抗原或抗體檢測(文件)
【正文】 直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細胞懸液，細胞涂片或組織切片上進行染色，經(jīng)抗原抗體反應后，洗去未結合的熒光抗體，將待檢標本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應抗原存在，此法可用于病毒感染細胞、帶某種特異抗原的細胞（如T細胞和B細胞）或病原菌的檢查，也可用于組織中沉著的免疫復合物的檢查。間接法比直接法敏感性高，如果用于檢查抗原的第一抗體是人或動物的只需制備一種抗人或動物的免疫球蛋白熒光抗體（圖5）。針對細胞表面不同抗原，可以使用兩種不同的熒光染料，如用異硫氰熒光素（FITC）發(fā)黃綠熒光，用羅丹明（TMRITC）發(fā)紅色熒光。2．放射免疫分析法 放射免疫分析法（radioimmunoassay RIA）應用競爭性結合的原理，應作放射性同素標記抗原（或抗體）與相應抗體（或抗原）結合，通過測定抗原抗體結合物的放射活性判斷結果，本方法可進行超微量分析，敏感性高，可用于測定抗原、抗體、抗原抗體復合物。非標記的抗原越多，標記抗原與抗體形成的復合物越少。測定固相載體的放射活性，常用的固相載體有溴化氰（CNBr）海豹化的紙片或聚苯乙烯小管（圖7）。常用于標記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶（alkaline phosphatase）等。前者測定細胞表面抗原或組織內(nèi)的抗原；后者主要測定可溶性抗原或抗體?？捎瞄g接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。（3）BASELISA：近年來對酶免設分析法的改進是使用生物素親合素過氧化物酶復合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進一步提高檢測的敏感度。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結合，而不影響后者的生物活性。表 免疫學測定方法敏感性比較測定方法敏感性（每升）單向免疫擴散試驗＜1～2mg雙向免疫擴散試驗＜1mg火箭電泳＜對流電泳＜免疫電泳＜5～10mg凝集試驗1μg被動血凝試驗1μg血凝抑制試驗補體結合試驗放射免疫分析法＜1pg酶聯(lián)免疫吸附試驗＜1ng定量免疫熒光分析＜1pg。因此大提高檢測的敏感度。一個親合素（avidin）分子可以結合4個生物素分子（biotin）。間接法（indirecr ELISA）常用于檢查特異抗體。圖8 生物素－酶標親合素系統(tǒng)反應示意圖（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）:是與上述固相RIA相似的原理，將抗原或抗體吸附在固相載體表面。這些酶具有一定的穩(wěn)定性，制成酶標抗體可保存較長時間。3．酶聯(lián)免疫分析法 酶聯(lián)免疫分析法（enzyme immunoassay,EIA）是當前應用最廣泛的免疫檢測方法。預先用標準的非標記抗原作成標準曲線后，即可查出待檢標本中胰島素的含量（圖6）。放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種：（1）液相法：將待檢標本（例如含胰島素抗原）與定時的同位素標記的胰島素（抗原）和定時的抗胰島素抗體混合，經(jīng)一定作用時間后，分離收集抗原抗體復合物及游離的抗原，測定這兩部分的放射活性，計算結合率。對淋巴細胞亞類鑒定起著巨大推動作用。除微生物學方面的應用外，還可利用單克隆抗體鑒定淋巴細胞的亞類。（2）間接熒光法：可克服直接法需制備多種熒光抗體的復雜操作。本方法可用于定性、定量或定位檢測。如不出現(xiàn)溶血，表明檢測系統(tǒng)中有抗原抗體復合物并結合補體，則指示系統(tǒng)無多余的補體作用而沒有溶血現(xiàn)象，即為陽性。本法包括兩個抗原抗體系統(tǒng)。2．補體介導的細胞毒試驗各種有核細胞與針對其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復合物能活化反應中的補體，引起細胞膜穿孔，在一定時間內(nèi)，細胞
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