【正文】 準確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，然后在室溫25℃ 提取 48h，然后按照上述所作 (按照 對微波萃取 的 描述 )。 準確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，裝上回流提取裝置，隨后提取 ， 然后 按照上述所作 (按照 對微波萃取 的 描述 )。 準確地稱量 ，至于錐形瓶中， 加入 25mL70%乙醇，密封后至于超聲波清潔 器，在室溫 25℃ 超聲提取 。微波提取后，提取液在 11000rpm下離心分離 30min。馬齒莧中黃酮提取的五種方法如下： 準確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，密封后至于微波分解系統(tǒng)中提取。 黃酮類化合物的提取 提取之前，馬齒莧用多功能植物粉碎機進行粉碎。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (RE52CS、上海、中國 )，被用來濃縮提取液。高速離心機 (TGL16C、上海 、 中國 )，其是在相分離中使用的。整個研究過程中要使用蒸餾水。 35 藥品和儀器 ：標準物質(zhì)蘆丁 (97%)購買至國藥化學試劑的有限公司 (中國 )。 樣品制備 新鮮的樣品用水清洗 ,一些樣分為根、莖、葉進行研究。中醫(yī)的樣品被收集于 2021年 8月 ,另一種中藥樣品被收集是在 2021年 7月。 材料和方法 采集的樣本 為了研究馬齒莧中黃酮含量，采集不同月份的三種馬齒莧作為實驗材料。在研究中，介紹一種簡單顯色方法。在這種方法中，直接測量和顯色法是常用的方法。在這些方法中，只有分光光度法能測定總黃酮的總量。在目前的研究中，微波萃取法，這種簡單、有效的方法已被發(fā)展出來，與此同時，微波萃取法優(yōu)勢顯示了出來。本文中應(yīng)用壓力自控系統(tǒng)微波分解方法提取黃酮類化合物。微波萃取似乎有希望達到目的。不幸的是，應(yīng)用這種方法，黃酮不能被充分的提取，是由于提取的雜質(zhì)很多，提取時間長，這些因素限制這種提取方法。 (Jin et al. 2021。 傳統(tǒng)上，馬齒莧中黃酮的提取通常應(yīng)用鹵制提取和回流提取。在醫(yī)學和食品工業(yè)上，提取和分離具有高生物活性、高含量的黃酮類化合物是至關(guān)重要。據(jù)報道，在馬齒莧中發(fā)現(xiàn)了 7種黃酮類化合物，包括：槲皮素、山奈酚、木犀草素、楊梅酮、木犀草素、染料木黃酮 (Chen et al. 2021。 最近，黃酮類化合物在醫(yī)學的發(fā)展和食品領(lǐng)域成為一個非常熱門的研究方向。 Zhang et al. 2021。 Shao et al. 2021。 De Souza et al. 2021。 在中藥材的許多有效成分中， 黃酮類化合物是其中一種最受關(guān)注的化合物。 Yazici et al. 2021。作為一種中藥，馬齒莧是很重要的，因為其特殊的醫(yī)療功能，傳統(tǒng)上它一直被用作用于治療痢疾和血便和外部為起泡、潰瘍、濕疹、丹毒、昆蟲和蛇咬傷 (Chen et al. 2021。 Garti et al. 1999)。八種不同產(chǎn)地的馬齒莧進行調(diào)查分析，黃酮類化合物的總含量 ,是 、 、 、 、 、 、 、 。在最佳工藝條件下 , 分析物的校準曲線線性相關(guān)系數(shù)大于與 。最佳提取條為 70%乙醇濃度 (v/v)、固液比 1:50、提取溫度 50℃ 和輻照時間是 9 分鐘 。對比研究五種提取方法馬齒莧中黃酮類黃酮類化合物，包括：微波萃取法、超聲波法、索氏提取法、回流提取法提取、和鹵制提取。 33 附 錄 A 英文 譯 文 研究不同提取方法提取馬齒莧中的黃酮類化合物及應(yīng)用紫外 — 可見分光光度計對其進行測定 朱洪斌，王玉枝，劉宇軒，夏亞林，唐天 收到： :： 施普林格 +商業(yè)媒體科學 ,LLC 2021 年 摘要 在中國 馬齒莧是一種傳統(tǒng)的食用和藥用植物。 同 時，要感謝在 實驗開展的過程中，給予了大力幫助的周艷軍老師、王利卿老師、 王歡 、趙永華老師和唐克老師，感謝實驗室的各位學哥、學姐的關(guān)懷，感謝這一學期中，給予支持與幫助的同學、朋友。 31 參 考 文 獻 [1]. 呂翠婷 , 黎海彬 , 李續(xù)娥 , 郭寶江 . 中藥決明子的研究進展 [J]. 食品科技 , 2021, 8: 295298. 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Methods, 200,3:90– 97 32 致 謝 本文的研究工作是在我的導(dǎo)師郭潔老師的悉心指導(dǎo)下完成的。 (3). 