿和酰基肉堿、琥珀酰丙酮的濃度。 （十）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 17 號(hào)）的要求，進(jìn)口產(chǎn)品的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。 第三類產(chǎn)品技術(shù)要求中還應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。 ，技術(shù)審評(píng)中可根據(jù)產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)受益、產(chǎn)品預(yù)期臨床應(yīng)用情況、上市前研究等因素 ，附帶條件批準(zhǔn)上市。 應(yīng)針對(duì)每一種待測(cè)分析物（或相關(guān)分析物間的比值）和每種疾病的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單獨(dú)統(tǒng)計(jì)分析，以列表的形式進(jìn)行總結(jié)。應(yīng)對(duì)考核試劑與臨床診斷結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，建議 分別對(duì)每種待測(cè)分析物和每種疾病的臨床性能相關(guān)指標(biāo)（例如臨床靈敏度和臨床特異度、假陽(yáng)性率和假陰性率、陰性似然比和陽(yáng)性似然比、陰性預(yù)測(cè)值和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值等）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況。 ，樣本的收集、處理及保存等。 方案中應(yīng)明確，當(dāng)對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)分析原因并給出解釋，必要時(shí)進(jìn)行第三方復(fù)核。 臨床試驗(yàn)應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。 若臨床試驗(yàn)中使用部分已確診（回顧性）的陽(yáng)性病例進(jìn)行研究，應(yīng)提供充分的理由，并在試驗(yàn)方案和報(bào)告中對(duì)病例選擇的方式和原因進(jìn)行明確的說(shuō)明。在與同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)時(shí)，試驗(yàn)樣本應(yīng)盡量覆蓋各分析物的線性范圍，樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。 ，樣本的采集、處理和保存應(yīng)符合產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)及其他相關(guān)指導(dǎo)文件的要求。建議選擇不同地區(qū)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)，且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有相關(guān)檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)。臨床診斷結(jié)果中陽(yáng)性病例的確認(rèn)應(yīng)有充分的依據(jù)，包括采用現(xiàn)有條件下公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，疾病診療指南中明確的疾病診斷方法，行業(yè)內(nèi)的專家共識(shí)等。可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行檢測(cè)，從而確認(rèn)樣本的穩(wěn)定性。 （有效期）、運(yùn)輸 穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究。 另外，如存在灰區(qū)，應(yīng)提交灰區(qū)設(shè)定的依據(jù)，并在說(shuō)明書(shū)【陽(yáng)性判斷值】和【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】項(xiàng)進(jìn)行解釋說(shuō)明。應(yīng)盡量獲取足夠大的樣本量，設(shè)定合理的臨床靈敏度和臨床特異度預(yù)期值進(jìn)行陽(yáng)性判斷值 /參考區(qū)間的研究。 進(jìn)行性能研究所使用的樣本形式應(yīng)為干血斑，且應(yīng)從萃取溶解開(kāi)始進(jìn)行分析性能的評(píng)價(jià)。 ，還應(yīng)考慮進(jìn)樣器等分析系統(tǒng)的殘留對(duì)結(jié)果產(chǎn)生的影響。 交叉反應(yīng)交叉反應(yīng)物質(zhì)一般是指在血液中存在的，在待測(cè)分析物掃描模式下，與待測(cè)分析物