抗原或抗體檢測(參考版)
2025-07-10 16:33本頁面
【正文】 表 免疫學(xué)測定方法敏感性比較測定方法敏感性（每升）單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)＜1～2mg雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)＜1mg火箭電泳＜對流電泳＜免疫電泳＜5～10mg凝集試驗(yàn)1μg被動血凝試驗(yàn)1μg血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)放射免疫分析法＜1pg酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)＜1ng定量免疫熒光分析＜1pg。因此大提高檢測的敏感度。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。一個(gè)親合素（avidin）分子可以結(jié)合4個(gè)生物素分子（biotin）。（3）BASELISA：近年來對酶免設(shè)分析法的改進(jìn)是使用生物素親合素過氧化物酶復(fù)合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高檢測的敏感度。間接法（indirecr ELISA）常用于檢查特異抗體?？捎瞄g接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。圖8 生物素－酶標(biāo)親合素系統(tǒng)反應(yīng)示意圖（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）:是與上述固相RIA相似的原理，將抗原或抗體吸附在固相載體表面。前者測定細(xì)胞表面抗原或組織內(nèi)的抗原；后者主要測定可溶性抗原或抗體。這些酶具有一定的穩(wěn)定性，制成酶標(biāo)抗體可保存較長時(shí)間。常用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶（alkaline phosphatase）等。3．酶聯(lián)免疫分析法 酶聯(lián)免疫分析法（enzyme immunoassay,EIA）是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的免疫檢測方法。測定固相載體的放射活性，常用的固相載體有溴化氰（CNBr）海豹化的紙片或聚苯乙烯小管（圖7）。預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)的非標(biāo)記抗原作成標(biāo)準(zhǔn)曲線后，即可查出待檢標(biāo)本中胰島素的含量（圖6）。非標(biāo)記的抗原越多，標(biāo)記抗原與抗體形成的復(fù)合物越少。放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種：（1）液相法：將待檢標(biāo)本（例如含胰島素抗原）與定時(shí)的同位素標(biāo)記的胰島素（抗原）和定時(shí)的抗胰島素抗體混合，經(jīng)一定作用時(shí)間后，分離收集抗原抗體復(fù)合物及游離的抗原，測定這兩部分的放射活性，計(jì)算結(jié)合率。2．放射免疫分析法 放射免疫分析法（radioimmunoassay RIA）應(yīng)用競爭性結(jié)合的原理，應(yīng)作放射性同素標(biāo)記抗原（或抗體）與相應(yīng)抗體（或抗原）結(jié)合，通過測定抗原抗體結(jié)合物的放射活性判斷結(jié)果，本方法可進(jìn)行超微量分析，敏感性高，可用于測定抗原、抗體、抗原抗體復(fù)合物。對淋巴細(xì)胞亞類鑒定起著巨大推動作用。針對細(xì)胞表面不同抗原，可以使用兩種不同的熒光染料，如用異硫氰熒光素（FITC）發(fā)黃綠熒光，用羅丹明（TMRITC）發(fā)紅色熒光。除微生物學(xué)方面的應(yīng)用外，還可利用單克隆抗體鑒定淋巴細(xì)胞的亞類。間接法比直接法敏感性高，如果用于檢查抗原的第一抗體是人或動物的只需制備一種抗人或動物的免疫球蛋白熒光抗體（圖5）。（2）間接熒光法：可克服直接法需制備多種熒光抗體的復(fù)雜操作。（1）直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細(xì)胞懸液，細(xì)胞涂片或組織切片上進(jìn)行染色，經(jīng)抗原抗體反應(yīng)后，洗去未結(jié)合的熒光抗體，將待檢標(biāo)本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應(yīng)抗原存在，此法可用于病毒感染細(xì)胞、帶某種特異抗原的細(xì)胞（如T細(xì)胞和B細(xì)胞）或病原菌的檢查，也可用于組織中沉著的免疫復(fù)合物的檢查。本方法可用于定性、定量或定位檢測。四、用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原、抗體反應(yīng)用熒光素、同位素或酶標(biāo)記抗體或抗原，用于抗原或抗體檢測是目前廣泛應(yīng)用的敏感、可靠的方法。如不出現(xiàn)溶血，表明檢測系統(tǒng)中有抗原抗體復(fù)合物并結(jié)合補(bǔ)體，則指示系統(tǒng)無多余的補(bǔ)體作用而沒有溶血現(xiàn)象，即為陽性。另加入作為補(bǔ)體的新鮮
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