抗原或抗體檢測(cè)(文件)
【正文】 直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細(xì)胞懸液，細(xì)胞涂片或組織切片上進(jìn)行染色，經(jīng)抗原抗體反應(yīng)后，洗去未結(jié)合的熒光抗體，將待檢標(biāo)本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應(yīng)抗原存在，此法可用于病毒感染細(xì)胞、帶某種特異抗原的細(xì)胞（如T細(xì)胞和B細(xì)胞）或病原菌的檢查，也可用于組織中沉著的免疫復(fù)合物的檢查。間接法比直接法敏感性高，如果用于檢查抗原的第一抗體是人或動(dòng)物的只需制備一種抗人或動(dòng)物的免疫球蛋白熒光抗體（圖5）。針對(duì)細(xì)胞表面不同抗原，可以使用兩種不同的熒光染料，如用異硫氰熒光素（FITC）發(fā)黃綠熒光，用羅丹明（TMRITC）發(fā)紅色熒光。2．放射免疫分析法 放射免疫分析法（radioimmunoassay RIA）應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的原理，應(yīng)作放射性同素標(biāo)記抗原（或抗體）與相應(yīng)抗體（或抗原）結(jié)合，通過(guò)測(cè)定抗原抗體結(jié)合物的放射活性判斷結(jié)果，本方法可進(jìn)行超微量分析，敏感性高，可用于測(cè)定抗原、抗體、抗原抗體復(fù)合物。非標(biāo)記的抗原越多，標(biāo)記抗原與抗體形成的復(fù)合物越少。測(cè)定固相載體的放射活性，常用的固相載體有溴化氰（CNBr）海豹化的紙片或聚苯乙烯小管（圖7）。常用于標(biāo)記的酶有辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶（alkaline phosphatase）等。前者測(cè)定細(xì)胞表面抗原或組織內(nèi)的抗原；后者主要測(cè)定可溶性抗原或抗體?？捎瞄g接法、雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原或抗體。（3）BASELISA：近年來(lái)對(duì)酶免設(shè)分析法的改進(jìn)是使用生物素親合素過(guò)氧化物酶復(fù)合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感度。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。表 免疫學(xué)測(cè)定方法敏感性比較測(cè)定方法敏感性（每升）單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)＜1～2mg雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)＜1mg火箭電泳＜對(duì)流電泳＜免疫電泳＜5～10mg凝集試驗(yàn)1μg被動(dòng)血凝試驗(yàn)1μg血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)放射免疫分析法＜1pg酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)＜1ng定量免疫熒光分析＜1pg。因此大提高檢測(cè)的敏感度。一個(gè)親合素（avidin）分子可以結(jié)合4個(gè)生物素分子（biotin）。間接法（indirecr ELISA）常用于檢查特異抗體。圖8 生物素－酶標(biāo)親合素系統(tǒng)反應(yīng)示意圖（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）:是與上述固相RIA相似的原理，將抗原或抗體吸附在固相載體表面。這些酶具有一定的穩(wěn)定性，制成酶標(biāo)抗體可保存較長(zhǎng)時(shí)間。3．酶聯(lián)免疫分析法 酶聯(lián)免疫分析法（enzyme immunoassay,EIA）是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的免疫檢測(cè)方法。預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)的非標(biāo)記抗原作成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)后，即可查出待檢標(biāo)本中胰島素的含量（圖6）。放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種：（1）液相法：將待檢標(biāo)本（例如含胰島素抗原）與定時(shí)的同位素標(biāo)記的胰島素（抗原）和定時(shí)的抗胰島素抗體混合，經(jīng)一定作用時(shí)間后，分離收集抗原抗體復(fù)合物及游離的抗原，測(cè)定這兩部分的放射活性，計(jì)算結(jié)合率。對(duì)淋巴細(xì)胞亞類(lèi)鑒定起著巨大推動(dòng)作用。除微生物學(xué)方面的應(yīng)用外，還可利用單克隆抗體鑒定淋巴細(xì)胞的亞類(lèi)。（2）間接熒光法：可克服直接法需制備多種熒光抗體的復(fù)雜操作。本方法可用于定性、定量或定位檢測(cè)。如不出現(xiàn)溶血，表明檢測(cè)系統(tǒng)中有抗原抗體復(fù)合物并結(jié)合補(bǔ)體，則指示系統(tǒng)無(wú)多余的補(bǔ)體作用而沒(méi)有溶血現(xiàn)象，即為陽(yáng)性。本法包括兩個(gè)抗原抗體系統(tǒng)。2．補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)各種有核細(xì)胞與針對(duì)其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復(fù)合物能活化反應(yīng)中的補(bǔ)體，引起細(xì)胞膜穿孔，在一定時(shí)間內(nèi)，細(xì)胞
研究報(bào)告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1