單因素實驗中，浸提劑 乙醇濃度為 75％提取率最高；浸提溫度為 80℃ 時提取效率最高； 料液比、浸提時間實驗中，綜合考慮成本 等因素選取料液比為 1:30，提取時間。 試驗結(jié)果表明： (1). 以蘆丁為標準物質(zhì)，測定了 0~6μg/mL濃度范圍內(nèi)的吸光度。 黃酮含量的測定應(yīng)用可見 分光光度計測得吸光度。所選取的工藝條件：浸提液乙醇濃度、浸提溫度、料液比 (g:mL)、浸提時間 。 再對乙醇濃度、提取溫度、料液比、提取時間四個因素進行方差分析，其結(jié)果見下表 29 38 表 38 方差分析結(jié)果 因素 偏差平方和 自由度 F 比 F 臨界值 顯著性 乙醇濃度 2 溫度 2 料液比 2 時間 2 誤差 8 由表 38可知，在乙醇濃度、溫度、料液比、時間 4個影響條件，在本實驗范圍內(nèi)，以黃酮提取率為評價指標結(jié)合級差分析，各因素提取效果的影響程度依次為 C(料液比 )D(提取時間 )A(乙醇濃度 )B(固液比 )，其中料液比對決明子中黃酮的提取率影響最大。所以，直觀分析表明決明子中黃酮的提取實驗中，黃酮提取率最高的實驗方案為 A2B2C3D3， 即以 75％乙醇為提取劑， 80℃ 下提取，提取時間 ，料液比 1:30， 這一結(jié)論與單因素實驗基本吻合。 表 37 正交實驗結(jié)果 乙醇濃度 /% 提取溫度 /℃ 料液比 /g:ml 提取時間 /h 實驗結(jié)果 /% 實驗 1 1 1 1 1 實驗 2 1 2 2 2 實驗 3 1 3 3 3 （續(xù)表） 乙醇濃度 /% 提取溫度 /℃ 料液比 /g:ml 提取時間 /h 實驗結(jié)果 /% 實驗 4 2 1 2 3 實驗 5 2 2 3 1 實驗 6 2 3 1 2 實驗 7 3 1 3 2 實驗 8 3 2 1 3 實驗 9 3 3 2 1 均值 1 均值 2 均值 3 極差 由 表 37可見，乙醇濃度 A以 A2最好，因時間所在列的均值 1，均值 2，均值 3以均值 2最大。 料液比的影響 實驗過程中應(yīng)用 1: 1: 1:2 1: 1:35(g:mL)， 5 種不同的料液比，提取條件為75%的乙醇為提取劑，回流提取時間為 ，提取溫度為 80℃ ，結(jié)果見表 36 圖 36 料液比 的影響 料液比 (g:mL) 吸光度 A 提取率 (%) 黃酮濃度 (μg/mL) 1:10. 1:20 1:25 1:30 （續(xù)表） 料液比 (g:mL) 吸光度 A 提取率 (%) 黃酮濃度 (μg/mL) 1:35 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 505060708090100黃酮提取率/% 料液比 /g :m L 1: 10 1: 20 1: 25 1: 30 1: 350510152025303540 黃酮提取率 /% 黃酮濃度 / μ m /m L黃酮濃度/μm/mL 圖 36 料液比的影響 28 根據(jù)圖 36可知，黃酮提取率隨提取劑量的增大而增大，這是因為乙醇用量越大，可溶解的黃酮也就越大，但當固液比達到 1:20后，提取率增大的趨勢不是很明顯，因此，考慮到采用較大的固液比時，不僅增加了乙醇的用量，還增大了后續(xù)工序的難度，最終導(dǎo)致生產(chǎn)成本的增加，故選用 l:20的固液比作為最優(yōu)值。原因是隨著提取時間增加，黃酮提取量隨之增加，時間增加到一定程度后，黃酮的浸出量幾乎達到飽和，因此提取液中黃酮含量在 。 提取時間的影響 實驗過程中分別選取提取時間 、 、 、 、 ， 提取劑濃度為 75%，提取溫度為 75℃ ，料液比為 1:20，結(jié)果如表 35。 26 其原因是達的 90℃ 時提取劑呈現(xiàn)沸騰狀，提取劑有一定損失。 25 提取溫度的影響 實驗中選取 60、 70、 80、 90℃ ， 4個不同提取溫度，其他提取條件選取 75%的乙醇為提取劑，回流提取時間為 ，料液比為 1:20，結(jié)果見下表 34 圖 34 提取溫度的影響 提取溫度 (℃ ) 吸光度 A 提取率 (%) 黃酮濃度 (μg/mL) 60 70 80 90 提取溫度 對 黃酮的提取率的影響效果見圖 34 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 1006065707580859095100 黃酮提取率/% 黃酮提取率 /% 黃酮濃度 / μ m /m L提取溫度 / ℃0510152025303540黃酮濃度/μm/mL 圖 34 提取溫度的影響 根據(jù)圖 34可知提取溫度在 60℃ 到 80℃ 之間， 決明子 中黃酮的提取率隨著溫度的升高呈現(xiàn)明顯的增大的趨勢，分析其原因可能是因為提取溫度越高，分子擴散速度加快，有利于細胞內(nèi)黃酮的溶解浸出，故認為 80℃ 為最佳提取溫度。原因是當乙醇濃度為 75％時，溶液的極 性與決明子中黃酮的極性最為接近， 另一原因是 當乙醇體積濃度超